具有结核分枝杆菌特征制造技术

本发明专利技术公开了具有结核分枝杆菌特征

【技术实现步骤摘要】
具有结核分枝杆菌特征、极高抗过氧化氢的耻垢分枝杆菌突变菌及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一株耻垢分枝杆菌极耐受过氧化氢突变菌及其应用
。

技术介绍

[0002]由病原体结核分枝杆菌（
Mycobacterium tuberculosis, M. tb
）引起的结核病（
TB
）是一种重要传染性疾病
。
活性氧（
Reactive Oxygen Species, ROS
）在结核分枝杆菌潜伏感染
、
耐药性和宿主之间的相互作用中起着非常重要的作用
。
过氧化氢（
H2O2）是活性氧中的一种重要形式
。M. tb
对
ROS
具有高度抗性，抗
ROS
的能力被认为是
M. tb
在宿主细胞中存活的最显著的毒力之一
。
[0003]M. tb
与其模式菌株，非致病性分枝杆菌耻垢分枝杆菌（
Mycobacterium smegmatis
）虽然具有同源的毒力和信号传导基因，但在致病性上具有显著差别
(T JAS, J R, Rajan A, Shankar V. Features of the biochemistry of Mycobacterium smegmatis, as a possible model for Mycobacterium tuberculosis. J Infect Public Health. 2020 Sep;13(9):1255
‑
1264.doi:10.1016/j.jiph.2020.06.023.
； Branca AA, Baglioni C. Evidence that types I and II interferons have different receptors. Nature. 1981 Dec 24; 294(5843): 768
‑
70. doi:10.1038/294768a0.)。
巨噬细胞内
H2O2的生理浓度为5ꢀ‑ꢀ
10 mM
，经过长期的进化中，
M.tb
对
H2O
2A
具有天然抗性，作为研究
M. tb
的模式菌株
M. smegmatis mc2155 (
以下简称为
mc2155) 显示对
H2O2敏感
。
非病原菌
M. smegmatis
几乎可以被感染的巨噬细胞完全清除，而
M. tb
可以部分潜伏在感染的巨噬细胞中，这种表型的差别与其对
H2O2的抗性相关
(Forman HJ, Thomas MJ. Oxidant production and bactericidal activity of phagocytes. Annu Rev Physiol. 1986; 48:669
‑
80.doi:10.1146/annurev.ph.48.030186.003321.
；
Ganguli G, Mukherjee U, Sonawane A. Peroxisomes and Oxidative Stress: Their Implications in the Modulation of Cellular Immunity During Mycobacterial Infection. Front Microbiol. 2019 Jun 14;10:1121. doi:10.3389/fmicb.2019.01121.)。
因此，
M. smegmatis
对
H2O2胁迫条件下的进化适应，表现出了类似
M. tb
的表型
。

技术实现思路

[0004]本专利技术筛选得到一种耐
H2O2耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
，并且测定突变株对
H2O2的最小抑菌浓度 (Minimum Inhibitory Concentration, MIC)、
世代时间
、
在宿主细胞中的存活率
、
在饥饿条件下的生长情况以及对巨噬细胞生理
H2O2浓度的反应来鉴定此突变株的表型
。
表型鉴定显示，筛选获得的突变菌株
IMMI
‑
114
具有结核分枝杆菌特征
。
[0005]本专利技术首先提供一种耻垢分枝杆菌
(Mycobacterium smegmatis)IMMI
‑
114
，其保藏号为
CGMCC No.25632。
[0006]进而提供所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
在制备具有抗氧化性产品中的应用
。
具体地，抗氧化是指抗
H2O2。
[0007]本专利技术还提供所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
在制备耐受
H2O2的产品中的应用
。
[0008]本专利技术也提供所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
在制备耐受巨噬细胞吞噬的产品中的应用，作为分枝杆菌
‑
宿主界面药物筛选的模型
。
[0009]本专利技术进一步提供所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
在活疫苗载体中应用
。
优选地，作为疫苗载体，在此基础增加其他抗原蛋白表达（例如
HIV/
结核分枝杆菌与毒力相关的蛋白），构建重组疫苗菌株
。
[0010]本专利技术另外提供所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
在药物筛选中的应用
。
更优选地，用于抗结核药物筛选的模式生物，建立药物筛选模型，筛选获得抗结核药物
。
[0011]因此，该突变菌株是研究分枝杆菌应答过氧化氢分子机制很好的对象；为解释结核分枝杆菌潜伏感染以及耐药机制提供理论依据
。
更重要的是，与野生型相比，突变株
IMMI
‑
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极耐受过氧化氢，生长速度变慢，在宿主细胞中的存活率增高，在饥饿条件下有生长优势，这些表型都与病原菌
M. tb
相似，可以作为抗结核药物筛选的菌株，具有成为活疫苗载体的可行性
。
[0012]附图说明
[0013]图1为突变菌株
IMMI
‑
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的筛选模式图
。
[0014]图2为突变菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种耻垢分枝杆菌
(Mycobacterium smegmatis)IMMI
‑
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，其保藏号为
CGMCC No.25632。2.
如权利要求1所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
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在制备具有抗氧化性产品中的应用
。3.
如权利要求2所述的应用，其特征在于，抗氧化是指抗
H2O2。4.
权利要求1所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
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在制备耐受
H2O2的产品中的应用
。5.
权利要求1所述的耻垢分枝杆菌
IMMI
‑
114
在...

【专利技术属性】
技术研发人员：米凯霞，蒋政，周心童，张玮珊，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：