一种靶向制造技术

本发明专利技术属于生物医药和分子生物学技术领域，具体涉及一种靶向

【技术实现步骤摘要】
一种靶向Claudin18.2的嵌合抗原受体、CAR
‑
T细胞及应用
[0001]本申请为申请号
202211727366X、
申请日
2022
年
12
月
30
日
、
专利技术名称“一种靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体
、CAR
‑
T
细胞及应用”的分案申请
。


[0002]本专利技术属于生物医药和分子生物学
，具体涉及一种靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体
、CAR
‑
T
细胞及应用
。

技术介绍

[0003]本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术
。
[0004]胃癌是全球癌症相关死亡的第三大原因，每年约有
100
万新确诊病例
。
尽管手术技术进步很大，化疗方案也有很大改进，但晚期胃癌患者的5年生存率约为5％
‑
20
％，中位总生存期
(OS)
约为
10
个月
。
大部分胃癌患者确诊时，病情已经进入中晚期，手术后效果极不理想，且预后极差，是临床上极为棘手的恶性肿瘤
。
因此，迫切需要开发延长治疗胃癌患者生命的策略
。
[0005]细胞间紧密连接是一种跨膜蛋白复合体，紧密连接的稳定需要几种不同蛋白的协调活动来维持，而
Claudin
蛋白是保证紧密连接渗透性具有特异性的主要蛋白
。
迄今在哺乳动物中已发现
27
个
Claudin
家族成员
。Claudin
蛋白家族分子量为
20
～
27KD
，结构中包括4个跨膜区域
、
两个细胞外环和一个细胞内环，其
N
端和
C
末端在胞浆内
。
两个细胞外环使其成为理想的抗体靶点
。Claudin
蛋白是构成紧密连接结构的骨架蛋白，位于相临细胞间隙顶侧，其分布具有组织器官特异性，功能主要为细胞间粘附
、
维持细胞极性
、
调节细胞旁通透性及参与细胞增殖
、
分化调节
。Claudin18
蛋白分子量约为
26KD
，
Claudin18
基因具有2个不同的第一外显子，可以通过选择性剪切使
Claudin
蛋白变成具有不同特性的
Claudin
亚型：
Claudin18.1
和
Claudin18.2。Claudin18.1
和
Claudin18.2
的第一胞外结构域之间虽然只有八个氨基酸的差异，但表达分布却不同，
Claudin18.1
在正常肺和胃的上皮中选择性表达，
Claudin18.2
只在短暂分化的胃上皮细胞上表达，在任何其他正常人器官中完全检测不到，但是
Claudin18.2
在多种恶性肿瘤中有显著上调，包括
80
％的胃肠道腺瘤
、60
％的胰腺肿瘤
、30
％食道癌以及
25
％非小细胞肺癌
。
在肿瘤中，细胞间的紧密连接遭到破坏，
Claudin18.2
无法发挥其正常功能
。
生存分析表明，胃癌中
Claudin18
表达减少与晚期患者的预后差有关，认为
Claudin18
表达减少是胃癌患者预后不佳的因素
。
因此，
Claudin18.2
是一个合适的肿瘤治疗靶标
。
[0006]Ganymed Pharmaceuticals AG
已开发出针对
CLDN18.2
的
IgG1
嵌合抗体
IMAB362。IMAB362
以高亲和力和特异性识别
CLDN18.2
的第一胞外结构域
(ECD1)。IMAB362
不与任何其它密蛋白家族成员结合，包括紧密相关的密蛋白
18
剪接变体
1(CLDN18.1)。IMAB362
表现出精确的肿瘤细胞特异性，并且组合了四中独立的高度有效的作用机制
。
靶标结合后，
IMAB362
通过
ADCC、CDC、
诱导通过肿瘤细胞表面上的靶标交联诱导的凋亡以及直接一直增殖来介导细胞杀伤
。
因此，
IMAB362
有效裂解
CLDN18.2
阳性细胞，包括体外和体内的人胃癌细胞系
。
具有
CLDN18.2
阳性癌细胞系的小鼠具有生存益处，并且当用
IMAB362
处理时，多至
40
％的小鼠表现出其肿瘤的退化
。
[0007]细胞治疗是一种新兴的
、
具有显著疗效的疾病治疗模式
。
本领域技术人员一直致力于开发新的细胞免疫疗法，以提高细胞免疫疗法的效果，并降低其副作用
。
表达嵌合抗原受体的
T
细胞在治疗恶性血液病方面表现出了显著的疗效，为肿瘤治疗提供了广阔的前景
。
嵌合抗原受体
T
细胞
(
简称
CART
或
CAR
‑
T)
是从患者体内分离出
T
细胞，在体外利用嵌合抗原受体
(CAR)
修饰
T
细胞，使其能够特异性识别癌细胞，然后再将改造后的
CART
细胞扩增
、
回输至患者体内，达到治疗肿瘤的效果
。

技术实现思路

[0008]针对现有技术中的不足，本专利技术提供一种靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体
、CAR
‑
T
细胞及应用
。
本专利技术以
Claudin18.2
蛋白为靶点，制备靶向
Claudin18.2
的纳米抗体，并进一步获得人源化纳米抗体，构建二代
CAR
质粒载体，通过分离
T
细胞，用编码
CAR
的慢病毒载体进行编程，从而获得一种表达靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体
(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体，其至少包含抗原结合域
、
跨膜结构域和至少一个胞内结构域，其特征在于，所述抗原结合域含有抗
Claudin18.2
单域抗体；其中，所述抗
Claudin18.2
单域抗体的氨基酸序列选自：
a1)
如
SEQ ID NO.22、3、5、7、14、18、20、24
所示的氨基酸序列；或，
a2)
与
SEQ ID NO.22、3、5、7、14、18、20、24
任一项序列具有
≥80
％序列同一性的序列，或与
SEQ ID NO.22、3、5、7、14、18、20、24
任一项所示的序列相比具有一个或多个保守氨基酸突变的氨基酸序列；且仍然具有能够特异结合在嵌合抗原受体上，具有结合
Claudin18.2
和诱导
T
细胞信号传导功能
。2.
如权利要求1所述的靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体，其特征在于，所述跨膜结构域为
CD8
跨膜结构域和
/
或
CD28
跨膜结构域；所述
CD8
跨膜结构域的核苷酸序列如
SEQ ID NO.11
所示
。3.
如权利要求1所述的靶向
Claudin18.2
的嵌合抗原受体，其特征在于，所述胞内结构域包括胞内共刺激信号传导域和
/
或
CD3
ζ
信号传导域；所述共刺激信号传导结构域包括但不限于人4‑
1BB
胞内区
、
人
CD28
胞内区
、
人
CD27
胞内区
、
人
CD30
胞内区
、
人
CD40
胞内区或人
OX40
胞内区中的任意一种或多种的组合，优选为人
CD28
胞内区；所述人
CD28
胞内区的核苷酸序列如
SEQ ID NO.26
所示；所述
CD3
ζ
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙卫平，韦雨萌，
申请(专利权)人：邦恩泰山东生物医药科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：