【技术实现步骤摘要】
基于DNA
‑
铜纳米簇与HCR信号放大的CRISPR/Cas12a检测系统及其应用
[0001]本专利技术涉及生物检测，具体涉及基于
DNA
‑
铜纳米簇与
HCR
信号放大的
CRISPR/Cas12a
检测系统及其应用
。
技术介绍
[0002]杂交链式反应
(HCR)
是一种新型无酶参与的核酸聚合反应，仅由目标分子引发若干种自身稳定的
DNA
茎环结构发生级联反应产生具有切口的长链
DNA
结构，该反应属于等温扩增技术，仪器操作简单，且该技术不需要辅助酶的参与，反应条件温和，反应的重现性好
。
除外，
DNA
‑
铜纳米簇是一种能以
DNA
为模板进行即时合成的荧光纳米材料，具有价格低廉
、
合成简单
、
生物相容性好等优点
。CRISPR/Cas12a
检测技术仅需一段
RNA
和
CRISPR
相关蛋白
(Cas)
组成二元复合物就可发挥识别目标和信号放大功能，具有操作简单
、
特异性强
、
反应迅速等特点
。
然而，现有的
CRISPR/Cas12a
检测技术的荧光基团修饰报告子具有价格昂贵
、
合成复杂
、
稳定性不足等缺点，导致检...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种基于
DNA
‑
铜纳米簇与
HCR
信号放大的
CRISPR/Cas12a
检测系统，其特征在于，所述检测系统包括
DNA
‑
铜纳米簇体系
、HCR
反应体系
、CRISPR/Cas12a
识别体系；所述
HCR
反应体系包括启动链
inDNA、
两种发夹
DNA
以及沉默链
siDNA
，其中所述启动链
inDNA
包含触发
HCR
的序列；
siDNA
具备结合
HCR
反应体系中的启动链
inDNA
的能力，用于沉默
HCR
反应；当分析的目标核酸存在时，激活
CRISPR/Cas12a
识别体系，不断切割环境中的沉默链
siDNA
，结合启动链
inDNA
的
siDNA
被切割后，启动链
inDNA
触发
HCR
反应，使两种稳定共存的发夹
DNA
打开后，交替互补形成具有切口的长链
DNA
，该长链
DNA
上规律分布
poly(AT
‑
TA)
，铜原子聚集在富含
poly(AT
‑
TA)
的
DNA
链上形成
DNA
‑
铜纳米簇，发出粉红色荧光，进行荧光检测
。2.
根据权利要求1所述的基于
DNA
‑
铜纳米簇与
HCR
信号放大的
CRISPR/Cas12a
检测系统，其特征在于，所述
CRISPR/Cas12a
识别体系由
Cas12a
与
crRNA
在反应缓冲液中混合后孵育而得
。3.
一种基于
DNA
‑
铜纳米簇与
HCR
信号放大的
CRISPR/Cas12a
检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
配制
crRNA
‑
Cas12a
二元复合物：将
Cas12a、crRNA
在反应缓冲液中混合，放置冰水浴上备用；
(2)
制备待测目标核酸
Target
：分别将
Target
‑1和
Target
‑2干粉离心后使用水溶解，混合均匀，制成溶液
。
分别取同体积的
Target
‑1和
Target
‑2混合均匀，置于
PCR
仪中升温至
85
‑
105℃
保持2‑
15min
，之后每隔1‑
5min
温度下降3‑
8℃
，直到降至
10
‑
15℃
，即可制得双链杂交的目标核...
【专利技术属性】
技术研发人员：张立慧，谢思盈，苏丰丽，李昺之，刘思锐，李雪，张幸，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。