【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于引物纯化，具体涉及一种改进的引物纯化方法。
技术介绍
1、引物是一小段单链dna或rna，是人工合成的寡核苷酸序列，可作为dna复制的起始点，被广泛应用于聚合酶链反应、测序和基因合成等，其合成方法基本为固相亚磷酰胺三酯法，在碱性条件下进行处理，可从固相载体上切割洗脱回收粗产物，粗产物中除了包含目标长度的引物外，还有合成反应过程中产生的错误片段、脱保护基团时产生的杂质盐类以及合成过程中剩余的少量杂质等，它们的存在直接影响引物产品的质量，因此引物的纯化过程非常重要，目前引物常用的纯化方式主要有rpc、page、hplc等，需要多步加样及过柱操作进行纯化，纯化效率低，步骤繁琐，并且对于比引物片段短的小片段不能进行有效的去除，对后续实验造成影响，因此提供一个简单、高效、经济、能去除小片段核酸序列的引物纯化方法是目前要解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种改进的引物纯化方法，以解决引物纯化效率低、不能有效去除小片段核酸序列的技术问题。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、一种改进的引物纯化方法，包括以下步骤：
4、第一步、向气相氨解仪中通入氨气、水蒸气，加入合成引物，在气相氨解环境下进行氨解反应，得到反应初产物；
5、其中，合成引物连接在固相载体上，氨气、水蒸气的体积比为1：3，氨解反应压强为380-420pa，温度为80-90℃，反应时间为1-1.5h，在氨气的作用下，引物上的各种保护官
6、第二步、将反应初产物、羧基氧化硅磁珠、无菌超纯水、nac l溶液、聚乙二醇溶液充分涡旋振荡5-6min，室温下静置10-12min，在磁分离架上磁分离1-2min，去除上清液，得到产物a；
7、其中，反应初产物、羧基氧化硅磁珠、无菌超纯水、nac l溶液、聚乙二醇溶液的用量比为10ul：0.6-0.7mg：20ul：5ul：5ul，nac l溶液的浓度为2.5m，聚乙二醇浓度为500mg/ml，羧基氧化硅磁珠表面壳层可被羧基所修饰，形成具有功能化的羧基氧化硅磁珠，在高浓度盐溶液和高浓度聚乙二醇的作用下，羧基氧化硅磁珠成为固相可逆结合载体，其他生物大分子会溶解在溶液中，引物由卷曲状转变为球状，形成沉淀，引物沉淀通过碱基与羧基相互作用结合到羧基氧化硅磁珠的表面，达到对引物吸附纯化的目的。
8、第三步、将产物a用乙醇溶液洗涤两次后在真空泵中抽真空1-2min，并在55-60℃烘箱中反应2-3min，得到产物b；
9、其中，乙醇溶液的体积分数为75％-80％，利用乙醇溶液去除羧基氧化硅磁珠上的聚乙二醇及nac l溶液，利用真空和烘箱除去乙醇溶液。
10、第四步、向产物b中加入te buffer，ph值为8，充分涡旋振荡5-6min，在55-60℃烘箱中反应8-10min，在磁分离架上磁分离1-2min除去羧基氧化硅磁珠，收集纯化后的引物；
11、其中，te buffer的加入量为产物b体积的1.5倍，降低离子浓度后，引物可以由球状转变为卷曲状，因此，在低离子浓度缓冲液te buffer的作用下，引物从羧基氧化硅磁珠表面脱附下来，从而得到了高纯度的引物。
12、本专利技术的有益效果：
13、本专利技术利用聚乙二醇、盐溶液、羧基氧化硅磁珠对反应初产物进行进一步的分离，试剂环保，经济安全，能有效的减少样品间的交叉污染，并且可以高效的将样品从磁珠中分离出来，步骤简单，耗时少，有利于保持引物的完整度，可大规模的对核酸进行分离纯化，而且不同的聚乙二醇浓度可以特异性的吸附不同大小的核酸片段，因此可以有效的去除比引物还短的核酸链，纯度和灵敏度较高，可直接用于其他分子生物学实验。
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1.一种改进的引物纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第一步中氨气、水蒸气的体积比为1：3。
3.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第一步中氨解反应压强为380-420pa，温度为80-90℃，反应时间为1-1.5h。
4.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第二步中反应初产物、羧基氧化硅磁珠、无菌超纯水、NaCl溶液、聚乙二醇溶液的用量比为10uL：0.6-0.7mg：20uL：5uL：5uL。
5.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第二步中NaCl溶液的浓度为2.5M，聚乙二醇浓度为500mg/mL。
6.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第三步中乙醇溶液的体积分数为75％-80％。
7.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第四步中TE bufferpH值为8，加入量为产物B体积的1.5倍。
8.根据权利要求1所述的一种改进的引
...【技术特征摘要】
1.一种改进的引物纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第一步中氨气、水蒸气的体积比为1：3。
3.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第一步中氨解反应压强为380-420pa，温度为80-90℃，反应时间为1-1.5h。
4.根据权利要求1所述的一种改进的引物纯化方法，其特征在于，第二步中反应初产物、羧基氧化硅磁珠、无菌超纯水、nacl溶液、聚乙二醇溶液的用量比为10ul：0.6-0.7mg：20ul：5ul：5ul...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘宗文，雍金贵，刘奇，刘倩，何佳月，汤雨，陈娟，
申请(专利权)人：通用生物安徽股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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