扩张床吸附分离人凝血酶原复合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种扩张床吸附分离人凝血酶原复合物的方法，包括以下步骤：（ａ）将融化后的冰冻血浆采用冷冻式连续流离心机分离出冷沉淀，收集上清液为原料；（ｂ）扩张床先用缓冲液Ａ进行稳定扩张，所述的缓冲液Ａ为ＰＨ７．０的０．０５ｍｏｌ／Ｌ１ｔｒｉｓ－柠檬酸；（ｃ）扩张床达稳定平衡后，迅速切换为原料液，待穿透点达５～１０％时，停止进料并迅速切换为缓冲液Ａ在扩张模式下进行洗涤；（ｄ）洗涤结束后切换为缓冲液为０．４ｍｏｌ／ＬＮａＣｌ和１．６ｍｏｌ／Ｌ?ＮａＣｌ在固定床模式下进行梯度洗脱，收集缓冲液为１．６ｍｏｌＮａＣｌ的蛋白洗脱峰，得凝血酶原复合物粗品。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
扩张床吸附分离人凝血酶原复合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：　　（ａ）将融化后的冰冻血浆采用冷冻式连续流离心机分离出冷沉淀或将从血浆蛋白中分离出来的含有凝血因子的第三组分沉淀溶解液采用冷冻式连续流离心机分离出硅藻土，收集上清液为原料液备装有吸附树脂的扩张床装置使用；　　（ｂ）扩张床先用缓冲液Ａ进行稳定扩张，扩张率为２倍，流速为３５０ｃｍ／ｈ，平衡时间为２０～３０ｍｉｎ，所述的缓冲液Ａ为ＰＨ值均为７．０的０．０５ｍｏｌ／Ｌ　ｔｒｉｓ－柠檬酸、０．０１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸－ＮａＯＨ或０．０１ｍｏｌ／Ｌ　ｔｒｉｓ－ＨＣｌ中的任一种，在加入缓冲液Ａ的同时加入蛋白活性保护剂，所述蛋白活性保护剂为浓度０．０６ｍｏｌ／Ｌ的溶液，所述蛋白活性保护剂为蔗糖、甘露醇或甘氨酸中的任一种；　　（ｃ）扩张床达稳定平衡后，迅速切换为步骤（ａ）制得的原料液，待穿透点达５～１０％时，停止进料并迅速切换为缓冲液Ａ在扩张模式下进行洗涤，洗涤液的量为４～６倍柱体积；　　（ｄ）洗涤结束后切换为缓冲液Ｂ１和Ｂ２在固定床模式下进行梯度洗脱，洗脱液的量为２～３倍柱体积，收集洗脱液得初步纯化的凝血酶原复合物蛋白溶液，所述缓冲液Ｂ１为０．４ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ溶液，缓冲液Ｂ２为１．６ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ溶液，收集缓冲液Ｂ２的蛋白洗脱峰，得凝血酶原复合物粗品。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邱家山，赵红卫，何琦，
申请(专利权)人：成都英德生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]