一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于靶向宏基因组检测（

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于靶向宏基因组检测
(tNGS)
领域，具体公开了一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒及其制备方法与应用
。

技术介绍

[0002]感染
(Infection)
是指细菌
、
病毒
、
真菌
、
寄生虫等病原体侵入人体所引起的局部组织和全身性炎症反应
。
由于感染引起的疾病称为感染性疾病，部分具有传染性
。
机体各个器官
、
组织
、
系统均可有感染情况发生，且不同器官系统的感染性疾病，其临床表现可存在一定差异
。
通常医生会根据临床表现进行经验性用药，根据治疗效果以及获得感染的病原体类型后再进行药物类型
、
剂量调整
。
造成人类感染性疾病的病原体日益复杂
、
种类增多，病原体不明确导致抗菌药物滥用进而致使细菌耐药，病原微生物已成为全球关注的焦点
。
据
WHO
统计，
2019
年，全球
5540
万死亡病例中，
10
大死因占
55
％
。
其中下呼吸道感染是世界上最致命的传染病，排在主要死亡原因的第四位，
2019
年死亡人数为
260
万人
。
[0003]病原体快速准确的检测和鉴定是感染治疗的首要问题
。
随着生物学研究由宏观领域向微观领域的发展，病原体检测方法也从组织形态学水平深入到分子水平
、
基因水平
。
在过去，检测病原更多地依赖培养
、
镜检
、
生化指标等经典检测技术，或者质谱
、
荧光定量
PCR
等分子检测技术，这些检测技术需要经验积累，还存在分辨率不足
、
时效性不够
、
通量有限
、
无法检测未知病原等缺点
。
最近几年，随着技术发展，病原宏基因组检测技术
(metagenomics Next Generation Sequencing
，简称
mNGS)
在临床病原检测
、
院感监测
、
流调等方面的应用越来越成熟，无需预设，无需培养，无偏好性，直接提取临床样本中的
DNA/RNA
，进行二代高通量测序，经过专用病原数据库比对与生信分析，一次性完成细菌
、
病毒
、
真菌
、
寄生虫等病原体的检测
。
新型冠状病毒
SAR
‑
COV2
由
mNGS
首次检出，使之声名鹊起
。mNGS
检测优势巨大，也有明显的缺点，比如报告解读困难和检测灵敏度不足
。
前者是因为检出非常多微生物，难以明确主要致病病原体
。
后者是因为临床样本中大多数数据是人的序列，导致其检测灵敏度不足
。

技术实现思路

[0004]针对现有技术不足，本文公开了一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，仅需微量基因组
DNA
，通过多重
PCR
反应，然后再利用样本中不同微生物核酸不同，即可快速完成病原体鉴定
。
[0005]本专利技术包括以下技术方案：
[0006]一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，包括样本处理液，2×
多重逆转录
PCR
反应液
、
逆转录
PCR
酶混合液
、
逆转录引物混合液；多重
PCR
特异性引物混合液
、
无
RNA
酶水
、
阳性对照
。
[0007]进一步的，上述一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，所述病原体包括甲
流病毒
、
乙流病毒
、
合胞病毒和新冠病毒四大类病毒
。
[0008]进一步的，上述一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，所述多重
PCR
特异性引物包括以下四组多重
PCR
引物对，是分别针对甲流病毒
、
乙流病毒
、
合胞病毒和新冠病毒四大类病毒的相对通用引物
。
[0009]进一步的，上述一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，所述多重
PCR
特异性引物包括以下引物对：
[0010]针对甲流病毒的引物对包括：
[0011]甲
F
引物＝
SEQ ID NO
：1＝
AGACCTATTCCCCTCCTCTAAC
；
[0012]甲
R
引物＝
SEQ ID NO
：2＝
AGGCATCACTTCATTCATTC
；
[0013]针对乙流病毒的引物对包括：
[0014]乙
F
引物＝
SEQ ID NO
：3＝
TAACTGACTTCTTACTACCC
；
[0015]乙
R
引物＝
SEQ ID NO
：4＝
TTACACTTCTAGGCTCCTTA
；
[0016]针对合胞病毒的引物对包括：
[0017]合
F
引物＝
SEQ ID NO
：5＝
AACCTCTACTTCCTATCA
；
[0018]合
R
引物＝
SEQ ID NO
：6＝
CATCGGCATCAGTTCTTACC
；
[0019]针对新冠病毒的引物对包括：
[0020]新
F
引物＝
SEQ ID NO
：7＝
GGTATTCATCTACGTACTG
；
[0021]新
R
引物＝
SEQ ID NO
：8＝
ACTCCGTAGCCTCAGCTCTA。
[0022]进一步的，本专利技术公开了一种同时检测多种病原体的靶向检测方法，所述方法中使用上述的靶向检测试剂盒
。
[0023]进一步的，上述同时检测多种病原体的靶向检测方法，包括以下步骤：
[0024](1)
收集样品，使用样本处理液处理样品；
[0025](3)
以提取的总核酸为模板进行反转录；
[0026](本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，其特征在于，包括，样本处理液，2×
多重逆转录
PCR
反应液
、
逆转录
PCR
酶混合液
、
逆转录引物混合液；多重
PCR
特异性引物混合液
、
无
RNA
酶水
、
阳性对照
。2.
根据权利要求1所述的一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，其特征在于，所述病原体包括甲流病毒
、
乙流病毒
、
合胞病毒和新冠病毒四大类病毒
。3.
根据权利要求1所述的一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，其特征在于，所述多重
PCR
特异性引物包括以下四组多重
PCR
引物对，是分别针对甲流病毒
、
乙流病毒
、
合胞病毒和新冠病毒四大类病毒的相对通用引物
。4.
根据权利要求3所述的一种同时检测多种病原体的靶向检测试剂盒，其特征在于，所述多重
PCR
特异性引物包括以下引物对：针对甲流病毒的引物对包括：甲
F
引物
=SEQ ID NO ：
1=AGACCTATTCCCCTCCTCTAAC
；甲
R
引物
=SEQ ID NO
：
2=AGGCATCACTTCATTCATTC
；针对乙流病毒的引物对包括：乙
F
引物
= SEQ ID NO
：
3=TAACTGACTTCTTACTACCC
；乙
R
引物
= SEQ ID NO
：
4=TTACACTTCTAGGCTCCTTA
；针对合胞病毒的引物对包...

【专利技术属性】
技术研发人员：范婷婷，张雪英，张文锐，
申请(专利权)人：南京艾迪康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：