非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白制造技术

本发明专利技术公开了非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白

【技术实现步骤摘要】
非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白CD2v胞外区靶标抗原特定表位及其抗体和应用


[0001]本专利技术属于生物医学和免疫诊断检测
，具体涉及一种非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白
CD2v
胞外区靶标抗原特定表位的制备及其感染性凝集抗体的检测应用
。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟
(African swine fever
，
ASF)
是猪的一种烈性传染病，其病原非洲猪瘟病毒
(ASFV)
强毒株感染猪的死亡率可达
100
％
。
其临床症状以高热
、
病程短
、
死亡率高
、
内脏器官广泛性出血以及呼吸系统
、
病毒血症和神经系统功能紊乱为主要特征
。
当前
ASF
疫情防控中，由于无有效的商品化疫苗及其他特效防治制剂，也会出现
ASFV
弱毒株和编码
CD2v
外囊膜蛋白的基因缺失株感染，防控形势十分严峻
。
因此必须执行严格的生物安全卫生措施及精准检测病原
(
核酸
)
和抗体，确保精准拔牙，带毒动物排除和清除
。
值得注意的是，仅非瘟病毒弱毒株和
CD2v
基因缺失株的感染猪，很多情况下，不出现病毒血症，如
ASFV Georgia
株缺失
CD2v
基因后，感染猪对发病和毒血症无明显影响，其检测监测评估，如果采用实时定量
PCR
，则不能在血液样品中测试
、
监测和明确验证出来
。
鉴于弱毒株和
CD2v
基因缺失株在猪群中带毒生产，和非瘟带毒生产猪群需要精准拔牙，在养猪生产中都需要考虑和及时解决上述瓶颈制约！
[0003]ASF
病毒是一种核质双链
DNA
大病毒，衣壳蛋白呈二十面体结构，外有囊膜蛋白包被
。
病毒粒子的长度介于
170
～
190kb
，有
150
多个主要开放阅读框，编码约
200
种蛋白质，其中存在许多与病毒复制
、
免疫逃逸和病毒传播等相关的蛋白
。ASF
靶标靶点蛋白的相关深入研究有助于其感染检测
、
致病机理和机体免疫系统反应的探究，尤其病毒外囊膜蛋白是病毒粒子最外层结构，最早识别宿主细胞表面受体，介导膜融合，帮助病毒遗传物质进入宿主细胞，囊膜蛋白表面含有多个表位，特定表位，中和表位，能够快速诱导机体先天性和获得性免疫应答，诱导感染宿主产生具有保护性免疫功能中和抗体
。
[0004]ASFV EP402R
基因编码的病毒外囊膜蛋白
CD2v
受到关注，作为一种糖蛋白，其在病毒感染晚期表达并在病毒扩散过程中发挥重要作用，因其编码免疫球蛋白样结构域的氨基酸序列与宿主细胞的
CD2
蛋白相似，所以命名为
CD2v。
其能够帮助
ASFV
感染细胞与猪血液中的红细胞结合，促进病毒在宿主内的扩散和传播，因此是研制基因缺失苗的常用靶基因
。
我国近期分子流行病学报道显示，临床上出现了由于
CD2v
自然变异株而失去红细胞吸附能力，攻毒试验发现这些病毒均为弱毒，感染潜伏期长，致猪群的死亡率下降
。CD2v
外囊膜蛋白的疏水性使结构解析困难，膜上环境的膜蛋白丰度低，存在大量大量跨膜区和糖基化修饰，基于传统性表达系统的异源表达无法完成完整功能性外囊膜蛋白
(
包括胞内
、
膜表面和胞外区
)
，异源表达的膜蛋白
(
膜表面和胞外区
)
插入会破坏表达宿主自身的细胞膜磷脂双分子层结构和分选转运途径，干扰细胞功能，致使宿主细胞裂解死亡
。
也难以获得表面展呈表达的功能性膜蛋白的全部和部分
。
通过对
CD2v
外囊膜蛋白跨膜区进行生物信息学分析，虽然发现序列中存在靶标靶点的多种抗原表位，但如何在
CD2v
胞外区靶标抗原的多种表位
中探索特定表位，能够获得表面展呈表达该
CD2v
胞外区靶标抗原特定表位，且功能性展呈表达在表面并特异性识别和结合针对非洲猪瘟
CD2v
表达毒株感染产生的特异性凝集抗体的技术瓶颈问题值得探索研究和应用
。
[0005]目前尚无
CD2v
外囊膜蛋白胞外区靶标抗原特定表位的细胞表面的展呈表达及检测
CD2v
感染性凝集抗体的相关报道
。

技术实现思路

[0006]专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种能早期诊断非洲猪瘟的
CD2v
外囊膜蛋白胞外区靶标抗原特定表位或含有其表位的嵌合蛋白
。
本专利技术所述的
CD2v
胞外区靶标抗原特定表位的表达序列来自非洲猪瘟
CD2v
表达毒株的外囊膜蛋白
CD2v
胞外区靶标抗原的特定
B
细胞表位，插入鸡白痢沙门氏菌
Peg
菌毛能实现融合菌毛表面展呈表达
。
[0007]本专利技术还要解决的技术问题是提供了编码所述的靶标抗原特定表位的核酸分子
。
[0008]本专利技术还要解决的技术问题是提供了表达盒
、
重组载体
、
重组细胞或重组菌株或感染性凝集抗体检测系统
。
[0009]本专利技术还要解决的技术问题是提供了重组表达载体或所述的特定表位靶向感染性凝集抗体检测系统的构建方法
。
[0010]本专利技术还要解决的技术问题是提供了
CD2v
外囊膜蛋白胞外区靶标抗原特定表位或含有其表位的嵌合蛋白
、
所述的靶标抗原的核酸或基因
、
所述的表达盒
、
重组载体
、
重组菌株或感染性凝集抗体检测系统在制备检测抗体试剂或试剂盒中的应用
。
[0011]本专利技术最后要解决的技术问题是提供了一种检测非洲猪瘟病毒
CD2v
表达毒株感染性凝集抗体的检测方法
。
[0012]技术方案：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白
CD2v
胞外区靶标抗原特定表位或含有其表位的嵌合蛋白，所述靶标抗原特定表位的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示，具体为：
IESPPPESNEE
，所述嵌合蛋白氨基酸序列如
SEQ ID NO.6
所示
。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白
CD2v
胞外区靶标抗原特定表位或含有其表位的嵌合蛋白，其特征在于，所述靶标抗原特定表位的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示，所述嵌合蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.6
所示
。2.
编码权利要求1所述的靶标抗原特定表位的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的
DNA
序列如
SEQ ID NO.1
所示
。3.
一种嵌合基因片段，其特征在于，所述嵌合基因片段是通过将权利要求1所述的靶标抗原特定表位的核酸分子插入到含有
Peg
菌毛基因序列的载体后得到的嵌合基因片段，作为优选，所述嵌合基因片段的序列如
SEQ ID NO.5
所示
。4.
表达盒
、
重组载体
、
重组细胞或重组菌株，其特征在于，其包含权利要求2所述的核酸分子或权利要求3所述的嵌合基因片段，作为优选，所述重组菌株包括将所述的重组载体导入载体菌中即得
。5.
一种感染性凝集抗体检测系统，其特征在于，所述感染性凝集抗体检测系统包括权利要求3所述的表达盒
、
重组载体
、
重组细胞或重组菌株
。6.
权利要求4所述的重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）非洲猪瘟病毒外囊膜蛋白
CD2v
胞外区靶标抗原特定表位
DNA
序列的获得；所述
DNA
序列如
SEQ ID NO.1
所示；（2）将步骤（1）得到的
DNA
序列插入含有

【专利技术属性】
技术研发人员：朱国强，张晓洁，刘家奇，段强德，羊扬，顾宣强，朱丛睿，朱晓芳，刘宝宝，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：