一种用于结合胶原的多肽纳米材料及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于纳米材料制备技术领域，具体涉及一种用于结合胶原的多肽纳米材料及其制备方法和应用

【技术实现步骤摘要】
一种用于结合胶原的多肽纳米材料及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于纳米材料制备
，具体涉及一种用于结合胶原的多肽纳米材料的制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]越来越多的证据表明血小板在动脉粥样硬化病变中发挥着重要作用
。
血小板在动脉粥样硬化斑块处大量的聚集会导致血栓的形成从而促进动脉粥样硬化疾病的发展
。
抑制血小板在动脉粥样硬化病变的胶原处粘附，对延缓疾病的发展具有重要意义
。
在动脉粥样硬化病变部位，由于血管壁受损导致血管壁处的胶原暴露
。
血小板表面受体蛋白糖蛋白
Ⅵ
和胶原结合并使血小板活化，活化的血小板表面生成新的受体蛋白，例如整合素
α2β1可以直接和胶原结合
。
此外，活化的血小板新生成的受体蛋白糖蛋白Ⅰb
‑Ⅸ‑Ⅴ
会依靠发生炎症的内皮细胞释放的血管性血友病因子（
vWF
）和胶原结合
。vWF
的
A3
结构域会先和胶原结合，在血流作用下
vWF
展开使得
A1
结构域暴露，血小板表面的受体蛋白糖蛋白Ⅰb
‑Ⅸ‑Ⅴ
和
A1
结构域结合从而使血小板粘附在胶原上
。
目前常见的药物主要是抑制血小板在胶原处的聚集，而从根源处直接抑制血小板粘附在胶原上的药物的研究相对较少
。

技术实现思路

[0003]本专利技术公开了一种多肽纳米材料及其制备方法和应用，以解决现有技术中上述以及潜在的任一问题
。
[0004]为达到上述目的，本专利技术提供的技术方案为：一种多肽纳米材料，该多肽纳米材料具有式Ⅰ所示的结构：
[0005][0006]式Ⅰ[0007]其中，
R1为一种具有分子内多重氢键的多肽序列，
R2为结合胶原的靶向肽，
R1与
R2之间通过酰胺键连接
。
[0008]进一步，所述
R1结构为：
[0009]。
[0010]进一步，所述
R2的结合胶原的靶向肽的结构为：
[0011]、
[0012][0013][0014]或
[0015]。
[0016]本专利技术的另一目的是提供一种上述的多肽纳米材料的制备方法，该制备方法为多肽固相合成法
。
[0017]进一步，所述多肽固相合成法具体包括如下步骤：
[0018]S1
）溶胀树脂：用
N,N
‑
二甲基甲酰胺溶胀
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂4‑
6h
；
[0019]S2
）脱保护：用二氯甲烷和
N,N
‑
二甲基甲酰胺溶剂交替反复冲洗多遍后，加入7‑
8mL
脱保护剂，摇床上摇
15
‑
20min
，完全脱除氨基酸的
Fmoc
基团；
[0020]S3
）检测：用二氯甲烷和
N,N
‑
二甲基甲酰胺溶剂交替冲洗多遍，在
1.5mL
离心管中加入卡瑟检测试剂以及少量
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂，沸水中加热离心管1‑
2min
；若
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂颗粒变为紫色，则表明
Fmoc
保护基已被脱除，若紫色很浅或树脂没有变紫，则重复
S2
），直到
Fmoc
完全脱除；
[0021]S4
）偶联：称相对
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂载量
10
倍当量的
Fmoc
‑
O
‑
叔丁基
‑
L
‑
谷氨酸和苯并三氮唑
‑
N,N,N',N'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯于
15mL
离心管中，加入8‑
9mL
的摇床上预反应
10
‑
15min
后加入多肽合成管中，放在摇床上反应1‑
2h
；
[0022]S5
）检测：用二氯甲烷和
N,N
‑
二甲基甲酰胺交替冲洗多遍，在
1.5mL
离心管中加入卡瑟检测试剂及少量树脂，在沸水中加热离心管1‑
2min
；若
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂颜色没有变化，则证明氨基酸偶联成功，如果颜色变为紫色，重复
S4
）；
[0023]S6
）循环偶联：重复
S2
）
、S3
）
、S4
）
、S5
），完成所有氨基酸的偶联，检测完最后一个氨基酸完全偶联后，用脱保护剂脱去
Fmoc
保护基团；
[0024]S7
）检测：重复
S2
）；
[0025]S8
）偶联十酸：十酸
‑
COOH
先放在真空干燥箱内避光干燥，再加加入偶联剂，在摇床
上预反应
10
‑
15min
后倒入多肽合成管中，多肽管上下口加封口膜并用锡箔纸包着放入袋中放在摇床上反应
1d
；
[0026]S9
）检测：重复
S5
）；
[0027]S10
）收缩：在甲醇中收缩树脂
15
‑
20min
，将收缩好的树脂转移至血清瓶中；
[0028]S11
）裂解：向装有树脂的血清瓶中加入
3mL
的裂解液，在冰浴中磁力搅拌3‑
4h
，抽滤，用三氟乙酸润洗血清瓶，再将三氟乙酸用氮气吹至剩余少量液体后，加入冰乙醚，再将多肽转移至离心管，
4℃
，
8000r
·
min
‑1下离心，用冰乙醚重复洗多次后，将多肽转移至
1.5mL
离心管，用封口膜封口，放在通风橱中过夜使乙醚挥发干净，得到多肽的固体粉末，
‑
20℃
保存
。
[0029]进一步，所述脱保护剂为
N,N
‑
二甲基甲酰胺和
1,8
‑
二氮杂二环十一碳
‑7‑
烯混合溶液，二者之间的质量比为
98:2。
[0030]进一步，所述偶联剂为
N,N
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于结合胶原的多肽纳米材料，其特征在于，所述多肽纳米材料具有式Ⅰ所示的结构：式Ⅰ其中，
R1为一种具有分子内多重氢键的多肽序列，
R2为结合胶原的靶向肽，
R1与
R2之间通过酰胺键连接
。2.
根据权利要求1所述的多肽纳米材料
,
其特征在于，所述
R1结构为：
。3.
根据权利要求1所述的多肽纳米材料
,
其特征在于，所述
R2的结合胶原的靶向肽的结构为：
、
或
。4.
一种如权利要求1‑3任意一项所述的多肽纳米材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法为多肽固相合成法
。5.
根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述多肽固相合成法具体包括如下步骤：
S1
）溶胀树脂：用
N,N
‑
二甲基甲酰胺溶胀
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂4‑
6h
；
S2
）脱保护：用二氯甲烷和
N,N
‑
二甲基甲酰胺溶剂交替反复冲洗多遍后，加入7‑
8mL
脱保护剂，摇床上摇
15
‑
20min
，完全脱除氨基酸的
Fmoc
基团；
S3
）检测：用二氯甲烷和
N,N
‑
二甲基甲酰胺溶剂交替冲洗多遍，在
1.5mL
离心管中加入
卡瑟检测试剂以及少量
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂，沸水中加热离心管1‑
2min
；若
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂颗粒变为紫色，则表明
Fmoc
保护基已被脱除，若紫色很浅或树脂没有变紫，则重复
S2
），直到
Fmoc
完全脱除；
S4
）偶联：称相对
Fmoc
‑
Gly
‑
王氏树脂载量
10
倍当量的
Fmoc
‑
O
‑
叔丁基
‑
L
‑
谷氨酸和苯并三氮唑
‑
N,N,N',N'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯于
15mL
离心管中，加入8‑
9mL
的摇床上预反应
10
‑
15min
后加入多肽合成管中，放在摇床上反应1‑
2h
；
S5
）检测：用二氯甲烷和
N,N...

【专利技术属性】
技术研发人员：乐恺，王安琪，闫晓彤，钟伟燊，张根培，覃煜鸣，张欣欣，
申请(专利权)人：北京科技大学，
类型：发明
国别省市：