一种细菌包被方法技术

本发明专利技术公开了一种细菌包被方法，属于生物技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种细菌包被方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种细菌包被方法
。

技术介绍

[0002]许多疑难疾病，如阿尔茨海默病
、
糖尿病和一些癌症，已被证明与肠道细菌的代谢有关
。
益生菌的补充具有抑制病原体定植和发挥有益作用的能力，是积极调节肠道菌群平衡的有效策略
。
虽然粪便菌群移植在预防和治疗方面取得了成功，但侵入性手术和不确定的成分在很大程度上限制了手术的实施，这不可避免地导致患者依从性低，以及胃肠道刺激和潜在的并发症
。
因此，一种非侵入性的方法，如口服将益生菌定植到肠道中是很有意义的，可以为益生菌治疗提供一种替代方法
。
但是益生菌口服过程中容易受到胃蛋白酶的分解，使得绝大部分失活或死亡，使得治疗结果下降
。
鉴于益生菌在进入肠道的过程对菌群活性的影响，采取措施对益生菌的保护是必要的，因此，有必要开发一种安全
、
方便
、
稳定的方法来实现细菌的高效递送
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种细菌包被方法，以解决益生菌递送过程中，易被分解失活
、
死亡的问题
。
[0004]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0005]一种细菌包被方法，包括如下步骤：
[0006]S1.
将益生菌菌种加入无菌肉汤中，再于
37℃
培养箱中培养
>18h,
菌液在
5000rpm、4℃
条件下离心
5min
，收集沉淀物，无菌生理盐水清洗后稀释为菌落数为
108CFU/mL
菌液，用于包被过程或活力检测
。
[0007]S2.108CFU/mL
益生菌菌液中加入氯化钙溶液，混合均匀后加入液体石蜡，
4000rpm
搅拌5‑
8min
形成稳定的乳化液，将海藻酸钠溶液加入到乳化液中，滴加的冰醋酸，
15℃
下
1000rpm
搅拌
4h
，使氯化钙中的钙离子释放，与海藻酸钠中的钠离子进行置换反应，形成益生菌微胶囊
。
[0008]S3.
六水合硝酸锌溶液中加入2‑
甲基咪唑，搅拌均匀，再加入益生菌微胶囊
,
超声分散均匀后静置反应8‑
10h,
产物经
4500rpm
离心
15min
后用
0.2
％的冰醋酸洗涤，离心除去多余的溶剂，去离子水洗涤后冻干保存
。
[0009]进一步的，所述
S2
中益生菌菌液
、
氯化钙溶液
、
液体石蜡
、
海藻酸钠溶液和冰醋酸的用量比为
100
微升：
4mL:25mL
：
15mL:0.8
‑
1.2mL。
[0010]进一步的，所述氯化钙溶液
、
海藻酸钠溶液和冰醋酸的浓度分别为
0.15
‑
0.35g/mL
，
0.8
‑
1.2g/100mL
和
0.2
％
。
[0011]进一步的，所述液体石蜡中含有2％的司盘
80。
[0012]进一步的，所述
S3
中六水合硝酸锌
、2
‑
甲基咪唑
、
益生菌微胶囊的用量比为
10mL:1mL
：
30mg。
[0013]进一步的，所述
S3
中六水合硝酸锌
、2
‑
甲基咪唑的浓度分别为
0.5mol/L
，
0.024mol/L。
[0014]本专利技术的有益效果：
[0015]1.
本专利技术采用海藻酸钙和
ZIF
‑8双层复合包被益生菌的方式使得益生菌比单层包被的的益生菌更能显著抵御益生菌递送过程中的酸性侵害，同时具有良好的生物相容性，保障菌群活性
。
[0016]2.
本专利技术中海藻酸钙微囊化包被益生菌保护益生菌活性，微囊化包被工艺简单易于生产；同时海藻酸钙性质稳定
、
无毒且生物易降解
。
利用
ZIF
‑8金属有机骨架对海藻酸钙微囊化益生菌进行进一步包被增加其在酸性环境中的稳定性，同时
ZIF
‑8由于其具有较大的比表面积能够包被更多的益生菌微胶囊并起到了一定的缓释作用
。
附图说明
[0017]下面结合附图对本专利技术作进一步的说明
。
[0018]图1是本专利技术实施例3中模拟胃液对益生菌存活率的影响；
[0019]图2是本专利技术实施例3中模拟肠液对益生菌存活率的影响
。
具体实施方式
[0020]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例
。
基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围
。
[0021]实施例1[0022]一种细菌包被方法，包括如下步骤：
[0023]S1.
将益生菌菌种加入无菌肉汤中，再于
37℃
培养箱中培养
18h,
菌液在
5000rpm、4℃
条件下离心
5min
，收集沉淀物，无菌生理盐水清洗后稀释为菌落数约为
108CFU/mL
菌液，用于包被过程或活力检测
。
[0024]S2.108CFU/mL
益生菌菌液中加入
4mL0.25g/mL
氯化钙溶液，
500rpm
搅拌
5min
混合均匀后加入
25mL
含有2％ Span80
的液体石蜡，
4000rpm
搅拌
5min
形成稳定的乳化液，将
15mL 1g/100mL
海藻酸钠溶液加入到乳化液中，滴加
1mL 0.2
％的冰醋酸，
15℃
下
1000rpm
搅拌
4h
，使氯化钙中的钙离子释放，与海藻酸钠中的钠离子进行置换反应，形成益生菌微胶囊
。
[0025]S3.10mL 0.5mol/L
六水合硝酸锌溶液中加入
1mL 0.024mol/L 2
‑
甲基咪唑，
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种细菌包被方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.
益生菌培养后稀释为益生菌菌液；
S2.
益生菌菌液中加入氯化钙溶液，混合均匀后加入液体石蜡搅拌乳化，乳化后加入海藻酸钠溶液，滴加冰醋酸混合均匀；
S3.
六水合硝酸锌溶液中加入2‑
甲基咪唑，混合均匀，再加入益生菌微胶囊
,
超声分散均匀后静置反应
,
产物经洗涤离心后冻干保存
。2.
根据权利要求1所述的一种细菌包被方法，其特征在于，所述
S2
中益生菌菌液
、
氯化钙溶液
、
液体石蜡
、
海藻酸钠溶液和冰醋酸的用量比为
100
μ
L
：
4mL:25mL
：
15mL:0.8
‑
1.2mL。3.
根据权利要求1所述的一种细菌包被方法，其特征在于，所述益生菌菌液
、
氯化钙溶液
、
海藻酸钠溶液
、
冰醋酸
、
六水合硝酸锌和2‑
甲基咪唑的浓度分别为
108CFU/mL、0.15
‑
0.35g/mL
，
0.8
...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪连军，张磊，高翔，曹广源，周艳萍，吕品，费书杰，
申请(专利权)人：安徽环球基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：