一种融合蛋白制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种融合蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白FNP
‑
Fc
‑
OVA
257
‑
264
及其纳米颗粒肿瘤疫苗与制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及5个携带表位肽
OVA
257
‑
264
的抗体恒定区
Fc
融合蛋白
Fc
‑
OVA
257
‑
264
及铁蛋白
(Ferritin)
与四串联重复金黄色葡萄球菌
A
蛋白
B
结构域
(SpA4B)
的融合蛋白
FNP(Ferritin
‑
based nanoparticle)。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤已经成为严重威胁全球人群健康的主要公共卫生问题之一，每年恶性肿瘤所致的医疗花费超过
2200
亿，对居民的健康和经济发展造成了严重的威胁
。
恶性肿瘤的发病机理已取得许多重大进展，但能显著提高恶性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种融合蛋白
FNP
‑
Fc
‑
OVA
257
‑
264
，其特征在于，包含如下两个蛋白片段结构：携带表位肽
OVA
257
‑
264
的抗体恒定区
Fc
融合蛋白
Fc
‑
OVA
257
‑
264
，及铁蛋白
Ferritin
与四串联重复金黄色葡萄球菌
A
蛋白
B
结构域
SpA4B
的融合蛋白
FNP
；其中
FNP
的基因序列如
SEQ ID NO:1
所示；
FNP
的氨基酸序列如
SEQ ID NO:2
所示
。2.
如权利要求1所述的融合蛋白
FNP
‑
Fc
‑
OVA
257
‑
264
，其特征在于，所述融合蛋白
Fc
‑
OVA
257
‑
264
包含5个抗原表位插入位点
。3.
如权利要求2所述的融合蛋白
FNP
‑
Fc
‑
OVA
257
‑
264
，其特征在于，所述包含5个抗原表位插入位点的
Fc
‑
OVA
257
‑
264
的基因序列分别是
SEQ ID NO:3
‑7，所编码的对应的氨基酸序列分别是
SEQ ID NO:8
‑
12。4.
如权利要求1‑3中任一所述的融合蛋白
FNP
‑
Fc
‑
OVA
257
‑
264
，其特征在于，所述铁蛋白
Ferritin
与四串联重复金黄色葡萄球菌
A
蛋白
B
结构域
SpA4B
的融合蛋白
FNP
通过如下方法制备：
1)
准备原核表达质粒的表达载体
pET
‑
28a(+)。2)
转化：将
1)
中的质粒干粉离心，加入水充分溶解，加入感受态细胞中，向上述感受态细胞中加入液体培养基，置于摇床中培养
30
；取出感受态细胞离心，取培养基重悬菌泥，涂布于平板上，置于孵箱培养过夜
。3)
细菌培养：取出
2)
中培养过夜的平板，挑取单克隆至卡那霉素抗性
LB
液体培养基中，培养过夜第一次活化；第二天将培养好的菌液加入卡那霉素抗性
LB
液体培养基中，置于摇床中培养
4h
第二次活化；降温；
4)
诱导表达：将配制好的
IPTG
储存液加入到上述降温好的菌液中，培养过夜；
5)
菌体收集及超声裂解：将
4)
中培养好的菌液分装至离心桶中，离心，弃去上清后将菌泥重悬，将上述重悬好的菌液进行裂解，裂解好的菌液置于高速冷冻离心机中离心，收集上清；
6)
镍离子填料亲和层析：取镍离子填料置于亲和层析柱中，蛋白缓冲液，随后将
5)
中收集好的上清转移至层析柱中，并置于垂直混合仪上室温结合；弃去结合上清，先后用配制好的咪唑梯度洗脱并分别收集洗脱液；
7)
置换缓冲液：将
6)
中收集到的不同浓度的咪唑洗脱液通过
SDS
‑
PAGE
进行鉴定，选择合适浓度的洗脱液通过层析柱将目的蛋白置换到缓冲液中，分装后保存于
‑
80℃
冰箱备用；
8)SDS
‑
PAGE
检测目的蛋白
FNP。5.
权利要求1‑3中任一所述的融合蛋白
FNP
‑
Fc
‑
OVA
257
‑
264
制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)

【专利技术属性】
技术研发人员：顾江，高晨，张怡，程新，李宇航，罗萍，鲁东水，曾浩，邹全明，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：