微量细胞透射电镜样品及其制备方法技术

本发明专利技术属于检测技术领域，提供了一种微量细胞透射电镜样品及其制备方法，该制备方法包括：将交联固定剂加入微量细胞中进行第一固定，得到第一固定细胞溶液；将第一固定细胞溶液进行分离，得到第一固定细胞样品；将第一固定细胞样品滴加到带正电的尼龙膜上，得到带有样品的尼龙膜；将带有样品的尼龙膜转移至共聚焦培养皿的凹坑中，再加入锇酸和铁氰化钾混合液进行第二固定，得到第二固定细胞样品；对第二固定细胞样品进行清洗

【技术实现步骤摘要】
微量细胞透射电镜样品及其制备方法


[0001]本专利技术属于检测
，具体涉及一种微量细胞透射电镜样品及其制备方法
。

技术介绍

[0002]超薄切片技术是透射电镜样品制备技术之一，是从形态学上观察细胞内部超微结构的重要技术手段
。
悬浮细胞样品常规样品制备时，一般要求样品量大，离心后形成的沉淀肉眼可见，细胞至少2×
105～2×
106个
。
对于离心后容易松散的样品，每个步骤都需要离心处理，否则很难得到足量的细胞用于观察和分析
。
把细胞预包在琼脂糖
、
明胶
、
蛋清内的可以保存原有的细胞数量，但操作复杂，控温不当时包埋体开裂会造成细胞量减少或发生形变
。
上述问题对于微量细胞的电镜样品制备有很大的限制，对相关研究有着极大的不利影响
。
[0003]因此，简化的微量细胞的透射电镜样品制备方法有待深入研究
。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种微量细胞透射电镜样品的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
S1
：将交联固定剂加入到微量细胞中进行第一固定，得到第一固定细胞溶液；
S2
：将所述第一固定细胞溶液进行分离，得到第一固定细胞样品；
S3
：将所述第一固定细胞样品滴加到带正电的尼龙膜上，得到带有样品的尼龙膜；
S4
：将所述带有样品的尼龙膜转移至共聚焦培养皿的凹坑中，再加入锇酸和铁氰化钾混合液进行第二固定，得到第二固定细胞样品；
S5
：对所述第二固定细胞样品进行清洗
、
脱水
、
渗透
、
包埋，得到包埋后的样品；
S6
：对所述包埋后的样品进行切片，制备微量细胞透射电镜样品
。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤
S1
中，控制所述交联固定剂的温度与所述微量细胞的温度独立地为
10℃
～
40℃
；任选地，控制所述交联固定剂的温度与所述微量细胞的温度相同；任选地，所述第一固定的时间为
50min
～
70min
；任选地，所述交联固定剂包括戊二醛固定液或戊二醛
‑
多聚甲醛混合固定液；任选地，所述交联固定剂与微量细胞用量的体积比为
1∶(0.8
～
1.2)。3.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述带正电的尼龙膜的孔径为
0.03
μ
m
～
0.5
μ
m
；任选地，所述带正电的尼龙膜的大小为
(5
±
0.2)mm
×
(5
±
0.2)mm。4.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤
S3
包括：将所述第一固定细胞样品滴加到所述带正电的尼龙膜上，静置
4min
～
6min
；任选地，所述第一固定细胞样品的滴加量为2μ
L
～5μ
L。5.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤
S4
还包括：在所述第二固定之前，将交联固定剂吸出，用磷酸缓冲液冲洗；任选地，所述第二固定的时间为
15min
～
35min
；任选地，所述锇酸和铁氰化钾混合液中，锇酸和铁氰化钾的质量比为
1∶(0.3
～
1.5)。6.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤
S5
中，所述脱水的过程包括：依次用体积浓度为
48
％～
52
％
、68
％～
72
％
、78
％～

【专利技术属性】
技术研发人员：李英，谢任翔，俞立，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：