人制造技术

本发明专利技术公开了一种人

【技术实现步骤摘要】
人IgG受体蛋白、编码基因、免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种人
IgG
受体蛋白
、
编码基因
、
免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法及应用
。

技术介绍

[0002]SPG
，全称为链球菌蛋白
G(streptococcal protein G)
，是由近
600
个氨基酸组成，存在于链球菌细胞壁上的一种蛋白质
。
白蛋白结合域位于其
N
‑
端部分，
IgG
结合域与细胞壁结合域位于其
C
‑
端部分
。
链球菌蛋白
G
由于具有结合多种不同抗体的功能而被称为一种超级抗原，属于
III
型
Fc
受体，其结合机制类似于蛋白
A
的非免疫机制作用于抗体的
Fc
段，但其蛋白特性与金黄色葡萄球菌存在较大差异，比如：蛋白
G
可以与多种哺乳动物
(
人
、
马
、
羊
、
牛
、
大鼠
、
豚鼠
、
猫
、
小鼠
、
鸟
、
兔等
)
的
IgG
发生结合，不仅作用于
Fc
段还能结合
Fab
段，而蛋白
A
对某些哺乳动物的
IgG
结合能力很低或没有，且不能与占人
IgG
总量8％的
IgG3
相结合
。
与蛋白
A
相比，
SPG
的结合力更强
、
结合谱更广；同时
SPG
与血清蛋白结合水平更低，产物纯度高且配基脱落低，具有更广泛的应用前景
。
[0003]SPG
的基因由血清白蛋白结合区
、Fab
结合区
、Fc
结合区
、
细胞壁和细胞膜结合区组成，且他们之间功能的实现互不影响
。SPG
结构从疏水端开始是由4个氨基酸组成的同源结构，包括
A1、A、A3
，同时
A1、A2、A3
同源结构被同源区域
B1、B
隔开，同源结构由
51
个氨基酸组成，接着是一个间隔区
S
，随后是被
D1
和
D2
隔开的3个同源结构
C1、C2
和
C3
，该同源结构由
55
个氨基酸组成，
C3
区后面为
W
区，亦是亲水区，最后为
M
区
。
研究表明，
SPG
的
C
区与
IgG Fc
端的结合有关，而
C3
结构与
IgG
的结合能力比
C1、C2
强
。SPG
蛋白最初是通过木瓜蛋白酶消化链球菌
、
再经过柱层析和亲和层析分离纯化获得，每
50g
细菌仅可获得约
3mg SPG
纯品，且链球菌的致病性不利于
SPG
的安全获得
。
另外，
SPG
在大量结合
IgG
的同时，其白细胞结合位点能结合部分血清白蛋白
(
血清白蛋白是抗体来源的主要污染物
)。
近年来，通过基因工程重组表达
SPG
的应用已经有较多成功的案例，如利用大肠杆菌表达
SPG
，不需要利用蛋白酶消化细菌细胞壁
,
有效防止产物降解，且能设计重组
SPG
的基因，去除非特异性结合位点，更为高效安全的表达特异性结合更强的重组
SPG。
[0004]蛋白
G
是检测
IgG
的有力试剂，因此是检测这些抗体所针对的抗原
。
它用于蛋白质印迹分析，以检测硝酸纤维素膜上的各种抗原
‑
抗体复合物
。
而且，蛋白
G
被广泛用作亲和层析中与树脂偶联的配体，用于抗体纯化
。
经过基因工程重组的
SPG
去除了非特异性结合位点，如白蛋白及细胞表面结合位点，降低了非特异性结合与交叉反应，由此，重组
SPG
获得了比天然蛋白更高的亲和力，可以代二抗，广泛应用于免疫化学等领域
。
重组蛋白
G
在抗体纯化中具有不可替代的作用，随着对该蛋白功能研究的深入，市场对蛋白
G
及其亲和填料的需求量迅速提高
。
[0005]然而，目前全世界范围内，蛋白
G
相关产品较少，且国内相关产品存在产量低
、
活性差
、
载量低等不足
。
因此急需一种高载量
、
高特异性
、
产量高的改进蛋白
G。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供的一种人
IgG
受体蛋白
、
编码基因
、
免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法及应用，旨在解决上述
技术介绍
中存在的问题
。
[0007]为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用如下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术公开了一种可溶性人
IgG
受体蛋白，所述可溶性人
IgG
受体蛋白为链球菌蛋白
G
的
C3
结构域的多个串联体，命名为
SPG
n
，其中，
n
为4‑8的任一整数
。
[0009]在本专利技术的较佳实施方式中，所述
n
为6，所述可溶性人
IgG
受体蛋白命名为
SPG6，具有如
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列
。
[0010]第二方面，本专利技术公开了一种编码如第一方面所述的可溶性人
IgG
受体蛋白的基因，具有如
SEQ ID NO:2
所示的核苷酸序列
。
[0011]第三方面，本专利技术公开了一种具有纤维素结合功能的免疫球蛋白结合蛋白，所述免疫球蛋白结合蛋白包括如第一方面所述的可溶性人
IgG
受体蛋白
SPG6，并在所述
SPG6的
N
端添加半胱氨酸，...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种可溶性人
IgG
受体蛋白，其特征在于：所述可溶性人
IgG
受体蛋白为链球菌蛋白
G
的
C3
结构域的多个串联体，命名为
SPG
n
，其中，
n
为4‑8的任一整数
。2.
根据权利要求1所述的可溶性人
IgG
受体蛋白，其特征在于：所述
n
为6，所述可溶性人
IgG
受体蛋白命名为
SPG6，具有如
SEQ ID NO:1
所示的氨基酸序列
。3.
一种编码如权利要求2所述的可溶性人
IgG
受体蛋白的基因，具有如
SEQ ID NO:2
所示的核苷酸序列
。4.
一种具有纤维素结合功能的免疫球蛋白结合蛋白，其特征在于：所述免疫球蛋白结合蛋白包括如权利要求2所述的可溶性人
IgG
受体蛋白
SPG6，并在所述
SPG6的
N
端添加半胱氨酸，
C
端与纤维素结合区域
CBD
相连接，命名为
CBD
‑
SPG6。5.
一种编码如权利要求4所述的免疫球蛋白结合蛋白的氨基酸序列，如
SEQ ID NO:3
所示
。6.
一种如权利要求4所述的免疫球蛋白结合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
构建
CBD
‑
SPG6蛋白的表达载体，转入表达菌株，获得重组菌株；
(2)
将所述重组菌株进行扩大培养，收集菌体；
(3)

【专利技术属性】
技术研发人员：宗园园，韩振伟，张磊，陈梦林，史认辉，翁笛，沈乔，周春妮，贺从武，
申请(专利权)人：爱德思博武汉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：