一组发夹制造技术

本发明专利技术涉及一组发夹

【技术实现步骤摘要】
一组发夹DNA组合及无酶等温扩增检测OTA的方法


[0001]本专利技术涉及一组发夹
DNA
组合及无酶等温扩增检测
OTA
的方法，属于生化分析检测

。

技术介绍

[0002]随着消费者对食品安全的更高需求，农业食品中包括赭曲霉毒素
A(OTA)
在内的常见霉菌毒素污染问题受到各级政府机构
、
研究人员和消费者的持续重点关注
。
农产品食品中
OTA
的高检出率和低浓度污染造成的潜在威胁非常隐蔽和严峻
。
现有
OTA
检测方法，例如液相色谱
‑
质谱联用
(LC
‑
MS/MS)、
高效液相色谱
(HPLC)
，以及酶联免疫吸附分析和层析分析等简便快速的生化技术
。
色谱仪器技术具有高灵敏度和高选择性，但需要昂贵的设备和专业的操作技术，生化快速分析技术在抗体开发
、
信号标记
、
灵敏度<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一组用于无酶等温扩增检测
OTA
的发夹
DNA
，其特征在于，所述发夹
DNA
包括4条发夹
DNA
链，其核苷酸序列如下：发夹
DNA
ꢀⅠ
，如
SEQ ID No
：2所示：5’‑
GATCGGGTGTGGGTGGCGTAAGTCACTTTACGCCACCCACAC
‑3’
；发夹
DNA
ꢀⅡ
，如
SEQ ID No
：3所示：5’‑
GCGTAAAGTGACTTACGCCACCCACACGTGGCGTAATCACTGCATAGC
‑3；发夹
DNA
ꢀⅢ
，如
SEQ ID No
：4所示：5’‑
TAATCACTGCATAGCTGCAAGGCTATGCAGTGATTACGCCAC
‑3’
；发夹
DNA
ꢀⅣ
，如
SEQ ID No
：5所示：5’‑
CTTGCAGCTATGCAGTGATTAGTGGCGTAATCACTGCATAGC
‑3’
。2.
一种基于发夹
DNA
链的无酶等温扩增检测
OTA
的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)
适配体
、
引发链
cDNA
和发夹
DNA
组合设计基于识别
OTA
的核酸适配体，设计引发链
cDNA
和发夹
DNA
组合；所述引发链
cDNA
部分片段与
Bio
‑
OTA
‑
Apt
互补结合，发夹
DNA
组合中
DNA
序列之间的部分片段互补配对，但是条发夹
DNA
组合在没有引发链
cDNA
存在时稳定共存而不发生配对组合反应；
(2)
复合物探针制备与信号结构转换的实现在
SA
‑
MBs
中加入退火后的
Bio
‑
OTA
‑
Apt
和结合缓冲液，混匀后孵育反应，得到
Apt
‑
MBs
探针；将得到的
Apt
‑
MBs
探针中，加入引发链
cDNA
溶液，震荡孵育反应，得到
cDNA
‑
Apt
‑
MBs
复合物探针；将含有
OTA
的待测样品加入到
cDNA
‑
Apt
‑
MBs
复合物探针中，充分混匀后孵育反应后，磁分离获得包含引发链
cDNA
的上清液；
(3)
第一级信号放大在包含引发链
cDNA
的上清液中加入发夹
DNA
ꢀⅠ
和发夹
DNA
ꢀⅡ
，混匀后孵育反应，进行第一级信号放大并形成稳定的
DNA
ꢀⅠ‑
DNAⅡ双链结构；
(4)
第二级信号放大在步骤
(3)
产物中分别加入发夹
DNAⅢ和发夹
DNA
ꢀⅣ
,
混匀后孵育反应，形成大量的长双链
DNA
序列；
(5)
背景干扰信号消除与长双链
DNA
荧光检测在步骤
(4)
产物中加入
SGI
稀释液和
GO
溶液，混匀后在孵育反应，然后加入结合缓冲液，检测荧光强度；根据荧光值与
OTA
浓度之间的响应关系，得到检测样品中
OTA
的含量
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤
(1)
中所述核酸适配体为生物素修饰的赭曲霉毒素
A
适配体
Bio
‑
OTA
‑
Apt
，其序列如
SEQ ID No
：1所示；所述引发链
cDNA
选自
SEQ ID No
：6‑8中的任一所示序列，优选的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，肖宇，韩陈飞，吴桂竹，杜道林，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：