一种引物组合物及其应用制造技术

本申请公开了一种引物组合物及其应用，所述引物组合物包含

【技术实现步骤摘要】
一种引物组合物及其应用


[0001]本申请属于生物检测
，具体涉及一种引物组合物及其应用
。

技术介绍

[0002]尿路上皮细胞癌是起源于尿路上皮的恶性肿瘤
。
尿路系统包括肾盂
、
输尿管
、
膀胱
、
尿道，发生在尿路不同部位上皮肿瘤有共性，并可能在上述部位多器官发病，以膀胱癌最为常见
。
全球范围内发病率位居所有恶性肿瘤第
11
位，其中男性发病率为
9.0/10
万，位列男性恶肿瘤的第7位；女性为
2.2/10
万，位列女性十位之后；死亡率位居所有肿瘤的第十三
。
尿路上皮细胞癌发病率存在地区性
、
种族性及性别的差异，可见于各年龄段，高发年龄为
50
～
70
岁，随着年龄的增加，发病率也逐渐增加
。
[0003]膀胱癌的诊断须依据患者病史
、
症状及体征，结合实验室检查
、
影像学检查
、
尿细胞学及尿肿瘤标记物检查
、
膀胱镜检查做出临床诊断
。
膀胱镜是最重要的检查，通过膀胱镜下进行病理检查是诊断膀胱癌的金标准，结合上尿路的影像学检查了解是否合并肾盂和
(
或
)
输尿管肿瘤
。
尿液相关的检查包括尿脱落细胞学检查和尿肿瘤标志物检测
。
[0004]由于膀胱镜入侵性大，为膀胱癌患者带来了较大的痛苦，对于发病部位位于上尿路的尿路上皮细胞肿瘤，尚无理想的检测手段
。MicroRNAs(miRNA)
是一类新发现的非编码
RNA
，它通过序列专一性地结合到和它互补反义的
mRNA
的
3'
非编码区
(3's UTR)
来调控某个或某些目标
mRNA
转录及稳定性
。miRNA
在生长
、
分裂
、
分化
、
发育
、
凋亡及疾病的发生等众多生物学活动中起着极其重要的作用
。
[0005]因此，有必要开发诊断试剂盒
(
尤其是
miRNA
诊断试剂盒
)
用于尿路上皮细胞癌
、
尤其是早期尿路上皮细胞癌检测与筛查，指导尿路上皮细胞癌治疗与用药，和预后评估，这将具有重要的医学意义与应用前景
。

技术实现思路

[0006]本申请的目的在于提供一种可用于检测尿液中
miRNA
表达水平的引物组合物及其应用
。
[0007]本申请为解决上述技术问题，提出了如下技术方案：
[0008]本申请第一方面提供了一种引物组合物，其包含
hsa
‑
miR
‑
133a、hsa
‑
miR
‑
141、hsa
‑
miR
‑
143#、hsa
‑
miR
‑
151
‑
5p、hsa
‑
miR
‑
29c、hsa
‑
miR
‑
429、hsa
‑
miR
‑
96
的至少一种的反转录引物
、
荧光定量
PCR
的正向引物
、
反向引物和探针
。
[0009]本申请第二方面提供了一种试剂盒，其包括本申请第一方面提供的引物组合物
。
[0010]本申请第三方面提供了采用本申请第一方面的引物组合物或本申请第二方面的试剂盒测定待测尿液样本中
miRNA
表达水平的用途；其中，所述
miRNA
包括
hsa
‑
miR
‑
133a、hsa
‑
miR
‑
141、hsa
‑
miR
‑
143#、hsa
‑
miR
‑
151
‑
5p、hsa
‑
miR
‑
29c、hsa
‑
miR
‑
429、hsa
‑
miR
‑
96
的至少一种
。
[0011]本申请第四方面提供了一种采用本申请第一方面的引物组合物或本申请第二方
面的试剂盒测定待测尿液样本中
miRNA
表达水平的方法，其包括以下步骤：
[0012]a)
获得所述待测个体的待测尿液样本；
[0013]b)
提取所述待测尿液样本的
RNA
；
[0014]c)
采用
SEQ ID NO.1
‑7的至少一种所示的引物对所述
RNA
进行反转录；
[0015]d)
采用步骤
c)
所使用的引物所在的引物组合的其他引物对步骤
c)
的反转录产物进行实时定量
PCR
，测定所述待测尿液样本中
miRNA
的表达水平；
[0016]其中，所述
miRNA
包括
hsa
‑
miR
‑
133a、hsa
‑
miR
‑
141、hsa
‑
miR
‑
143#、hsa
‑
miR
‑
151
‑
5p、hsa
‑
miR
‑
29c、hsa
‑
miR
‑
429、hsa
‑
miR
‑
96
的至少一种
。
[0017]本申请第五方面提供了本申请第一方面的引物组合物或本申请第二方面的试剂盒用于制备尿路上皮细胞癌诊断试剂中的用途
。
[0018]本申请第六方面提供了本申请第一方面的引物组合物或本申请第二方面的试剂盒用于诊断尿路上皮细胞癌的用途
。
[0019]本申请第七方面提供了采用本申请第一方面的引物组合物或本申请第二方面的试剂盒诊断尿路上皮细胞癌的方法
。
[0020]本申请提供了一种引物组合物，通过对7种微小核糖核酸
(micro RNA、
小
RNA
或
miRNA)
：
hsa
‑
miR
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种引物组合物，其包含
hsa
‑
miR
‑
133a、hsa
‑
miR
‑
141、hsa
‑
miR
‑
143#、hsa
‑
miR
‑
151
‑
5p、hsa
‑
miR
‑
29c、hsa
‑
miR
‑
429、hsa
‑
miR
‑
96
的至少一种的反转录引物
、
荧光定量
PCR
的正向引物
、
反向引物和探针
。2.
根据权利要求1所述的引物组合物，其包括如下引物组合1至7中的至少一种；其中，所述引物组合1包括
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.15
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合2包括
SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.16
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合3包括
SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.17
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合4包括
SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.18
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合5包括
SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.19
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合6包括
SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.20
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合7包括
SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.21
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；优选地，所述引物组合物还包括引物组合8，所述引物组合8包括
SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25
和
SEQ ID NO.22
所示的引物
。3.
根据权利要求1所述的引物组合物，其包括如下引物组合1至8；其中，所述引物组合1包括
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.15
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合2包括
SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.16
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合3包括
SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.17
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合4包括
SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.18
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合5包括
SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.19
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合6包括
SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.20
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合7包括
SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.21
和
SEQ ID NO.22
所示的引物；所述引物组合8包括
SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25
和
SEQ ID NO.22
所示的引物
。4.
一种试剂盒，其包括权利要求1‑3中任一项所述的引物组合物
。5.
根据权利要求4所述的试剂盒，其还包括用于实时定量
PCR
的反应缓冲液
、dNTPs
和
DNA
聚合酶
。6.
根据权利要求4所述的试剂盒，其还包括用于反转录的反应缓冲液
、dNTPs
和反转录酶
。7.
根据权利要求4所述的试剂盒，其还包括阳性质控品和
/
或阴性质控品；优选地，还包括说明书，所述说明书中包含
score
值计算公式：
Score
值＝
1/(1+exp(k1
×
Ct
(BCMK
‑
miR02)
+k2
×
Ct
(BCMK
‑
miR03)
‑
k3
×
Ct
(BCMK
‑
miR04)
+k4
×
Ct
(BCMK
‑
miR05)
+k5
×
Ct
(BCMK
‑
miR08)
+k6
×
Ct
(BCMK
‑
miR09)
–
k7
×
Ct
(BCMK
‑
miR10)
–
k8
×
Ct
(BCMK
‑
miR06)
+K))
；其中，
k1
的取值范围为
‑
0.0010
～
0.0010
；
k2
为
0.4929
～
0.6553
；
k3
为
0.3072
～
0.3675
；
k4
为
0.7136
～
0.9977
；
k5
为
‑
0.0010
～
0.0010
；
k6
为
‑
0.0010
～
0.1116
；
k7
为
‑
0.0010
～
0.2395
；
k8
为
0.8943
～
1.0668
；
K
为
1.7478
～
2.8581
；优选地，
Score
值＝
1/(1+exp(0.0001
×
Ct
(BCMK
‑
miR02)
+0.6254
×
Ct
(BCMK
‑
miR03)
‑
0.3466
×
Ct
(BCMK
‑
miR04)
+0.9502
×
Ct
(BCMK
‑
miR05)
+0.0001
×
Ct
(BCMK
‑
miR08)
+0.0001
×
Ct
(BCMK
‑
miR09)
‑
0.2058
×
Ct
...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴鸿菲，张奉武，朱苗骏，王海龙，谭若颖，
申请(专利权)人：上海翔琼生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：