一种组培用海岸松种子消毒的方法技术

本发明专利技术涉及一种组培用海岸松种子消毒的方法，经过海岸松种子浸泡：55℃水浸泡10min+30℃水浸泡24h，接种前剥去种皮外层，以及两次消毒剂组合处理，可显著降低海岸松种子的污染率，提高组培用海岸松种子的发芽率。提高组培用海岸松种子的发芽率。提高组培用海岸松种子的发芽率。

【技术实现步骤摘要】
一种组培用海岸松种子消毒的方法


[0001]本申请涉及植物组织培养
，尤其涉及海岸松组培用种子的消毒处理方法。

技术介绍

[0002]海岸松(Pinus pinasterAit)，裸子植物，松科松属，喜光乔木，高可达30米。生长迅速，年均直径生长量达1.2cm，生长15年左右即可成林，30
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40年可采伐。海岸松适应温暖、湿润的气候条件，我国北部山东沿海地区到我国最南端的各种沿海沙地都可以种植海岸松。其对沿海沙地、盐碱地和风沙等气候环境有很强的耐受能力，同时抗风能力强，具有强大根系。我国有18000km大陆海岸线，分布在这些沿海地区的海岸防护林林木老化衰退、病虫害严重、透风度大等现象越来越明显，综合海岸松特性，改变我国海防林建设现状有较广阔前景，为我国沿海防护林的造林带来较为可观的经济、生态和社会效益。
[0003]海岸松是一种多用途树种，其树型高大紧密，防风固沙能力强的同时可以提供木材。其松针和树皮中多酚类抗氧化物含量较高，其畅销的提取物制成产品“碧萝芷”具有较强的抗氧化能力，广泛应用于化妆品护肤业。通过对海岸松进行组织培养育苗可以提高其繁殖系数，获得生长整齐且质量高的组培苗。海岸松进行组织培养采用以顶芽作为外植体，污染较难控制且容易发生褐化，采用种子作为外植体一般是剥去胚乳，去掉部分胚轴采用胚芽进行，在这过程中由于种子成熟度不一致，容易产生畸形芽，胚轴部分保留大小不一致而产生愈伤组织或者胚轴生长过快，顶芽生长导致的顶芽生长不良，而采用种子直接进行诱导芽进行组织培养既可以保证芽的质量又可以采用完整顶芽。
[0004]因此，提供一种适于海岸松组织培养的消毒方法并且保证较高的成活率和较低的污染率是本领域技术人员需要解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种适于组织培养用种子的消毒方法，经过接种前两次消毒和剥去种皮外层，提高了种子发芽率，降低了种子污染率。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]一种组培用海岸松种子消毒的方法，包括如下步骤：
[0008](1)将采集的海岸松(Pinus pinaster)球果自然晾晒，获取海岸松种子，挑选大小一致、颗粒饱满的种子放置于4℃冰箱储存21
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42天；
[0009](2)将种子用50
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55℃水浸泡10
‑
15min，等待自然冷却至30℃后置于30℃恒温水浴锅中浸泡24h，取下层饱满、成熟、均匀的种子；
[0010](3)将种子装入三角瓶，倒入0.2％KMnO4溶液，置于振荡机上15
‑
30min，冲洗干净后备用；
[0011](4)将所述步骤3)所得到的海岸松种子刮去种子外种皮蜡质层；
[0012](5)将所述步骤4)中的种子置于超净工作台上，进行第一次消毒，消毒剂先后采用
70％乙醇和8
‑
10％次氯酸钠溶液，消毒时间为乙醇浸泡30
‑
45s，次氯酸钠浸泡8
‑
10min，最后用无菌水清洗3
‑
4次；
[0013](6)将处理好的种子置于30℃恒温水浴锅中浸泡24h；
[0014](7)将所述步骤6)中得到种子置于超净工作台上，进行第二次消毒，消毒剂先后采用70％乙醇和0.1％HgCl2，消毒时间为乙醇浸泡30
‑
45s，0.1％HgCl2浸泡3
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5min。
[0015]进一步的，所述步骤(1)中，海岸松种子取自蓬莱海防林过渡区。
[0016]进一步的，所述步骤(2)中，海岸松种子在55℃水中浸泡10min。
[0017]进一步的，所述步骤(3)中，0.2％KMnO4振荡时间为30min，振荡条件为100rpm，1511M，30℃。
[0018]进一步的，所述步骤(4)中，用解剖刀刮去种子外种皮蜡质层。
[0019]进一步的，所述步骤(5)中，种子第一次消毒先后采用70％乙醇和次氯酸钠溶液，具体过程为：先用70％乙醇漂洗30s，再利用10％次氯酸钠浸泡8min，最后再用无菌水冲洗3次。
[0020]进一步的，所述步骤(6)中，种子经第一次消毒后继续在30℃恒温下浸泡24h，期间每隔8h换等温水一次。
[0021]进一步的，所述步骤(7)中，种子第二次消毒先后采用70％乙醇和0.1％HgCl2消毒，具体过程为：先用70％乙醇漂洗30s，再利用0.1％HgCl2消毒3min，最后再用无菌水冲洗4次。
[0022]本专利技术的有益效果：
[0023]1.通过低温冷藏和55℃水浸泡后的海岸松种子，萌发率提高，缩短了海岸松种子组培瓶内发芽时间。剥去海岸松种子外种皮蜡质层，经过两次消毒处理，可有效去除种子表面杂质和病菌。不同水温不同浸泡时间对海岸松种子萌发率最佳组合是：55℃水浸泡10min+30℃水浸泡24h(两次浸泡)。
[0024]2.本专利技术通过大量的试验，摸索出了海岸松种子消毒和萌发的影响因素。经过70％乙醇配浓度为8
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10％的次氯酸钠和70％乙醇配0.1％HgCl2不同浸泡时间进行消毒，保证了海岸松种子萌发率，降低了种子在组培过程中的污染率。通过正交试验，我们进一步得出影响海岸松种子污染率和萌发率的各因素影响次序均为次氯酸钠浓度>次氯酸钠消毒时间>0.1％HgCl2消毒时间。
[0025]3.我们意外的发现，海岸松种子剥去外种皮蜡质层对其种子消毒及进一步的萌发起到了至关重要的作用，通过对比试验，我们得出海岸松种子在不剥去蜡质层的情况下所有的海岸松种子全部污染，且种子都没有萌发。同时，通过对照刮种皮+消毒剂组合处理海岸松种子的不同处理方法，我们还得出，通过刮种皮+本专利技术的二次消毒处理组合后的效果优于单独使用两种消毒处理组合试验，且效果优于单独使用其中一种消毒剂处理组合，说明本专利技术的消毒组合具有协同增效的技术效果。
附图说明
[0026]图1：本专利技术组培用海岸松种子消毒流程图；
[0027]图2：剥去种子外种皮黑色蜡质层。
具体实施方式
[0028]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，本文所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下获得的其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0029]实施例1
[0030]一种组培用海岸松种子的消毒方法，包括如下步骤：
[0031](1)将采集的海岸松球果自然晾晒，获取海岸松种子。挑选大小一致、颗粒饱满的种子放置于4℃冰箱储存21天；种子清洗干净，备用；
[0032](2)将种子用55℃水浸泡10min，等待自然冷却至30℃后置于30℃恒温水浴锅中浸泡24h，取下层饱满、成熟、均匀的种子；种子揉搓清洗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组培用海岸松种子消毒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将采集的海岸松(Pinus pinasterAit)球果自然晾晒，获取海岸松种子，挑选大小一致、颗粒饱满的种子放置于4℃冰箱储存21
‑
42天；(2)将种子用50
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55℃水浸泡10
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15min，等待自然冷却至30℃后，置于30℃恒温水浴锅中浸泡24h，取下层饱满、成熟、均匀的种子；(3)将种子装入三角瓶，倒入0.2％KMnO4溶液，置于振荡机上15
‑
30min，冲洗干净后备用；(4)将所述步骤3)所得到的海岸松种子刮去种子外种皮蜡质层；(5)将所述步骤4)中的种子置于超净工作台上，进行第一次消毒，消毒剂先后采用70％乙醇和8
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10％次氯酸钠溶液，消毒时间为乙醇首先浸泡30
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45s，次氯酸钠再浸泡8
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10min，最后用无菌水清洗3
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4次；(6)将处理好的种子置于30℃恒温水浴锅中浸泡24h；(7)将所述步骤6)中得到种子置于超净工作台上，进行第二次消毒，消毒剂先后采用70％乙醇和0.1％HgCl2，消毒时间为乙醇首先浸泡30
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45s，0.1％HgCl2再浸泡3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘邦伟，王淑惠，胡胜云，姚明志，曹蓉芬，于晓明，赵莹，
申请(专利权)人：烟台市森林资源监测保护服务中心烟台沿海防护林省级自然保护区管理服务中心，烟台市林业科学研究所，
类型：发明
国别省市：