一种海岸松的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种海岸松的组织培养方法，属于植物组织培养技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种海岸松的组织培养方法


[0001]本专利技术涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种海岸松的组织培养方法，属于植物组织培养

。

技术介绍

[0002]海岸松
(Pinus pinaster)
，裸子植物，松科松属，高可达
30
米，喜光乔木
。
海岸松原产地中海沿岸，是一种引种比较成功的林木品种，其适应性极强，沿海
、
沙地
、
荒地和石质滩地都可正常生长，对风沙
、
土壤干旱和盐碱
、
低温都有较强的耐受适应能力，从胶东半岛沿海沙地
、
华北河流沙地和古河床沙地到长江流域以南地区各种沙地都可栽植
。
海岸松生长速度快，其根系具有特有的圆形根系分配方式，纤维素含量较高，因此具有很强的张力，使得其根系具有很强的支撑作用，抗风折
、
抗风倒能力强
。
综合海岸松特性，其为海防林的建设提供一种新的造林树种
。
[0003]海岸松本身也可发挥较大的生态效益和经济效益
。
海岸松树干可以作为优良的木材用于建筑板材
、
枕木和胶合板，其松脂的产量也显著高于一般的树种，树皮的提取产物“碧萝芷”被广泛应用于护肤品行业，因此海岸松国内国外需求量越来越大
。
[0004]关于海岸松的组织培养体系建立的研究未见报道，而植物组织培养是种质保存的重要方式
。
通过组织培养手段可以缩短海岸松苗木繁育时间，提高繁殖速度，保存优良的种质的同时提供一种海岸松育苗的方式
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种操作简单
、
繁殖系数高
、
组培苗质量好
、
启动率高的海岸松的组织培养方法
。
[0006]为了实现上述目标，本专利技术采用如下的技术方案：
[0007]一种海岸松的组织培养方法，包括以下步骤：
[0008]步骤1：获取海岸松种子的胚芽和部分胚轴，得到无菌外植体；
[0009]步骤2：将无菌外植体接种于初代诱导培养基上，并置于培养箱中培养
28
天，长出不定芽，其中，初代诱导培养基的配方为：
WPM+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂
+3.0mg/L 6
‑
BA+0.1mg/L NAA
，
pH6.0
；
[0010]步骤3：将长出的不定芽去除基部多余针叶，然后接种于伸长和生长培养基上，并置于培养箱中培养
29
天，长出小枝，其中，伸长和生长培养基的配方为：
WPM+1.0g/L
活性炭
+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂，
pH 6.0
；
[0011]步骤4：将长出的小枝的单个腋芽连同顶芽切下，然后接种到增殖培养基上，并置于培养箱中培养
40
天，长出丛生芽，其中，增殖培养基的配方为：
WPM+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂
+3.0mg/L6
‑
BA+0.1mg/LNAA
，
pH 6.0
；
[0012]步骤5：将长出的丛生芽分离成单个的芽，并去除基部多余针叶，然后接种于伸长和生长培养基上，并置于培养箱中培养
28
天，长出不定芽，其中，伸长和生长培养基的配方
为：
WPM+1.0g/L
活性炭
+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂，
pH 6.0
；
[0013]步骤6：将长度大于
1.5cm
的不定芽分离成单个不定芽，然后接种到生根培养基上，并置于培养箱中培养
45
天，长出发达根系且苗木达到
2.0cm
以上，其中，生根培养基的配方为：
1/2WPM+20.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂
+0.05mg/LNAA+3.0mg/L IBA
，
pH 6.0
；
[0014]步骤7：炼苗移栽
。
[0015]优选的，在步骤1中，获取海岸松种子的胚芽和部分胚轴的方法具体如下：
[0016](1)
将采集的海岸松球果自然晾晒，然后获取海岸松种子，并挑选大小一致
、
颗粒饱满的种子放置于
4℃
冰箱储存，备用；
[0017](2)
将种子清洗干净并放于
55℃
水中浸泡
10min
，等待水温自然冷却至
30℃
后将种子置于
30℃
恒温水浴锅中浸泡
24h
，之后取下层饱满
、
成熟
、
均匀的种子，将种子揉搓清洗后吸干水分；
[0018](3)
将种子装入三角瓶中，并向三角瓶中倒入质量浓度为
0.2
％的
KMnO4溶液，之后将三角瓶置于振荡机上震荡
30min
，振荡条件为：
100rpm、1511M、30℃
，震荡完毕将种子冲洗干净，并用滤纸吸干表面水分；
[0019](4)
用解剖刀轻轻刮掉外种皮黑色蜡质层，然后置于超净工作台上用质量浓度为
10
％的
NaClO
溶液对种子进行第一次消毒，消毒的过程具体如下：先用无菌蒸馏水清洗种子，然后用无菌滤纸吸取种子表面水分，之后用体积浓度为
70
％的乙醇溶液浸泡种子
30s
，浸泡期间每隔
6s
翻动种子一次，乙醇浸泡完毕无需清洗直接用质量浓度为
10
％的次氯酸钠溶液浸泡种子
10min
，浸泡期间不断搅动，最后用无菌蒸馏水冲洗种子3次；
[0020](5)
将种子置于
30℃
恒温水浴锅中浸泡
24h
，浸泡期间每隔
8h
换等温水一次；
[0021](6)
将种子置于超净工作台上，用质量浓度为
0.1
％的
HgCl2溶液对种子进行第二次消毒，消毒的过程具体如下：先用无菌蒸馏水清洗种子，然后用无菌滤纸吸取种子表面水分，之后用体积浓度为
70
％的乙醇溶液浸泡
30s
，浸泡期间每隔
6s
翻动种子一次，乙醇浸泡完毕无需清洗直接用质量浓度为
0.1
％的
HgCl2溶液浸泡种子
5min
，浸泡期间不断搅本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种海岸松的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：获取海岸松种子的胚芽和部分胚轴，得到无菌外植体；步骤2：将无菌外植体接种于初代诱导培养基上，并置于培养箱中培养
28
天，长出不定芽，其中，初代诱导培养基的配方为：
WPM+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂
+3.0mg/L 6
‑
BA+0.1mg/L NAA
，
pH6.0
；步骤3：将长出的不定芽去除基部多余针叶，然后接种于伸长和生长培养基上，并置于培养箱中培养
29
天，长出小枝，其中，伸长和生长培养基的配方为：
WPM+1.0g/L
活性炭
+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂，
pH 6.0
；步骤4：将长出的小枝的单个腋芽连同顶芽切下，然后接种到增殖培养基上，并置于培养箱中培养
40
天，长出丛生芽，其中，增殖培养基的配方为：
WPM+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂
+3.0mg/L6
‑
BA+0.1mg/LNAA
，
pH 6.0
；步骤5：将长出的丛生芽分离成单个的芽，并去除基部多余针叶，然后接种于伸长和生长培养基上，并置于培养箱中培养
28
天，长出不定芽，其中，伸长和生长培养基的配方为：
WPM+1.0g/L
活性炭
+30.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂，
pH 6.0
；步骤6：将长度大于
1.5cm
的不定芽分离成单个不定芽，然后接种到生根培养基上，并置于培养箱中培养
45
天，长出发达根系且苗木达到
2.0cm
以上，其中，生根培养基的配方为：
1/2WPM+20.0g/L
蔗糖
+7.0g/L
琼脂
+0.05mg/LNAA+3.0mg/LIBA
，
pH 6.0
；步骤7：炼苗移栽
。2.
根据权利要求1所述的海岸松的组织培养方法，其特征在于，在步骤1中，获取海岸松种子的胚芽和部分胚轴的方法具体如下：
(1)
将采集的海岸松球果自然晾晒，然后获取海岸松种子，并挑选大小一致
、
颗粒饱满的种子放置于
4℃
冰箱储存，备用；
(2)
将种子清洗干净并放于
55℃
水中浸泡
10min
，等待水温自然冷却至
30℃
后将种子置于
30℃
恒温水浴锅中浸泡
24h
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵莹，王连红，姚明志，张建梅，陈丽英，
申请(专利权)人：烟台市森林资源监测保护服务中心烟台沿海防护林省级自然保护区管理服务中心，
类型：发明
国别省市：