锚定制造技术

本发明专利技术涉及生物工程领域，具体涉及锚定

【技术实现步骤摘要】
锚定ERR
γ
‑
LBD的乳酸乳球菌颗粒及其制备与应用


[0001]本专利技术属于生物工程领域，具体涉及锚定
ERR
γ
‑
LBD
的乳酸乳球菌颗粒及其制备与应用
。

技术介绍

[0002]双酚
A(BPA)
是一种具有抗雄激素作用和类雌激素样作用的环境内分泌干扰物，其广泛用于食品包装材料
、
水管和锡罐中，而
BPA
会在高温
、
酸性和碱性条件下污染水和食物
。
因此，人们在日常生活中不可避免地会经肠道吸收
BPA
，在人体组织和液体包括血液
、
母乳和尿液中都曾检测到不同剂量的
BPA。BPA
作为内分泌干扰物会导致一系列疾病，如支气管炎
、
肺炎
、
肝病
、
肾病以及各种皮肤和粘膜疾病
。
同时，研究证实
BPA
会刺激肝脏
、
大脑
、
肾脏的氧化应激，增强炎症因子和凋亡基因的表达
。
因此，预防
BPA
引发的机体损伤对人类健康具有重大意义
。
[0003]饮食是
BPA
进入人体的主要途径之一
。
研究表明，通过饮食进入人体的
BPA
可以通过肠肝轴
、
肠睾轴等肠器官轴对肝脏r/>、
生殖系统等造成影响，因此肠道是影响
BPA
危害人体健康的关键部位
。
清除肠道中尚未被人体吸收的
BPA
，有利于阻止
BPA
通过肠器官轴侵入体内，更可直接降低人体中
BPA
的含量，从而更有效地避免
BPA
引起疾病
。
[0004]生物吸附法是物质通过共价
、
静电或分子力的作用吸附在生物体表面的方法
。
近几年，该方法已应用于体内重金属的吸附清除
。
但是，有关利用吸附法对肠道内
BPA
吸附清除的相关报道尚未发现
。
雌激素相关受体
γ
(ERR
γ
)
是雌激素相关受体
(ERR)
亚家族的一个成员
。
研究表明，
BPA
及其类似物可以与
ERR
γ
配体结合结构域
(ERR
γ
‑
LBD)
进行特异性结合，且
BPA
与
ERR
γ
有强结合力，
IC50
值达到了
9.78
±
0.87。
但采用直接利用
ERR
γ
‑
LBD
蛋白吸附
BPA
的方法，存在蛋白纯化步骤复杂
、
生产成本高
、
容易降解以及稳定性差的问题，而且当该蛋白用于人体时，还会面临消化系统中胃酸腐蚀以及蛋白酶降解的问题
。
[0005]乳酸乳球菌
(LAB)
是全球公认的安全益生菌，在自然界和人体肠道中广泛存在
。
与其他细菌相比，
LAB
可以在胃酸等一些极端的环境下存活并且保持活性
。
因此，使用
LAB
递送外源蛋白在生物技术应用如疫苗研制
、
药物递送
、
基因治疗等领域都很有前景
。
[0006]鉴于此，开发利用乳酸乳球菌锚定
ERR
γ
‑
LBD
蛋白，以期吸附肠道中的双酚
A
后经消化系统排出体外，从而减少由双酚
A
暴露引起的损伤，具有十分重要的意义
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的正是针对上述技术现状，提供一种锚定
ERR
γ
‑
LBD
蛋白的可清除肠道
BPA
的食品级乳酸乳球菌颗粒制备方法
。
[0008]为实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案来实现：
[0009]本专利技术提供了一种锚定
ERR
γ
‑
LBD
的乳酸乳球菌颗粒的制备方法，包括如下步骤：
[0010](1)
将
ERR
γ
‑
LBD
基因与
acmA
基因通过
linker
拼接起来，得到重组基因
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
；
[0011](2)
将重组基因
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
与表达载体
pET
‑
20b
连接，得到重组载体
pET20b
‑
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
；
[0012](3)
将重组载体
pET20b
‑
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
转化至大肠杆菌感受态细胞，得到工程菌；
[0013](4)
将工程菌以异丙基硫代半乳糖苷
IPTG
诱导表达并培养，得到重组蛋白
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
；
[0014](5)
将重组蛋白
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
锚定至乳酸乳球菌颗粒表面
。
[0015]进一步地，在所述步骤
(1)
中，
ERR
γ
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，
acmA
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示，
linker
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：3所示
。
[0016]进一步地，在所述步骤
(4)
中，工程菌以异丙基硫代半乳糖苷
IPTG
诱导表达并培养的具体步骤为：将工程菌接种于含氨苄青霉素
Amp
的液体
LB
培养基中进行扩大培养，当
OD
600
达
0.4
‑
0.6
时，加入终浓度为<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种锚定
ERR
γ
‑
LBD
的乳酸乳球菌颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
将
ERR
γ
‑
LBD
基因与
acmA
基因通过
linker
拼接起来，得到重组基因
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
；
(2)
将重组基因
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
与表达载体
pET
‑
20b
连接，得到重组载体
pET20b
‑
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
；
(3)
将重组载体
pET20b
‑
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
转化至大肠杆菌感受态细胞，得到工程菌；
(4)
将工程菌以异丙基硫代半乳糖苷
IPTG
诱导表达并培养，得到重组蛋白
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
；
(5)
将重组蛋白
ERR
γ
‑
LBD
‑
acmA
锚定至乳酸乳球菌颗粒表面
。2.
根据权利要求1所述的锚定
ERR
γ
‑
LBD
的乳酸乳球菌颗粒的制备方法，其特征在于，在所述步骤
(1)
中，
ERR
γ
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：1所示，
acmA
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：2所示，
linker
的核苷酸序列如
SEQ ID NO
：3所示
。3.
根据权利要求1所述的锚定
ERR
γ
‑
LBD
的乳酸乳球菌颗粒的制备方法，其特征在于，在所述步骤
(4)
中，工程菌以异丙基硫代半乳糖苷
IPTG
诱导表达并培养的具体步骤为：将工程菌接种于含氨苄青霉素
Amp
的液体
LB
培养基中进行扩大培养，当
OD
600
达
0.4
‑
0.6
时，加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭建全，牛亚丽，杨李阳，刘良坡，
申请(专利权)人：山西医科大学，
类型：发明
国别省市：