玉米转化事件制造技术

本发明专利技术涉及玉米转化事件

【技术实现步骤摘要】
玉米转化事件CHMZ12的核酸序列及其检测方法


[0001]本专利技术涉及植物生物

。
具体的说，涉及一种玉米转化事件
CHMZ12
的核酸序列和检测方法，特别是涉及一种抗虫和耐受草铵膦除草剂施用的转基因玉米事件
CHMZ12
和用于检测生物样品中是否包含特定转基因玉米事件
CHMZ12
的核酸序列及其检测方法
。

技术介绍

[0002]Cry1F
可用于控制许多鳞翅目害虫，包括草地贪夜蛾
、
玉米螟和棉铃虫，并且对黏虫
、
斜纹夜蛾
、
大螟有活性
。
随着草地贪夜蛾在拉美逐渐成为玉米主要害虫，陶氏益农公司开发的转基因玉米产品
TC1507
，含有有效杀虫蛋白
Cry1F
，负责用于控制草地贪夜蛾
。
草地贪夜蛾于
2018
年末由云南入侵我国，寄主植物已达
19
种，其中玉米的发生面积占作物发生总面积的
98.1
％
。
隆平高科等单位开发的抗虫耐除草剂玉米
BFL4
‑2含有
cry1Ab、cry1F
和
cp4epsps
三个基因，同时具备抗虫
、
耐除草剂两个性状，对当前我国玉米田主要鳞翅目类害虫玉米螟
、
黏虫
、
棉铃虫和草地贪夜蛾幼虫具有良好防治效果
。
[0003]用超表达载体驱动杀虫基因在植物体内的表达效率，能极大的提高
Bt
蛋白的杀虫活性
。
常用的策略是使用植物内源的超表达启动子驱动杀虫基因表达
(
如玉米
、
水稻内源的
Ubiquitin
启动子
)
或是来源于花椰菜花叶病毒
(CaMV)
的过表达启动子
35S。
例如，转基因玉米产品
TC1507
和
BFL4
‑2中抗虫基因
cry1F
表达盒均使用了玉米内源的
Ubiquitin
，而大北农开发的抗虫大豆转化体
(
专利申请号
2019100980178)
中
cry1F
基因是是由来源于拟南芥的启动子
AtUbi10
驱动
。
[0004]为了测试不同启动子在玉米植物体内对抗虫基因的驱动效率，以及不同启动子构成的杀虫表达盒对靶标害虫的杀虫活性，本专利技术将
cry1F
与不同来源的启动子连接成多种不同的表达盒，并与耐除草剂的筛选标记表达盒连接，构建成植物表达载体，使其在转基因玉米中表达
。
通过抗虫性生测试验，结合农艺性状筛选，从中挑选出具有更高的杀虫活性和经济价值的抗虫玉米产品
。
[0005]已知外源基因在植物体内的表达受到它们的染色体位置的影响，可能是由于染色质结构
(
如异染色质
)
或转录调节元件
(
如增强子
)
接近整合位点
。
为此，通常需要筛选大量的事件才有可能鉴定出可以商业化的事件
(
即导入的目标基因得到最优表达的事件
)。
例如，在植物和其他生物体中已经观察到导入基因的表达量在事件间可能有很大差异；在表达的空间或时间模式上可能也存在差异，如在不同植物组织之间转基因的相对表达存在差异，这种差异表现在实际的表达模式可能与根据导入的基因构建体中的转录调节元件所预期的表达模式不一致，从而导致了转化事件在性状表现上存在差异
。
因此，通常需要产生成百上千个不同的事件并从这些事件中筛选出具有以商业化为目的所预期的转基因表达量和表达模式的单一事件
。
具有预期的转基因表达量和表达模式的事件可用于采用常规育种方法通过有性异型杂交将转基因渗入到其他遗传背景中
。
通过这种杂交方式产生的后代保持了原始转化事件的转基因表达特征
。
应用这种策略模式可以确保在许多品种中具有可靠的基因表达，而这些品种能很好地适应当地的生长条件
。
因此，需要对更多的转化事件进行
性状鉴定和筛选，以获得综合性状表现优异，具有商业化前景的优异转化事件
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是提供一种抗虫耐除草剂性状优异且农艺性状优良的玉米转化事件以及用于检测玉米
CHMZ12
的核酸序列及其检测方法
。
转基因玉米事件
CHMZ12
抗虫性状优良并对草铵膦除草剂具有较好的耐受性，且检测方法可以准确快速地鉴定生物样品中是否包含特定转基因玉米事件
CHMZ12
的
DNA
分子
。
[0007]为实现上述目的，本专利技术使用不同的启动子驱动
cry1F
基因的表达盒，与
bar
基因表达盒一起连接到植物表达骨架载体
pCAMBIA3300
上，获得了新的
pCAMBIA3300
‑
cry1F
‑
bar
表达载体，通过农杆菌介导的方法转化玉米
B104
，获得了
88
个阳性转化事件
。
通过抗虫和耐除草剂性状鉴定发现，转化事件
CHMZ12
是耐除草剂
、
抗虫性表现优异且农艺性状最好的转化体，能够用来改良玉米的抗虫和耐除草剂性状
。
[0008]为了表征
CHMZ12
的身份特征，本专利技术提供了一种核酸分子，所述核酸分子包含
SEQ ID NO:1
和
/
或
SEQ ID NO:2
所示序列，或其反向互补序列
。
[0009]进一步地，所述核酸序列包含
SEQ ID NO:3
和
/
或
SEQ ID NO:4
所示序列，或其反向互补序列
。
[0010]更进一步地，所述核酸序列包含
SEQ ID NO:6
和
/
或
SEQ ID NO:7
所示序列，或其反向互补序列
。
[0011]更进一步地，所述核酸序列包含
SEQ ID NO:5
所示序列或其反向互补序列
。
[0012]本专利技术还提供了用于检测玉米转化事件的探针，其特征在于，包括
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:3
或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种核酸分子，其特征在于，包括如下任意一种：
i)
包含
SEQ ID NO:1
和
/
或
SEQ ID NO:2
所示序列，或其反向互补序列；
ii)
包含
SEQ ID NO:3
和
/
或
SEQ ID NO:4
所示序列，或其反向互补序列；
iii)
包含
SEQ ID NO:6
和
/
或
SEQ ID NO:7
所示序列，或其反向互补序列；
iv)
包含
SEQ ID NO:5
所示序列，或其反向互补序列
。2.
用于检测玉米转化事件的探针，其特征在于，包括
SEQ ID NO:1
或
SEQ ID NO:2
或
SEQ ID NO:3
或
SEQ ID NO:4
或
SEQ ID NO:6
或
SEQ ID NO:7
所示序列或其片段或其变体或其反向互补序列
。3.
用于检测玉米转化事件的引物对，其特征在于，所述引物对的扩增产物包含权利要求2所述的序列；任选地，所述引物对为
SEQ ID NO:8
和
SEQ ID NO:9
所示的序列；或者
SEQ ID NO:10
和
SEQ ID NO:11
所示的序列
。4.
用于检测玉米转化事件的试剂盒或微阵列，其特征在于，包含权利要求2所述的探针和
/
或权利要求3所述的引物对
。5.
检测玉米转化事件的方法，其特征在于，包括利用以下任一项来检测待测样品中是否存在所述转化事件：
i)
权利要求2所述的探针；
ii)
权利要求3所述的引物对；
iii)
权利要求2所述的探针和权利要求3所述的引物对；
iv)
权利要求4所述的试剂盒或微阵列
。6.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜文平，旷乐，宋军，聂治，左丹，余桂容，张玉静，皮博艺，李辉，霍东博，王晖，
申请(专利权)人：武汉莱肯博奥科技有限公司，
类型：发明
国别省市：