一种检测新生隐球菌的引物探针组合制造技术

本申请涉及一种检测新生隐球菌的引物探针组合

【技术实现步骤摘要】
一种检测新生隐球菌的引物探针组合、方法以及试剂盒


[0001]本申请属于真菌病原学检测
，具体涉及一种检测新生隐球菌的引物探针组合
、
方法以及试剂盒
。

技术介绍

[0002]隐球菌是一类危害人类健康的致病性真菌
。
不同种类的隐球菌在流行病学和临床致病过程中存在明显差异
。
其中，新生隐球菌是一类主要感染免疫抑制人群的致病隐球菌，每年可导致超过
60
万人死亡
。
新生隐球菌通常通过呼吸系统进入人体肺部，经血液扩散至不同脏器，最终可穿过血脑屏障进入脑部引发脑膜炎
。
新生隐球菌的感染通常为隐形感染，在临床早期不易察觉，容易误诊
。
因此，新生隐球菌的早期检测与分型对隐球菌病的治疗至关重要
。
[0003]现有的隐球菌检测方法如墨汁染色法
、
培养鉴定法等尽管能够检测隐球菌，但敏感度较低
、
耗时较长，且无法检测隐球菌的类型
。
由此，如何快速准确地检测新生隐球菌成为一项亟待解决的技术问题
。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种检测新生隐球菌的引物探针组合
、
方法
、
试剂盒以及该引物探针组合在检测新生隐球菌中的应用，通过针对新生隐球菌的特定基因片段设计对应的引物探针组合，能够准确地检测新生隐球菌，帮助提高新生隐球菌的检测效率以及准确性
。
[0005]第一方面，本申请提供一种新生隐球菌的引物探针组合，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如
Seq ID No.1
所示，所述反向引物的核苷酸序列如
Seq ID No.2
所示；所述探针的核苷酸序列如
Seq ID No.3
所示
。
[0006]在一些实施例中，所述引物用于识别所述新生隐球菌中如
Seq ID No.4
所示的核苷酸序列
。
[0007]在一些实施例中，所述探针的5’
端连接有荧光报告基团，所述探针的3’
端连接有荧光淬灭基团
。
[0008]在一些实施例中，所述探针为：
FAM
‑
GTGAGTTCCCCGTCTTTTTC
‑
BHQ1。
[0009]第二方面，提供一种检测新生隐球菌的方法，所述方法包括：获取待测样本的模板
DNA
；通过聚合酶链式反应
PCR
对所述模板
DNA
进行扩增以获取扩增结果，其中，所述
PCR
的反应物包括第一方面任一实施例中的引物探针组合；根据所述扩增结果判断所述待测样本中所述新生隐球菌的检测结果为阳性或阴性
。
[0010]在一些实施例中，所述待测样本包括血液
、
体液和
/
或肺部组织
。
[0011]在一些实施例中，所述根据所述扩增结果判断待测样本中所述新生隐球菌的检测结果为阳性或阴性包括：在所述扩增结果中有荧光对数增长，且循环阈值
Ct
小于或等于
30.0
的情况下，判断所述待测样本中所述新生隐球菌的检测结果为阳性；或在所述扩增结
果中没有荧光对数增长，且循环阈值
Ct
大于
30.0
的情况下，判断所述待测样本中所述新生隐球菌的检测结果为阴性；或在所述扩增结果中有荧光增长，且循环阈值
Ct
大于
30.0
的情况下，判断所述新生隐球菌的检测结果为阴性
。
[0012]第三方面，本申请实施例提供一种检测新生隐球菌的试剂盒，所述试剂盒包括本申请任一实施例中的引物探针组合
。
[0013]在一些实施例中，所述试剂盒还包括：缓冲液
、
模板
DNA、DNA
聚合酶和
/
或脱氧核苷三磷酸
dNTP。
[0014]第四方面，本申请还提供一种本申请实施例任一实施例所述的引物探针组合在检测新生隐球菌中的应用
。
附图说明
[0015]图1是本申请实施例一种新生隐球菌的检测方法的示意性流程图
。
[0016]图2是本申请实施例新生隐球菌的特异性扩增曲线图
。
具体实施方式
[0017]下面结合具体实施例对本申请的技术方案作进一步介绍
。
[0018]本申请所公开的“范围”以下限和上限的形式来限定，给定范围是通过选定一个下限和一个上限进行限定的，选定的下限和上限限定了特别范围的边界
。
这种方式进行限定的范围可以是包括端值或不包括端值的，并且可以进行任意地组合，即任何下限可以与任何上限组合形成一个范围
。
例如，如果针对特定参数列出了
60
‑
120
和
80
‑
110
的范围，理解为
60
‑
110
和
80
‑
120
的范围也是预料到的
。
此外，如果列出的最小范围值1和2，和如果列出了最大范围值3，4和5，则下面的范围可全部预料到：1‑
3、1
‑
4、1
‑
5、2
‑
3、2
‑4和2‑
5。
在本申请中，除非有其他说明，数值范围“a
‑
b”表示
a
到
b
之间的任意实数组合的缩略表示，其中
a
和
b
都是实数
。
例如数值范围“0
‑
5”表示本文中已经全部列出了“0
‑
5”之间的全部实数，“0
‑
5”只是这些数值组合的缩略表示
。
另外，当表述某个参数为
≥2
的整数，则相当于公开了该参数为例如整数
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12
等
。
[0019]在本申请的描述中，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性
。
[0020]如果没有特别的说明，本申请所提到的“包括”和“包含”表示开放式，也可以是封闭式
。
例如，所述“包括”和“包含”可以表示还可以包括或包含没有列出的其他组分，也可以仅包括或包含列出的组分
。
[0021]如果没有特别的说明，在本申请中，术语“或”是包括性的
。
举例来说，短语“A
或
B”表示“A
，
B
，或
A...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测新生隐球菌的引物探针组合，其特征在于，所述引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如
Seq ID No.1
所示，所述反向引物的核苷酸序列如
Seq ID No.2
所示；所述探针的核苷酸序列如
Seq ID No.3
所示
。2.
根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述引物用于识别所述新生隐球菌中如
Seq ID No.4
所示的核苷酸序列
。3.
根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针的5’
端连接有荧光报告基团，所述探针的3’
端连接有荧光淬灭基团
。4.
根据权利要求3所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针为：
FAM
‑
GTGAGTTCCCCGTCTTTTTC
‑
BHQ1。5.
一种新生检测隐球菌的方法，其特征在于，所述方法包括：获取待测样本的模板
DNA
；通过聚合酶链式反应
PCR
对所述模板
DNA
进行扩增以获取扩增结果，其中所述
PCR
的反应物包括如权利要求1‑4中任一项所述的引物探针组合；根据所述扩增结果判断所述待测样本中所述新...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛新颖，臧学磊，王晨，刘玉霞，戴缤，陆俊羽，王梅芳，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京世纪坛医院，
类型：发明
国别省市：