一种高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系制造技术

本发明专利技术属于油菜育种领域，公开了一种高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系

【技术实现步骤摘要】
一种高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系RT73的KASP分子标记引物及应用


[0001]本专利技术属于油菜育种
，尤其涉及一种高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系
RT73
的
KASP
分子标记引物及应用
。

技术介绍

[0002]控制农田杂草是促进粮食增产的重要措施之一
。
种植耐除草剂转基因作物，配合施用相应的除草剂，可高效地控制杂草，是一种增加产量
、
降低种植成本的有效措施
。RT73
是美国孟山都公司研发的抗草甘膦除草剂的转基因油菜品系，在油菜的特定位置导入外源基因
EPSPS
，使其具有草甘膦除草剂抗性
。RT73
在美国和加拿大等国广泛种植，占全世界油菜种植面积的近
45
％
。
在加拿大
、
日本
、
美国和澳大利亚，
RT73
品系已被批准环境释放，我国
、
欧盟等9个国家和地区也批准进口
RT73
品系用于食品或饲料加工原料
。
[0003]油菜是中国重要的食用油料作物之一，在中国种植面积非常广泛，但我国油菜产量和消费量仍维持高位
、
库存持续减少
。
根据国家粮食交易中心统计，从
1998
年至
2019
年，年我国油菜籽年平均进口量超过
200
万吨，主要来自加拿大r/>。
随着转基因油菜
RT73
在我国的批准进口，且我国油菜的进口需求，舆论大众愈发强烈关注转基因产品的安全性问题，我国在
2002
年制定实施了转基因标识制度，而相关检测转基因技术的发展才能保证转基因标识制度的有效实施
。
[0004]抗草甘膦除草剂油菜转基因品系
RT73
是在油菜的基因组的特定区域导入了外源基因
EPSPS
，该基因具有草甘膦除草剂抗性，同时导入了转基因元件
P
‑
FMV 35S、GOX
和
T
‑
E93
′
，以保障
EPSPS
基因能正常启动工作
。
检测油菜转基因品系
RT73
，不仅要检出导入了外源序列，还要确认外源序列在油菜基因组的特定的区域
。
目前检测油菜转基因品系
RT73
的方式主要有两种，一是检测替换插入区域的边界序列，二是检测每个元件，具体的检测方法有：普通
PCR
和荧光定量
PCR[
李想等，
2011,SNT2668
‑
2010]，数字
PCR[
郑兰等，
2017]，多重
PCR
方法
[
尹全等，
2017]，
DNA
测序
[GB/T 38570
‑
2020]，基因芯片
[Kim et al.2010]。
而这些方法各有缺陷，普通
PCR
技术操作繁琐，耗时长，难以实现高通量检测；荧光定量
PCR
和数字
PCR
的灵敏度高，但检测成本昂贵；多重
PCR
方法通量高于前两个，每个转基因元件都进行检测，检测成本也较高；
DNA
测序的假阳性假阴性比例相对较高；基因芯片开发成本高，检测费用也高
。
目前，没有一种能高通量
、
低成本的方法准确的检测出油菜转基因品系
RT73。
[0005]本专利技术提供的
KASP
检测方法是一种高通量
、
低成本
、
简单快捷以及低错误率的转基因检测的方法，该方法的使用将有利于克服目前常用的检测方法的缺陷从而促进抗草甘膦除草剂油菜转基因品系
RT73
的广泛使用
。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是，克服以上
技术介绍
中提到的不足和缺陷，利用
KASP
标记检测技术，开发检测抗草甘膦除草剂油菜品系
RT73
的分子标记及引物，实现高通
量
、
低成本
、
精准检测油菜抗除草剂品系
RT73。
[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提出的技术方案为：
[0008]一种高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系
RT73
的
KASP
分子标记引物，包括
BN
‑
RT73.1
标记引物和
/
或
BN
‑
RT73.2
标记引物，其中：
[0009]所述
BN
‑
RT73.1
标记引物包括
(
如
SEQ ID NO:1
～3所示
)
：
[0010]BN
‑
RT73.1
‑
X
：
GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCATGTAGATTTCCCGGACATGAAG
；
[0011]BN
‑
RT73.1
‑
Y
：
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCTAATTAGCCGGCGCTGTGTGAA
；
[0012]BN
‑
RT73.1
‑
C
：
AAGGCAAGGAAAGGAAGGAGGATG
；
[0013]所述
BN
‑
RT73.2
标记引物包括
(
如
SEQ ID NO:4
～6所示
)
：
[0014]BN
‑
RT73.2
‑
X
：
GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCGACCTTTTTATGTAACAACCCG
；
[0015]BN
‑
RT73.2
‑
Y
：
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTAGAGCGACGGTGCGACCACC
；
[0016]BN
‑
RT73.2
‑
C
：
TAACTATTAATATACGGGGATTCG。
[0017]基于一个总的专利技术构思，本专利技术还提供一种上述的
KASP
分子标记引物在高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系
RT73
中的应用...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种高通量检测油菜抗草甘膦除草剂品系
RT73
的
KASP
分子标记引物，其特征在于，包括
BN
‑
RT73.1
标记引物和
/
或
BN
‑
RT73.2
标记引物，其中：所述
BN
‑
RT73.1
标记引物包括：
BN
‑
RT73.1
‑
X
：
GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCATGTAGATTTCCCGGACATGAAG
；
BN
‑
RT73.1
‑
Y
：
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCTAATTAGCCGGCGCTGTGTGAA
；
BN
‑
RT73.1
‑
C
：
AAGGCAAGGAAAGGAAGGAGGATG
；所述
BN
‑
RT73.2
标记引物包括：
BN
‑
RT73.2
‑
X
：
GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTCGACCTTTTTATGTAACAACCCG
；
BN
‑
RT73.2
‑
Y
：
GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTAGAGCGACGGTGCGACCACC...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹明月，雷雨婷，唐顺学，田冰川，
申请(专利权)人：华智生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：