一种检测美洛昔康的试纸条及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测美洛昔康的试纸条及其应用

【技术实现步骤摘要】
一种检测美洛昔康的试纸条及其应用


[0001]本专利技术涉及一种检测美洛昔康的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测美洛昔康的胶体金试纸条，其特别适用于乳及乳制品
(
生牛乳
、
巴氏杀菌乳
、UHT
灭菌乳
、
羊奶
)
中美洛昔康残留的检测
。

技术介绍

[0002]美洛昔康
(meloxicam)
是一种新型非甾体抗炎药，具有良好的解热镇痛
、
消炎等作用，在兽医临床治疗方面应用广泛
。
然而，由于畜牧业的规模化发展，养殖数量大，不法养殖户滥用兽药
、
不遵守休药期等规定，导致动物源性食品残留美洛昔康药物，该药物可能引起胃肠道
、
肝脏
、
神经系统
、
泌尿系统及血液系统等不良反应
。
[0003]为保证消费者利益和动物源性食品的安全，一些国家和地区规定了美洛昔康的最大残留限量
(MRLs)
，如欧盟规定了美洛昔康在牛奶中的
MRLs
为
15
μ
g/kg
，加拿大规定了美洛昔康在牛奶中的
MRLs
为
35
μ
g/kg。
我国
GB
‑
31650.1
‑
2022《
食品安全国家标准食品中
41
种兽药最大残留限量r/>》
规定了美洛昔康在牛奶中的
MRLs
为
15
μ
g/kg。
[0004]检测美洛昔康的方法有高效液相色谱法
、
高效液相色谱
‑
质谱
/
质谱法
、
超高效液相色谱
‑
质谱
/
质谱法
、
液相色谱
‑
质谱
/
质谱法等
。
与上述方法相比，免疫化学检测法对药物检测具有快速
、
特异
、
灵敏
、
准确
、
可以批量监测
、
样品处理简单
、
能实现自动化操作等优点
。
而免疫化学法检测美洛昔康的前提是需要具备针对美洛昔康的抗体，本申请专利技术了美洛昔康人工抗原制备方法，并将其应用于胶体金免疫层析快速检测试纸条中，用时短，操作简单，成本较低，适用于基层单位大批量地检测样品
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种灵敏度高
、
操作简单
、
成本低
、
检测时间短的美洛昔康残留检测试纸条
。
[0006]本专利技术所提供的检测美洛昔康残留的试纸条，包括样品吸收垫
(1)、
结合物释放垫
(2)、
反应膜
(3)、
吸水垫
(4)
和底板
(7)
；所述反应膜上具有包被有美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线
(5)
和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线
(6)
，所述结合物释放垫
(2)
喷涂有美洛昔康单克隆抗体
‑
胶体金标记物
。
[0007]所述美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物是由美洛昔康半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白
、
卵清蛋白
、
血蓝蛋白
、
甲状腺蛋白
、
人血清白蛋白
。
[0008]所述美洛昔康单克隆抗体是以美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由美洛昔康单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到
。
[0009]所述样品吸收垫
(1)、
结合物释放垫
(2)、
反应膜
(3)、
吸水垫
(4)
依次粘贴在底板
(7)
上，所述结合物释放垫
1/3
～
1/2
被覆盖于样品吸收垫下
。
[0010]所述底板可为
PVC
底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或
滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜
。
[0011]本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：
[0012]1)
制备喷涂有美洛昔康单克隆抗体
‑
胶体金标记物的结合物释放垫；
[0013]2)
制备具有包被有美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；
[0014]3)
将
1)
和
2)
制备好的结合物释放垫
、
反应膜与样品吸收垫
、
吸水垫和底板组装成试纸条
。
[0015]具体地说，步骤包括：
[0016]1)
半抗原制备：将美洛昔康与
1,4
‑
二氧六环等物质经过一系列化学反应得到美洛昔康半抗原；
[0017]2)
将美洛昔康半抗原与载体蛋白偶联，得到美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物；
[0018]3)
用美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合
、
筛选，得到美洛昔康单克隆杂交瘤细胞株；
[0019]4)
提取小鼠
IgG
免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；
[0020]5)
用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；
[0021]6)
将步骤
3)
制备的美洛昔康单克隆抗体加入步骤
5)
制备的胶体金中，得到美洛昔康单克隆抗体
‑
胶体金标记物；
[0022]7)
将美洛昔康单克隆抗体
‑
胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，
37℃
烘
1h
后取出，置于干燥环境中保存备用；
[0023]8)
将美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；
[0024]9)
将样品吸收垫用含
0.5
％牛血清白蛋白
(
体积分数
)、pH
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测美洛昔康的试纸条，包括样品吸收垫
(1)、
结合物释放垫
(2)、
反应膜
(3)、
吸水垫
(4)
和底板
(7)
，其特征在于所述反应膜上具有包被有美洛昔康半抗原
‑
载体蛋白偶联物的检测线
(5)
和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线
(6)
，所述结合物释放垫
(2)
喷涂有美洛昔康单克隆抗体
‑
胶体金标记物，所述美洛昔康半抗原的制备方法如下：
3.0g
化合物Ⅰ，加入
1,4
‑
二氧六环
80mL
，加叔丁醇钠
1.15g
，醋酸铅
0.2g
，
(2R)
‑1‑
[(1R)
‑1‑
[
双
(1,1
‑
二叔丁基
)
膦
]
乙基
]
‑2‑
(
二环己基膦
)
二茂铁
0.2g
，充分搅拌，加巯基丙酸
2.12g
，搅拌，加热回流反应
12h
；停止加热，冷却至室温，加水
200mL
，加乙酸乙酯
100mL
，萃取，除去水相，有机相蒸干，无水乙醇
20mL
重结晶，得到化合物Ⅱ1.49g
，收率
39.9
％；全部的化合物Ⅱ1.49g
，依次加二甲基甲酰胺
20mL、
二甲苯
80mL
，加2‑
氨基
‑5‑
甲基噻唑
0.68g
，充分搅拌，装上回流冷凝管，加热回流反应
24h
，旋蒸，除去有机溶剂，得到红色油状物，上硅胶柱，加体积比为
5/1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴小胜，惠光朋，贾芳芳，屈秀玲，张坤，罗旭轲，陶燕飞，孟庆林，李楠，
申请(专利权)人：广州勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：