胡豆莲的组培快速繁殖方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体公开了一种胡豆莲的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：采集胡豆莲的果实；将果实进行果皮的剥离和消毒，得种子

【技术实现步骤摘要】
胡豆莲的组培快速繁殖方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种胡豆莲的组培快速繁殖方法
。

技术介绍

[0002]胡豆莲
(Euchresta japonica Hook f.ex Regel)
是一种豆科山豆根属的常绿灌木，于
1865
年首次发表，在中国
、
日本和韩国有分布，野外种群数量有限，都被列入珍稀濒危保护植物
。
在日本该物种已经濒临灭绝；在韩国，该物种被认定为8种濒危
(I
类
)
植物之一
。
韩国珍稀植物数据库根据世界自然保护联盟的标准，在国家一级保护植物的基础上，将该物种列为“极度濒危”(Choi et al,2013)。
在我国，胡豆莲零星分布于于华南和西南的部分地区，生于海拔
800
～
1350
米的常绿阔叶林林下及阴湿山坡上
。
胡豆莲对生境要求极高，主要分布在人类干扰少的原始林中
。
近年来由于森林过度砍伐导致的生境破坏
、
民间采药及其自身生长缓慢
、
近亲繁殖
、
开花率低
、
座果率低等诸多因素，导致其有性繁殖率极低，野生种群极为稀少
(Wu&Hong2010)。
胡豆莲被列为国家二级重点保护野生植物，并被
《
中国生物多样性红色名录
》
列为易危<br/>(VU)
物种
(
生态环境部和中国科学院
,2020)。
[0003]胡豆莲，又名山豆根，为著名的药用植物，其主要成分是黄酮类，特别是异黄酮类丰富
(Mizuno et al,1988,1992
；
Shirataki et al,1980,1981)。
此外还含有生物碱类
、
甾类等成分
(
李厚聪等，
2014)。
其性味苦寒，有清热
、
解毒
、
消肿
、
镇痛等功效，主治肠炎腹泻
、
腹胀
、
腹痛
、
胃痛
、
咽喉痛
、
牙痛
、
疮疖肿毒，还有抗肿瘤
、
抗氧化
、
调血脂等功效
(Toda&amp;Shirataki
，
2006
；林茂祥等，
2007a)。
[0004]Hama et al.(2009)
开发了一套胡豆莲的微卫星引物，为该物种的遗传结构的研究提供了便利
。
在此基础上，
Choi et al(2013)
利用9个微卫星引物对韩国极度濒危的胡豆莲进行了种群遗传结构及其保护的研究
。
可惜上述研究缺乏中国和日本的胡豆莲样品
。Song et al(2012)
对济州岛胡豆莲
(
豆科
)
野生地的植被结构和保护方案进行了研究
。
提出为了保护胡豆莲，急需通过种子发芽或组织培养等方式进行个体数量的增殖；通过发掘合适的野生地进行移植栽培
。
[0005]据长期的野外观察，胡豆莲主要通过种子和压条进行自我繁殖
。
尽管胡豆莲种子发芽率高，但开花率和座果率极低，荚果内仅有1枚种子，因此用于繁殖的种子数量有限
。
胡豆莲长至
50
厘米以上会自然倒伏，接触地面的茎会长出不定根，根茎部往往能萌发新的枝条，2个枝条中间的茎会腐烂，最终形成2个独立个体
。
由于胡豆莲生长极其缓慢，虽然能通过压条方式补充有性生殖的不足，但其繁殖系数仍然非常低
。
[0006]目前，对于胡豆莲的人工无性繁殖方法主要有扦插和组织培养两种方法
。
林茂祥等人
(2007b
，
2009
，
2011)
研究了不同生长素对胡豆莲扦插生根的影响
。
然而，由于胡豆莲生长缓慢，可以用于扦插繁殖的茎段有限，不能满足大规模繁殖的需要
。
因此，有必要开展胡豆莲组培快繁的研究
。
[0007]韩如刚等人
(2011)
仅对胡豆莲组织培养过程中外植体的选择和消毒方法进行初步研究，没有成功建立胡豆莲的组织培养体系
。
目前仅见
Setyawati et al(2023)
对药用植
Sophora species.XVI.Constituents of the roots of Euchresta japonica Hook.f.ex Regel[J].Chemical Pharmaceutical Bulletin,1981,28:2932
‑
2935.(Shirataki Y,Komatsu M,Yokoe I,et al.
槐属植物成分的研究
.XVI.
胡豆莲的成分
[J].
化学与制药学报
,1981,28:2932
‑
2935)
；
[0019]Toda S&amp;Shirataki Y.Inhibitory effect of prenylated flavonoid in Euchresta japonica and Artocarpus heterophyllus on lipid peroxidation by interaction of hemoglobin and hydrogen peroxide[J].Pharmaceutical Biology,2006,44(4)
：
271
‑
273.(Toda S&amp;Shirataki Y.
胡豆莲和菠萝蜜中戊烯基类黄酮对血红蛋白和过氧化氢作用下脂质过氧化的抑制作用
[J].
药学生物学
,2006,44(4):271
‑
273)
；
[0020]Song GP,Jang CG,Kang SH.Conservation and vegetation structure of Euchresta japonica(leguminosae)in jeju island[J].Korean Journal of Plant Resources,2012,25(1):89
‑
95.(Song GP,Jang CG,Kang SH.
济州岛豆科植物胡豆莲的保护与植被结构
[J].
韩国植物资源杂志
,本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
胡豆莲的组培快速繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：取材；获取种子；种子的无菌萌发；增殖培养；生根培养；移栽
。2.
根据权利要求1所述的胡豆莲的组培快速繁殖方法，其特征在于：
1)、
取材：采集胡豆莲的果实；
2)、
将果实进行果皮的剥离和消毒，得种子；
3)、
种子的无菌萌发：将种子播种于种子萌发培养基上，黑暗状态下培养2～3天后转入光
/
暗交替培养直至顶芽长至2～
3cm
时停止培养，得无菌苗；
4)、
增殖培养：将无菌苗切除根部后，将下胚轴切成
0.3
～
0.5cm
的切段，得下胚轴切段；将子叶以上的茎段切成至少含有一个节的切段，得茎段切段；将下胚轴切段
、
茎段切段均转接于增殖培养基上进行增殖培养；增殖培养基为以下任一：增殖培养基Ⅰ：改良
MS
基本培养基
+BA 0.4
～
1.0mg/l+NAA 0.05
～
0.1mg/l+
蔗糖
30g/l+
琼脂
7.7
～
7.8g/l
，
pH 5.8
～
6.0
；增殖培养基Ⅱ：改良
MS
基本培养基
+mTR 0.4
～
1.0mg/l+NAA 0.05
～
0.15mg/l+
蔗糖
30g/l+
琼脂
7.7
～
7.8g/l
，
pH 5.8
～
6.0
；所述增殖培养为：于
23
～
25℃
进行光
/
暗交替培养；待下胚轴切段或茎段切段上长出丛生状的不定芽，且不定芽为带有
≥3
个节的茎段时，停止增殖培养，割取不定芽作为新茎段；
5)、
生根培养：任选以下一种方案：方案一：将步骤
4)
所得的新茎段转入生根培养基Ⅰ中进行生根培养；培养条件如下：先在
23
～
25℃
暗培养2～3天，然后转入光
/
暗交替培养；当新茎段的基部产生长度
≥3cm
的至少4条根时结束生根培养；生根培养基Ⅰ：改良
MS
基本培养基
+BA 0.05
～
0.2mg/l+NAA 0.2
～
0.5mg/l+
蔗糖
30g/l+
琼脂
7.7
～
7.8g/l
，
pH 5.8
～
6.0
；方案二：将步骤
4)
所得的新茎段转入生根培养基
Ⅱ‑1上于
23
～
25℃
暗培养2～3天后转入光
/
暗交替培养3～5天，接着再转入生根培养基
Ⅱ‑2置于光
/
暗交替培养，当新茎段的基部产生长度
≥3cm
的至少4条根时，结束生根培养；生根培养基
Ⅱ‑1为：改良
MS
基本培养基
+NAA 0.2
～
1.0mg/l+IBA 1.0
～
2.0mg/l+
蔗糖
30g/l+
琼脂
7.7
～
7.8g/l
，
pH 5.8
～
6.0
；生根培养基
Ⅱ‑2为：改良
MS
基本培养基
+
蔗糖
30g/l+
琼脂
7.7
～
7.8g/l
，
pH 5.8
～
6.0
；
6)、
移栽：将步骤
5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘西，雷祖培，潘向东，康华靖，郑方东，王剑武，谢文远，孟森，
申请(专利权)人：浙江乌岩岭国家级自然保护区管理中心，
类型：发明
国别省市：