一种水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法技术

本发明专利技术提出了一种水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，属于种子鉴定技术领域。包括：S1.通过ECOR1和KPN1连接荧光基因，特异表达红色荧光蛋白载体；S2.选米、脱米、洗米、摆米、拔米；S3.LB菌板的倒置；S4.挑选愈伤组织，浸泡，取出，暗培养，清洗；S5.将愈伤组织暗培养，换板，暗培养，挑出，干燥；S6.将干燥好的愈伤组织光照培养，换板，生根，获得转基因水稻单倍体诱导系；S7.将获得的转基因水稻单倍体诱导系和其它育种材料杂交产生种子，筛除二倍体种子，用荧光观察镜观察种子颜色，筛除具有红色荧光的二倍体种子。本发明专利技术能快速筛选出水稻单倍体种子，筛选过程简单高效，可操作性强，成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及种子鉴定，具体涉及一种水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法。

技术介绍

1、自从在田间发现玉米单倍体诱导系以来，科学家就一直在探索玉米单倍体诱导系诱导单倍体产生的机制，如创制单倍体诱导系遗传群体，利用qtl分子技术将玉米单倍体诱导系诱导单倍体产生的相关基因进行粗和精细定位(deimling等，1997；等，1999；barret等，2008；x.dong等，2017)，随着基因组重测序技术的发展和测序成本的不断下调，在全基因组层面上对基因进行qtl分析成为可能(prigge等，2012)。最近国外和国内对玉米单倍体诱导系的研究证明玉米精子细胞特异表达的脂肪酶基因的插入片段突变是诱导系具有单倍体诱导功能的基础(timothy kelliher等，2017，chenxu liu等，2017)，而且脂肪酶基因在进化上相对保守(timothy kelliher等，2017)。这些研究对其它重要作物诱导系创制奠定了理论基础。

2、水稻crispr/cas9基因编辑技术和水稻转基因技术相对成熟，为水稻单倍体田间生产奠定了技术基础。...

【技术保护点】

1.一种水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤S1中所述荧光基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤S1中所述荧光基因表达的荧光蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤S1中所述载体为pcambia1300。

5.根据权利要求1所述水稻单倍体...

【技术特征摘要】

1.一种水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤s1中所述荧光基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤s1中所述荧光基因表达的荧光蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。

4.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤s1中所述载体为pcambia1300。

5.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤s2中所述洗米依次用的75％酒精、30％次氯酸钠溶液、0.15％氯化汞溶液洗涤。

6.根据权利要求2所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，所述75％酒精的配方为无水乙醇375ml+125ml纯水；所述30％次氯酸钠溶液的配方为50μl曲拉通+150ml次氯酸钠溶液+350ml纯水；所述0.15％氯化汞溶液的配方为0.75g氯化汞+500ml纯水。

7.根据权利要求1所述水稻单倍体诱导系诱导产生的单倍体种子鉴定方法，其特征在于，步骤s2中拔...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄安平，
申请(专利权)人：湖南省农业生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：