肽片段及其利用制造技术

本发明专利技术提供一种能够高效地将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内的人工合成的肽片段

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】肽片段及其利用


[0001]本专利技术涉及将外源物质从真核细胞的外部导入
(
转运
)
到该细胞的内部的方法
、
用于该方法的具有载体肽片段的外源物质导入用构建体和构成该载体肽片段的肽片段
。
[0002]其中，本专利技术基于
2021
年4月
28
日所提出的日本专利申请
2021
－
75809
号主张优先权，并将该专利的全部内容作为参照而引入本说明书中
。

技术介绍

[0003]目前，进行了向人或人以外的哺乳动物等的细胞
(
真核细胞
)
内导入多肽等外源物质
、
尤其是生理活性物质，转变该细胞
(
以及由该细胞构成的组织或器官
)
的性状，或者改善和提高该细胞的功能的操作
。
[0004]例如在专利文献1中公开了一种外源物质导入用构建体，其包含序列号2所记载的氨基酸序列和目标外源物质，已知该氨基酸序列为
LIM
激酶2的核小体定位信号
(
参照非专利文献
1)
，该
LIM
激酶2为存在于人内皮细胞的参与细胞内信息传递的蛋白激酶的1种
。
该氨基酸序列为优异的细胞膜透过性肽，因此该构建体能够高效地通过真核细胞的细胞膜
。
由此，能够高效地将上述目标外源物质从真核细胞的外部导入该细胞的细胞质内
。
[0005]现有技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1：国际公开第
2011/013700
号
[0008]专利文献2：日本特开
2005
－
330206
号公报
[0009]非专利文献
[0010]非专利文献1：生物化学期刊
(JOUNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY)
，
281
卷
35
号，
2006
年，
pp.25223
－
25230

技术实现思路

[0011]近年来，对具有优异的细胞膜透过性的肽的关注越来越高，从医疗等的观点考虑，希望开发出比目前更有效地将外源物质导入目标细胞内的技术
。
[0012]因此，本专利技术是为了应对这样的期望而作出的专利技术，其目的在于，提供一种能够高效地将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内的肽片段
。
另外，另一目的在于，提供一种具有这样的肽片段和上述外源物质的外源物质导入用构建体
。
此外，本专利技术目的在于，提供一种能够高效地将这样的构建体从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内的方法
。
[0013]为了实现上述目的，本专利技术的专利技术人对具有优异的细胞膜透过性并且能够将外源物质从真核细胞的外部
(
即细胞膜的外侧
)
至少导入该细胞的细胞质内的氨基酸序列进行探索，关注到由序列号3所示的冯
·
希佩尔
‑
林道病
(Von Hippel
‑
Lindau
，
VHL)
蛋白质的氨基酸序列的第
157
位至第
171
位的
15
个连续的氨基酸残基构成的氨基酸序列
(VHL
相关肽基序
)。
这样的
VHL
相关肽基序作为参与神经分化诱导的肽基序，是本专利技术的专利技术人所发现的
氨基酸序列
。
并且，本专利技术的专利技术人进行了深入研究，结果发现，串联重复配置
VHL
相关肽基序的
C
末端侧的7个氨基酸残基，并且将精氨酸残基取代成赖氨酸残基，由此能够发挥优异的细胞膜透过性
。
[0014]即，本专利技术所公开的肽片段为用于将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内的肽片段，该肽片段构成为：串联配置有2个以上的以下氨基酸序列：
VVKSLVK(
序列号
1)
，在该氨基酸序列之间不含其他的氨基酸残基，或者在该氨基酸序列之间存在由1～5个氨基酸残基构成的肽接头
。
[0015]这样的构成的肽片段具有优异的细胞膜透过性，因此能够高效地将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内
。
[0016]另外，在本专利技术所公开的肽片段的优选的一个方式中，在上述氨基酸序列之间不含其他的氨基酸残基
。
另外，在优选的一个方式中，串联配置有2个上述序列号1所示的氨基酸序列
。
利用这样的构成，能够以更短的序列实现优异的细胞膜透过性
。
[0017]另外，为了实现上述目的，在其他方面提供一种用于将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入
(
转运
)
到该细胞的细胞质内而人工制作的外源物质导入用构建体
。
[0018]即，本专利技术所公开的外源物质导入用构建体具有由本专利技术所公开的肽片段构成的载体肽片段和与该载体肽片段的
N
末端侧和
/
或
C
末端侧结合的上述目标外源物质
。
[0019]利用这样的构成，能够高效地将与载体肽片段结合的外源物质导入真核细胞内
。
[0020]此外，其中，“外源物质”包含能够与上述载体肽片段的
N
末端侧或
C
末端侧直接地或通过适当的接头间接地结合的无机化合物和有机化合物，是具有能够被导入真核细胞内的分子尺寸和化学性质的物质
。
[0021]本专利技术所公开的外源物质导入用构建体的优选的一个方式中，上述外源物质为选自多肽
、
核酸
、
色素和药剂中的任意有机化合物
。
[0022]其中，“多肽”是指具有多个氨基酸通过肽键结合而成的结构的聚合物
。
多肽的肽键数
(
即氨基酸残基数
)
不受限定
。
即，多肽包含氨基酸残基数为
10
个以上且小于
300
个左右的通常称为肽的化合物和通常称为蛋白质
(
典型地为由
300
个以上的氨基酸残基构成的高分子化合物
)
的化合物
。
在该领域中，多肽和蛋白质并没有严格地区分
。
在本说明书中，将由多个氨基酸残基构成的聚合物
(
包含低聚物
。)
统称为多肽
。
[0023]另外，“核酸”是指核苷酸的聚合物，包含...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
一种肽片段，其特征在于：所述肽片段用于将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内，所述肽片段构成为：串联配置有2个以上的以下氨基酸序列：
VVKSLVK(
序列号
1)
，在该氨基酸序列之间不含其他的氨基酸残基，或者在该氨基酸序列之间存在由1～5个氨基酸残基构成的肽接头
。2.
如权利要求1所述的肽片段，其特征在于：在所述氨基酸序列之间不含其他的氨基酸残基
。3.
如权利要求1或2所述的肽片段，其特征在于：串联配置有2个所述序列号1所示的氨基酸序列
。4.
一种外源物质导入用构建体，其特征在于：所述外源物质导入用构建体是为了将目标外源物质从真核细胞的外部至少导入该细胞的细胞质内而制作的，所述外源物质导入用构建体具有：由权利要求1～3中任一项所述的肽片段构成的载体肽片段；和与所述载体肽片段的
N
末端侧和
/
或
C
末端侧结合的所述目标外源物质
。5.
如权利要求4所述的构建体，其特征在于：所述外源物质为选自多肽
、
核酸
、
色素和药剂中的任意有机化合物
。6.
如权利要求5所述的构建体，其特征在于：所述外源物质为来自任意生物种类的成熟多肽或其前体多肽，所述构建体为具有与作为该外源物质的成熟多肽或其前体多肽对应的氨基酸序列和所述载体肽片段的氨基酸序列的合成多肽
。7.
如权利要求6所述的构建体，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：贝利小林菜穗子，吉田彻彦，
申请(专利权)人：东亚合成株式会社，
类型：发明
国别省市：