用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法


[0001]本专利技术属于体外诊断生化检测
，具体涉及用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条及其制备方法
。

技术介绍

[0002]基于荧光免疫层析技术的抗体检测相比酶联免疫法等方法的自动化程度更高，应用前景更广
。
对于荧光免疫层析试纸条的检测性能的提高主要在于检测灵敏度和重复性的提高，进而提高检测结果准确度，降低漏检率
。
[0003]另外，在临床中，通常需要结合多个相关抗体水平辅助疾病诊断
。
例如抗中性粒细胞胞浆抗体（
ANCA
）是指与中性粒细胞及单核细胞胞浆中溶酶体酶发生反应的抗体，是鉴别诊断血管炎的重要标记物，分胞浆型（
c
‑
ANCA
）和核周型（
p
‑
ANCA
）两种
。
髓过氧化物酶（
MPO
）是
p
‑
ANCA
的主要靶抗原，蛋白酶3（
PR3
）是胞浆型
ANCA
（
c
‑
ANCA
）的主要靶抗原，抗
MPO
抗体和抗
PR3
抗体临床上用于韦格纳肉芽肿（
WG
）等原发性系统性血管炎的辅助诊断
。
抗肾小球基底膜抗体（抗
GBM
抗体）同样作为血管炎鉴定诊断指标之一，在检测抗髓过氧化物酶抗体
、
抗蛋白酶3抗体的同时，联合检测抗肾小球基底膜抗体，满足同时检测血管炎三项指标可对
ANCA
相关小血管炎的诊断
、
治疗和预后判断有重要的临床意义
。
目前市面上还未见同时检测抗
MPO
抗体和抗
PR3
抗体的荧光免疫层析试纸条或同时检测抗
MPO
抗体
、
抗
PR3
抗体和抗
GBM
抗体的荧光免疫层析试纸条
。
[0004]在自身免疫性疾病的实际诊断中，由于一种自身免疫性疾病可检测出多种自身抗体，因此临床往往需要参考多种免疫指标才能得出正确的诊断，联合检测可大幅减少因单项检测出现的漏诊问题，然而常规的单抗体检测试纸条一次只能检测一种抗体水平，而多指标检测则需要不同的检测试纸条，成本高，耗时长，样本所需量大
。
而多抗体荧光免疫层析试纸条，需要同时保证多个抗体的检测灵敏度
、
特异性和准确度，开发难度更高
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种检测灵敏度更高
、
重复性更好的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条
。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，包括底板和依次搭载在所述底板上的样本垫
、
结合垫
、
硝酸纤维素膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光微球标记的抗人
IgG
抗体和荧光微球标记的
DNP
‑
BSA
，所述硝酸纤维素膜上设有抗体检测线和质控线，所述抗体检测线由包被在所述硝酸纤维素膜上的胶乳微球标记的抗原形成，所述胶乳微球的粒径为
100nm~400nm。
[0007]优选地，所述胶乳微球的粒径为
135nm~250nm
，例如
135nm、140nm、145nm、150nm、155nm、160nm、165nm、170nm、175nm、180nm、185nm、190nm、195nm、200nm、205nm、210nm、215nm、220nm、225nm、230nm、235nm、240nm、245nm、250nm。
[0008]进一步优选地，所述胶乳微球的粒径为
150nm~230nm。
[0009]再进一步优选地，所述胶乳微球的粒径为
160nm~220nm。
[0010]更进一步优选地，所述胶乳微球的粒径为
180nm~200nm。
[0011]优选地，所述荧光微球为铕螯合荧光微球
。
[0012]优选地，所述荧光微球的粒径为
100nm~300nm
，例如
100nm、110nm、120nm、130nm、140nm、150nm、160nm、170nm、180nm、190nm、200nm、210nm、220nm、230nm、240nm、250nm、260nm、270nm、280nm、290nm、300nm。
[0013]进一步优选地，所述荧光微球的粒径为
150nm~250nm。
[0014]更进一步优选地，所述荧光微球的粒径为
180nm~220nm。
[0015]优选地，所述硝酸纤维素膜上设有多条互不干涉的抗体检测线，不同抗体检测线上包被的抗原不同
。
[0016]进一步优选地，所述硝酸纤维素膜上设有
2~4
条互不干涉的抗体检测线，相邻两条抗体检测线之间的距离为
4mm~5mm。
[0017]进一步优选地，所述胶乳微球标记的抗原选自胶乳微球标记的
MPO
抗原
、
胶乳微球标记的
PR3
抗原
、
胶乳微球标记的
GBM
抗原
。
[0018]优选地，所述样本垫为包被有酪蛋白
、
吐温
、
海藻糖和异嗜性抗体阻断剂的玻璃纤维素膜
。
[0019]优选地，所述结合垫采用玻璃纤维素膜，其上包被的荧光微球标记的抗人
IgG
抗体和荧光微球标记的
DNP
‑
BSA
的体积比为（
8~20
）
:1
，进一步优选为（
10~15
）
:1
，再进一步优选为（
12~15
）
:1。
[0020]优选地，所述质控线由包被在所述硝酸纤维素膜上的
DNP
抗体形成
。
[0021]本专利技术还提供上述用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条的制备方法，所述制备方法包括：采用样本垫封闭液处理第一玻璃纤维膜制得样本垫；将含有荧光微球标记的抗人
IgG
抗体和荧光微球标记的
DNP
‑
BSA
的喷金液喷涂到第二玻璃纤维素膜上，经烘干制得所述结合垫；将胶乳微球标记的抗原包被在硝酸纤维素膜上形成检测线，将
DNP
抗体包被在硝酸纤维素膜上形成质控线；将样本垫
、
结合垫
、
硝酸纤维素膜
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，包括底板和依次搭载在所述底板上的样本垫
、
结合垫
、
硝酸纤维素膜和吸水纸，其特征在于，所述结合垫上包被有荧光微球标记的抗人
IgG
抗体和荧光微球标记的
DNP
‑
BSA
，所述硝酸纤维素膜上设有抗体检测线和质控线，所述抗体检测线由包被在所述硝酸纤维素膜上的胶乳微球标记的抗原形成，所述胶乳微球的粒径为
100nm~400nm。2.
根据权利要求1所述的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶乳微球的粒径为
135nm~250nm。3.
根据权利要求1所述的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述荧光微球为铕螯合荧光微球；和
/
或，所述荧光微球的粒径为
100nm~300nm。4.
根据权利要求1所述的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上设有多条互不干涉的抗体检测线，不同抗体检测线上包被的抗原不同
。5.
根据权利要求1或4所述的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述胶乳微球标记的抗原选自胶乳微球标记的
MPO
抗原
、
胶乳微球标记的
PR3
抗原
、
胶乳微球标记的
GBM
抗原
。6.
根据权利要求1所述的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条，其特征在于，所述样本垫为包被有酪蛋白
、
吐温
、
海藻糖和异嗜性抗体阻断剂的玻璃纤维素膜；和
/
或，所述结合垫采用玻璃纤维素膜，其上包被的荧光微球标记的抗人
IgG
抗体和荧光微球标记的
DNP
‑
BSA
的体积比为（
8~20
）
:1
；和
/
或，所述质控线由包被在所述硝酸纤维素膜上的
DNP
抗体形成
。7.
如权利要求1至6中任一项所述的用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：采用样本垫封闭液处理第一玻璃纤维膜制得样本垫；将含有荧光微球标记的抗人
IgG
抗体和荧光微球标记的
DNP
‑
BSA
的喷金液喷涂到第二玻璃纤维素膜上，经烘干制得所述结合垫；将胶乳微球标记的抗原包被在硝酸纤维素膜上形成检测线，将
DNP
抗体包被在硝酸纤维素膜上形成质控线；将样本垫
、
结合垫
、
硝酸纤维素膜
、
吸水纸以及底板组装得到所述用于抗体定量检测的荧光免疫层析试纸条
。8.
根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述样本垫封闭液的配方为：
0.1~0.5wt%
酪蛋白
、0.5~1.5wt%
吐温

【专利技术属性】
技术研发人员：姚辉，张瑜，张林昀，
申请(专利权)人：苏州迪亚莱博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：