一种胃癌生物标记物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胃癌生物标记物及其应用，该标记物为m1A去甲基化酶ALKBH3。本发明专利技术首次发现，与正常胃组织相比，胃癌组织中m1A去甲基化酶ALKBH3的RNA和蛋白水平均显著低表达，且m1A去甲基化酶RNA和蛋白水平的变化还引起了组织和细胞整体上m1A甲基化修饰水平的变化；表明m1A去甲基化酶或其编码基因能作为胃癌标记物，用于在早期快速诊断胃癌，为胃癌的早期快速诊断提供了新途径。早期快速诊断提供了新途径。早期快速诊断提供了新途径。

【技术实现步骤摘要】
一种胃癌生物标记物及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种胃癌生物标记物及其应用。

技术介绍

[0002]众所周知，非DNA序列突变也会导致可遗传的基因表达变化，这种变化在细胞分裂的过程中，有时甚至是在隔代遗传中保持稳定，但却不涉及到基本DNA的改变。
[0003]已知的表观遗传现象如DNA甲基化(DNA methylation)、RNA甲基化(RNA methylation)、基因沉默(gene silencing)、RNA编辑(RNA editing)、基因组印迹(genomic imprinting)、母体效应(maternal effects)、组蛋白翻译后修饰(HISTONE Posttranslational modification)等等。
[0004]以RNA甲基化为例，在真核生物中，m6A甲基化和m1A甲基化是在tRNA和rRNA丰度很高的一种转录后修饰，在mRNA中也大量存在，对于RNA稳定性起到重要作用，还可调控mRNA翻译。
[0005]其中，m6A甲基化(N6
‑
methyladenosine)指的是RNA腺嘌呤(A)的N6位发生的可逆性甲基化修饰，作为mRNA上丰度最高(超过80％)的化学修饰，平均每一条mRNA上含有3～5个m6A修饰位点，存在于保守序列RRACH(R＝G，A；H＝A，C or U)中。
[0006]而m1A甲基化(N1
‑
methyladenosine)指的是RNA腺嘌呤(A)的N1位发生的可逆性甲基化修饰。
[0007]RNA甲基化一个动态可逆的过程，这一过程受相关的甲基化酶和去甲基化酶所调控而维持动态平衡。RNA甲基化在维持细胞功能、胚胎发育、干细胞自我更新和分化、热休克或DNA损伤应答及肿瘤发生等病理生理过程中起着非常重要的调控作用，该机制的异化可导致基因表达的异常及其下游信号通路的失调，从而引发基因调控紊乱相关的各种疾病的发生。
[0008]因此通过监测RNA甲基化水平或相关的甲基化酶及去甲基化酶的表达水平，可以实现对某些疾病的快速、早期诊断。目前尚未有m1A去甲基化酶在胃癌发生发展中所起作用的任何报道。

技术实现思路

[0009]本专利技术的专利技术目的是提供一种胃癌生物标记物及其应用，为胃癌的早期快速诊断提供了新途径。
[0010]为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案为：
[0011]一种胃癌生物标记物，该胃癌生物标记物为m1A去甲基化酶或其编码基因。
[0012]本专利技术首次发现，与正常胃组织相比，胃癌组织中m1A去甲基化酶的RNA和蛋白水平均显著低表达，而且m1A去甲基化酶RNA和蛋白水平的变化还引起了组织和细胞整体上m1A甲基化修饰水平的变化，即，胃癌组织中m1A甲基化修饰水平显著上调。如此表明m1A去甲基化酶或其编码基因能够作为胃癌标记物，用于在早期快速诊断胃癌。
[0013]作为优选，上述的m1A去甲基化酶为ALKBH3。
[0014]本专利技术还提供了一种检测上述胃癌生物标记物表达水平的试剂，该试剂包括特异性结合m1A去甲基化酶的抗体，特异性结合m1A去甲基化酶编码基因的探针，或者特异性扩增m1A去甲基化酶编码基因的引物。
[0015]作为优选，上述的试剂包括特异性扩增ALKBH3基因的引物，该引物包括：
[0016]上游引物：5'
‑
ACTAGGGAGGTGCCCCATTA
‑
3'；
[0017]下游引物：5'
‑
TCTCTTCTGGTGGTGGCTTCT
‑
3'。
[0018]本专利技术还提供了上述试剂在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。
[0019]本专利技术还提供了检测m1A甲基化修饰水平的试剂在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。
[0020]即通过检测m1A甲基化修饰水平或m1A去甲基化酶的表达水平，均有利于癌症的辅助诊断。
[0021]与现有技术相比，本专利技术的技术效果体现在：
[0022]本专利技术首次发现，与正常胃组织相比，胃癌组织中m1A去甲基化酶的RNA和蛋白水平均显著低表达，而且m1A去甲基化酶RNA和蛋白水平的变化还引起了组织和细胞整体上m1A甲基化修饰水平的变化，即，胃癌组织中m1A甲基化修饰水平显著上调。如此表明m1A去甲基化酶或其编码基因能够作为胃癌标记物，用于在早期快速诊断胃癌，从而为胃癌的早期快速诊断提供了新途径。
附图说明
[0023]图1为正常胃组织和胃癌组织中m1A去甲基化酶基因ALKBH3的相对表达水平比较；
[0024]其中，Normal表示正常胃组织，Tumor表示胃癌组织，n表示样本数量，Relative level of ALKBH3 normalized to GAPDH表示以GAPDH为参照时，ALKBH3基因的相对表达水平；cohort Zhejiang表示从浙江大学医学院附属第一医院、浙江大学医学院附属第二医院及浙江大学医学院附属邵逸夫医院取得的新鲜胃癌组织样本；****表示P＜0.0001；下同；
[0025]图2为m1A去甲基化酶基因ALKBH3在正常胃组织和发生了癌转移的胃癌组织样本(M1期样本)中的相对表达水平比较；
[0026]图3为正常胃组织和胃癌组织中m1A去甲基化酶ALKBH3表达水平的Western blot分析结果；
[0027]其中，N表示Normal(正常胃组织)，T表示Tumor(胃癌组织)；下同；
[0028]图4为52份正常胃组织和52份胃癌组织中m1A去甲基化酶ALKBH3表达水平的统计结果；
[0029]其中，Relative expression of ALKBH3 in tissue(T
‑
N)表示组织中ALKBH3的相对表达水平(胃癌组织
‑
正常胃组织)；
[0030]图5为胃癌组织芯片1免疫组化(IHC)染色代表图；
[0031]图6为健康胃组织和胃癌组织中m1A去甲基化酶ALKBH3的染色强度比较统计图；
[0032]其中，Staining intensity of ALKBH3表示ALKBH3的染色强度，Cohort
‑
1tissue array表示包含90对配对胃癌组织样本的组织芯片1，来自浙江大学医学院附属第二医院；下同；
[0033]图7为胃癌组织芯片2免疫组化(IHC)染色代表图；
[0034]图8正常胃组织和胃癌组织中m1A去甲基化酶ALKBH3的染色强度比较统计图；
[0035]其中，Cohort
‑
2tissue array表示包含94对配对胃癌组织样本的组织芯片2，购买自Outdo Biotech公司(No.HStmA180Su18)；下同；
[0036]图9为正常胃组织和胃癌组织中整体RNA的m1A修饰水平比本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胃癌生物标记物，其特征在于，为m1A去甲基化酶或其编码基因。2.如权利要求1所述的胃癌生物标记物，其特征在于，所述的m1A去甲基化酶为ALKBH3。3.一种检测如权利要求1或2所述的胃癌生物标记物表达水平的试剂，其特征在于，包括特异性结合m1A去甲基化酶的抗体，特异性结合m1A去甲基化酶编码基因的探针，或者特异性扩增m1A去甲基化酶编码基因的引物。4.如权利要求3所述的试剂，其特征在于，至少包括特异性扩增ALKBH3基因的引物。5.如权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述的特异性扩增ALKBH3基因的引物包括：...

【专利技术属性】
技术研发人员：周天华，谢珊珊，常永霞，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：