用于胃癌外周循环上皮细胞检测的试剂盒制造技术

一种用于胃癌外周循环上皮细胞检测的试剂盒，该试剂盒可用于胃癌外周循环上皮细胞的检测

【技术实现步骤摘要】
用于胃癌外周循环上皮细胞检测的试剂盒


[0001]本专利技术涉及细胞生物学领域，特别是胃癌体外诊断领域，具体地说，涉及一种用于胃癌外周循环上皮细胞检测的试剂盒
。

技术介绍

[0002]胃癌在中国的发病率和死亡率均居高不下，在所有肿瘤中发病率和死亡率均排在所有肿瘤第二位
。
当前需要不断优化和升级治疗方案来提高胃癌治疗的效果，因此精准治疗应运而生
。
精准治疗的概念于
2015
年被提出，是一种将个人基因
、
环境与生活习惯差异考虑在内的疾病预防与处置的新兴方法
。
原有治疗方法以胃癌分期作为指导，各个分期都有对应的临床用药建议
。
而胃癌精准医疗在原有治疗方案的基础上，对肿瘤进行更为精准的靶向治疗，提高患者生存期
。
此时需要对肿瘤进行更为详细的临床检测分析，即伴随诊断
。
传统诊断将主要工作集中在胃癌的确诊和分型，将患者分为几个类型，每个类型有对应的治疗方案；而伴随诊断更关注胃癌确诊后的靶向药物筛选和患者疾病监控，将每个患者看作一个独立的个体，给患者明确的靶向用药指导
、
治疗效果评估
、
耐药评价
、
生存期预测等信息
。
在伴随诊断的临床研究中，主要对治疗靶点以及可能影响药物作用的基因，进行扩增水平
(
基因拷贝数
、
基因突变
)
以及表达水平
(
>转录水平和翻译水平
)
检测，根据检测样本的不同又分为组织活检
(Tissue biopsy)
和液体活检
(Liquid biopsy)。
近年来，液体活检由于其快速检测
、
无创取样
、
短时间内可重复取样等特点受到广泛关注
。
有大量的报道表明，液体中的循环肿瘤细胞检测结果与组织活检的结果具有很好的相关性，为循环肿瘤细胞检测提供了临床应用潜质
。
[0003]当前的循环肿瘤细胞技术多为广谱应用，但是实际使用中发现通用型检测方法对每个癌肿中的灵敏度和特异性不一致
。
因此需要对每个重要癌肿单独设计检测方法
。
而现有技术中没有专门用于胃癌的外周循环上皮细胞的灵敏度和特异性的检测方法
。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供的一种专门用于胃癌的外周循环上皮细胞检测方法，该方法通过对胃癌的循环肿瘤细胞的检测，特别是对胃癌外周循环上皮细胞的检测，能够更灵敏和更特异地专门检测胃癌
。
[0005]本专利技术提供了一种更加灵敏
、
特异的胃癌外周循环上皮细胞检测试剂盒
。
[0006]在本专利技术的第一方面，提供了一种用于胃癌外周循环上皮细胞的检测试剂盒，其采用一种以上检测指标对胃癌外周循环上皮细胞进行识别，所述一种以上检测指标包括
CK8
和
CK19
，或者由
CK8
和
CK19
组成
。
[0007]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的检测试剂盒使用荧光显微镜对所述一种以上检测指标进行检测，根据荧光强度确定所述胃癌外周循环上皮细胞
。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的检测试剂盒采用的样品为外周血，所述外周血包含白细胞
、
血细胞和血小板
。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的检测试剂盒使用
CK8
和
CK19
抗体的混合抗体识别所述胃癌外周循环上皮细胞，使用
CD45
抗体识别血液中的白细胞，使用
DAPI
识别血液中的有核细胞，荧光显微镜的明场识别细胞的完整度
。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的检测试剂盒中，当细胞内
CK8
和
CK19
混合抗体检测阳性，
CD45
检测阴性，
DAPI
检测阳性，
DAPI
染色面积大于
20
μ
m2，并且明场显示细胞无破损时，识别为所述胃癌外周循环上皮细胞
。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的检测试剂盒的使用方式包括：
[0012]在
CK8
和
CK19
抗体上标记荧光基团，使用荧光显微镜识别细胞内的荧光强度，
[0013]通过细胞中不同抗体识别的荧光强度，确定细胞内各个抗体的相对含量，
[0014]当荧光强度高于或等于预定的阈值时，即为阳性检测结果；当荧光强度低于预定的阈值时，即为阴性检测结果
。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，本专利技术的检测试剂盒中：
[0016]白细胞为
CK8
和
CK19
混合抗体检测阴性，
CD45
检测阳性，
DAPI
检测阳性；
[0017]血细胞为
DAPI
检测阴性；并且
[0018]血小板为无完整细胞结构
。
[0019]与现有的通用型外周循环肿瘤细胞检测试剂盒相比，本试剂盒增加了
DAPI
识别面积
、
明场识别细胞完整度的检测指标，并将通用型方法中的
CK7、CK8、CK18、CK19、CK20
的抗体混合液更改为更加适配于胃癌外周循环上皮细胞检测的
CK8、CK19
抗体混合液
。
附图说明
[0020]图
1CK20
在各细胞中的荧光强度图；
[0021]图2细胞系中
CK7、8、19
分别测试统计结果；
[0022]图3细胞系中
CK8+CK19
测试结果；
[0023]图4本测试方法的实际细胞水平应用结果，其中，左图：
CK8+CK19
混合抗体的测试结果，中图：
CD45
抗体的测试结果，右图：细胞核染色结果；
[0024]图5健康人检测结果，其中，显示出
DAPI
阳性，
CK
阴性，
CD45
阳性，细胞表面完整；
[0025]图6胃癌患者检测结果，其中，显示出
DAPI
阳性，
CK
阳性，
CD45
阴性，细胞表面完整
。
具体实施方式
[0026]为了使本专利技术的目的
、
技术方案及优点更加清楚明白，下面结合具体实施实例，对本专利技术进行进一步说明
。
但是，应当理解，此处描述的具体实例仅仅用于解释本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于胃癌外周循环上皮细胞的检测试剂盒，其特征在于：采用一种以上检测指标对胃癌外周循环上皮细胞进行识别，所述一种以上检测指标包括
CK8
和
CK19
，或者由
CK8
和
CK19
组成
。2.
如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：使用荧光显微镜对所述一种以上检测指标进行检测，根据荧光强度确定所述胃癌外周循环上皮细胞
。3.
如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：采用的样品为外周血，所述外周血包含白细胞
、
血细胞和血小板
。4.
如权利要求1至3中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于：使用
CK8
和
CK19
抗体的混合抗体识别所述胃癌外周循环上皮细胞，使用
CD45
抗体识别血液中的白细胞，使用
DAPI
识别血液中的有核细胞，荧光显微镜的明场识别细胞的完整度
。5.
如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于：当细胞内

【专利技术属性】
技术研发人员：范林洋，柴宣宣，
申请(专利权)人：桐庐纳泰医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：