【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物生物。具体的说，涉及抗虫耐除草剂水稻转化事件chos07的核酸分子、检测方法及其应用，特别是涉及一种抗虫和耐受草铵膦除草剂施用的转基因水稻事件chos07和用于检测生物样品中是否包含特定转基因水稻事件chos07的核酸序列及其检测方法。
技术介绍
1、cry1f可用于控制许多鳞翅目害虫，包括草地贪夜蛾、玉米螟和棉铃虫，并且对黏虫、斜纹夜蛾、大螟有活性。草地贪夜蛾是2018年末由云南入侵我国的新型农业害虫，寄主植物达19种之多。近年来，斜纹夜蛾、草地贪夜蛾和大螟等危害水稻的茎、叶和穗，对稻田产量也造成了巨大的影响。陶氏益农、隆平高科和大北农等单位开发了多种抗虫玉米和大豆产品。但是，cry1f用于水稻抗虫的产品很少。
2、用超表达载体驱动杀虫基因在植物体内的表达效率，能极大的提高bt蛋白的杀虫活性。常用的策略是使用植物内源的超表达启动子驱动杀虫基因表达(如玉米、水稻内源的ubiquitin启动子)或是来源于花椰菜花叶病毒(camv)的过表达启动子35s。例如，转基因玉米产品tc1507和bfl4-2中抗虫基因cry1f表达盒均使用了玉米内源的ubiquitin，而大北农开发的抗虫大豆转化体(专利申请号2019100980178)中cry1f基因是由来源于拟南芥的启动子atubi10驱动。
3、为了测试不同启动子在水稻植物体内对抗虫基因的驱动效率，以及不同启动子构成的杀虫表达盒对靶标害虫的杀虫活性，本专利技术将cry1f与不同来源的启动子连接成多种不同的表达盒，并与耐除草剂的筛选标记表达盒连接
4、已知外源基因在植物体内的表达受到它们的染色体位置的影响，可能是由于染色质结构(如异染色质)或转录调节元件(如增强子)接近整合位点。为此，通常需要筛选大量的事件才有可能鉴定出可以商业化的事件(即导入的目标基因得到最优表达的事件)。具有预期的转基因表达量和表达模式的事件可用于采用常规育种方法通过有性异型杂交将转基因渗入到其他遗传背景中。通过这种杂交方式产生的后代保持了原始转化事件的转基因表达特征。应用这种策略模式可以确保在许多品种中具有可靠的基因表达，而这些品种能很好地适应当地的生长条件。因此，需要对更多的转化事件进行性状鉴定和筛选，以获得综合性状表现优异，具有商业化前景的优异转化事件。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种抗虫耐除草剂性状优异且农艺性状优良的水稻转化事件以及用于检测水稻chos07的核酸分子及其检测方法。转基因水稻事件chos07抗虫性状优良并对草铵膦除草剂具有较好的耐受性，且检测方法可以准确快速地鉴定生物样品中是否包含特定转基因水稻事件chos07的dna分子。
2、为实现上述目的，本专利技术使用不同的启动子驱动cry1f基因的表达盒，与bar基因表达盒一起连接到植物表达骨架载体pcambia3300上，获得了新的pcambia3300-cry1f-bar表达载体，通过农杆菌介导的方法转化水稻日本晴，获得了98个阳性转化事件。通过抗虫和耐除草剂性状鉴定发现，转化事件chos07是耐除草剂、抗虫性表现优异且农艺性状最好的转化体，能够用来改良水稻的抗虫和耐除草剂性状。
3、为了表征chos07的身份特征，本专利技术提供了一种核酸分子，所述核酸分子包含seqid no:1和/或seq id no:2所示序列，或其反向互补序列。
4、进一步地，所述核酸序列包含seq id no:3和/或seq id no:4所示序列，或其反向互补序列。
5、更进一步地，所述核酸序列包含seq id no:6和/或seq id no:7所示序列，或其反向互补序列。
6、更进一步地，所述核酸序列包含seq id no:5所示序列或其反向互补序列。
7、本专利技术还提供了用于检测水稻转化事件的探针，其特征在于，包括seq id no:1或seq id no:2或seq id no:3或seq id no:4或seq id no:6或seq id no:7所示序列或其片段或其变体或其反向互补序列。
8、本专利技术还提供了用于检测水稻转化事件的引物对，其特征在于，所述引物对的扩增产物包含seq id no:1或seq id no:2或seq id no:3或seq id no:4或seq id no:6或seq id no:7所示序列或其片段或其变体或其反向互补序列。
9、在一些实施方案中，上述引物对为seq id no:8和seq id no:9所示的序列；或者seq id no:10和seq id no:11所示的序列。
10、本专利技术还提供了用于检测水稻转化事件的试剂盒或微阵列，其特征在于，包含上述的探针和/或引物对。
11、本专利技术还提供了检测水稻转化事件的方法，其特征在于，包括利用上述的探针或上述的引物对或上述的探针和引物对或上述的试剂盒或微阵列来检测待测样品中是否存在所述转化事件。
12、本专利技术还提供了对水稻进行育种的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
13、1)获得包含上述核酸分子的水稻；
14、2)将步骤1)所获得的水稻通过花粉培养、未受精胚培养、加倍培养、细胞培养、组织培养、自交或杂交或以上的组合得到水稻植物、种子、植物细胞、后代植物或植物部分；以及任选地，
15、3)对步骤2)所获得的后代植物进行抗虫性状和/或除草剂抗性鉴定，并利用上述的方法来检测其中是否存在所述转化事件。
16、进一步的，本专利技术还提供了利用上述方法获得的水稻植物、种子、植物细胞、后代植物或植物部分制成的制品，包括食品、饲料或工业原料。
17、所述seq id no:1为转基因水稻事件chos07中在插入序列的5’末端位于插入接合部位附近的一个长度为22个核苷酸的序列，所述seq id no:1跨越了水稻插入位点的左侧翼基因组dna序列和插入序列的左边界5’末端的dna序列，包含所述seq id no:1或其反向互补序列即可鉴定为转基因水稻事件chos07的存在。所述seq id no:2为转基因水稻事件chos07中在插入序列的3’末端位于插入接合部位附近的一个长度为22个核苷酸的序列，所述seq id no:2跨越了插入序列的右边界3’末端的dna序列和水稻插入位点的右侧翼基因组dna序列，包含所述seq id no:2或其反向互补序列即可鉴定为转基因水稻事件chos07的存在。
18、本专利技术中，所述核酸序列可以为所述seq id no:3或其反向互补序列中转基因插入序列的任何部分的至少11个或更多个连续多核苷酸(第一核酸序列)，或者为所述seq idno:3或其反向互补序列中5’左侧翼水稻基因组dna区域的任何部分的至少11个或更多个连续多核苷酸(第二核酸序列)。所述核酸序列本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸分子，其特征在于，包括如下任意一种：
2.用于检测水稻转化事件的探针，其特征在于，包括SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQID NO:3或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示序列或其片段或其变体或其反向互补序列。
3.用于检测水稻转化事件的引物对，其特征在于，所述引物对的扩增产物包含权利要求2所述的序列；
4.用于检测水稻转化事件的试剂盒或微阵列，其特征在于，包含权利要求2所述的探针和/或权利要求3所述的引物对。
5.检测水稻转化事件的方法，其特征在于，包括利用以下任一项来检测待测样品中是否存在所述转化事件：
6.对水稻进行育种的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
7.由权利要求6的方法获得的水稻植物、种子、植物细胞、后代植物或植物部分制成的制品，包括食品、饲料或工业原料。
8.一种保护水稻植物免受由除草剂引起的损伤的方法，其特征在于，包括将含有有效剂量草铵膦除草剂施加到种植至少一种转基因水稻植物的大田中，所述转基因水稻植物
9.一种保护水稻植物免于昆虫侵袭的方法，其特征在于，包括在靶昆虫的膳食中提供至少一种转基因水稻植物细胞，所述转基因水稻植物细胞在其基因组中依次包含SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:5第993-5877位核酸序列和SEQ ID NO:2，或者所述转基因水稻植物细胞的基因组中包含SEQ ID NO:5；摄食所述转基因水稻植物细胞的靶昆虫被抑制进一步摄食所述水稻植物。
...【技术特征摘要】
1.一种核酸分子，其特征在于，包括如下任意一种：
2.用于检测水稻转化事件的探针，其特征在于，包括seq id no:1或seq id no:2或seqid no:3或seq id no:4或seq id no:6或seq id no:7所示序列或其片段或其变体或其反向互补序列。
3.用于检测水稻转化事件的引物对，其特征在于，所述引物对的扩增产物包含权利要求2所述的序列；
4.用于检测水稻转化事件的试剂盒或微阵列，其特征在于，包含权利要求2所述的探针和/或权利要求3所述的引物对。
5.检测水稻转化事件的方法，其特征在于，包括利用以下任一项来检测待测样品中是否存在所述转化事件：
6.对水稻进行育种的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
7.由权利要求6的方法获得的水稻植物、种子、植物细胞、后代植物或植物部分制成的制品，包...
【专利技术属性】
技术研发人员：旷乐，张玉静，左丹，李辉，霍东博，王晖，
申请(专利权)人：武汉莱肯博奥科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。