一种小鼠主动脉血管瘤模型的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种小鼠主动脉血管瘤模型的制备方法，该方法提前对该微量缓释泵进行预热，后将药物微量泵植入小鼠皮下进行造模

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠主动脉血管瘤模型的制备方法


[0001]本专利技术属于人类疾病动物模型的制作
，具体而言，本专利技术涉及用于评价小鼠主动脉血管瘤模型相关疾病效力的模型的构建方法

技术介绍

[0002]主动脉瘤
(abdominal aortic aneurysm,AAA)
是指各种因素导致的腹主动脉局部扩张，当动脉直径扩张超过正常值
50
％时，可诊断为
AAA。AAA
是严重影响人们健康的疾病之一，晚期动脉瘤破裂死亡率可达到
80
％
。
尽管随着早期筛检的进行，
AAA
得到了一定预防，但其有效的药物治疗措施尚未建立，该疾病的管理仍面临困难
。
因此探索主动脉血管瘤的治疗方法以及抗肿瘤化合物的筛选，迫切需要一个能够模拟体内环境的动物模型
。
[0003]在过往的研究中，建立
AAA
模型的常用方法有：猪胰弹性蛋白酶
(porcine pancreatic elastase,PPE)
灌注法
、
血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)
输注法和氯化钙涂抹法等
。
其中
AngⅡ输注法又更为常用
。AngⅡ输注法通过在高血脂状态下给动物用微渗透泵持续输注
AngⅡ，造成系统性高血压，从而诱发动脉瘤
。AngⅡ诱导的模型多在载脂蛋白
E(apolipoprotein Er/>，
ApoE)
敲除小鼠
、
低密度脂蛋白受体
(low
‑
density lipoprotein receptor
，
LDLR)
或其他脂代谢相关基因突变品系小鼠进行，利用高脂血症引起的炎症状态和高血压等，促进动物形成动脉瘤
。
[0004]但是模型的建立往往需要特异基因敲除的动物或者通过外科手术给予药物处理，实验动物杂交耗时长，并且手术对实验人员技术要求高，模型建立困难，模型稳定性差
。
在基因缺陷型小鼠中建立主动脉瘤模型，基本上需要小鼠某些基因发生突变，故某些功能会受到影响
。
而在正常野生型小鼠中建立稳定性高的主动脉瘤鲜有报道，限制了其发病机制和治疗手段的研究
。
这些都不利于大规模的主动脉瘤病因学和抗肿瘤药物筛选

技术实现思路

[0005]鉴于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供了一种稳定性更高
、
简便易行
、
费用更为经济的小鼠主动脉血管瘤模型构建方法
。
采用本专利技术的方法构建的小鼠主动脉血管瘤模型稳定性强
、
死亡率低，且更为简便经济，无基因
、
功能缺失，可广泛用于体内筛选抗肿瘤化合物的筛选，并能准确的判断候选化合物的生物学活性
。
[0006]为了实现本专利技术的目的，专利技术人通过利用恒温烘箱预热微量缓释泵，提高微量泵中
AngⅡ的稳定性，进而提高后续模型的成功率；并利用异弗烷对药物循环稳定，使清醒迅速
、
舒适
、
平稳的特点，对动物进行异弗烷麻醉，减少对动物的伤害，从而实现优化小鼠主动脉血管瘤模型的造模方法，可用于抗肿瘤化合物的筛选以及肿瘤疾病的研究
。
[0007]具体地，本专利技术一种小鼠主动脉血管瘤模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0008](1)
计算小鼠所需
AngⅡ的量并注入微量缓释泵，将微量缓释泵进行预热激活；
[0009](2)
将小鼠利用异弗烷使其完全麻醉，两侧肩胛区域皮肤备皮消毒；
[0010](3)
皮下植入
28
天量的步骤
(1)
的微量缓释泵，常规饲养
28
天
。
[0011]步骤
(1)
中，微量缓释泵预热激活的步骤为：将
PBS
稀释的
AngⅡ溶液注入微量缓释泵内，所述微量缓释泵内插入流速调控器，直立放入装有
PBS
的
1.5ml
的无菌
EP
管中，将该
EP
管置于恒温
37℃
烘箱预热
12h
后待用
。
[0012]其中，根据
1000ng/kg
·
min
计算每只小鼠
AngⅡ用量
。
按小鼠平均体重
25g
算，
25ng/
只
·
min。
微量泵体积
200ul
，泵速
0.25ul/h。200ul
体积泵需
1.2mg AngⅡ。
[0013]其中，麻醉步骤为
:
按照
0.41ml/min
的异氟烷混合
4L/min
的新鲜空气维持麻醉
。
[0014]步骤
(3)
具体步骤为：在肩胛骨之间的皮肤上切开一个切口，使用止血钳分离皮下结缔组织，用镊子提起颈背部皮肤，剪
1cm
左右小口，用止血钳深入皮肤撑开袋状结构，从
PBS
中夹取微量缓释泵植入，流量调节器背离切口
。
[0015]优选地，所述小鼠为
C57BL/6
小鼠，8‑
10
周龄
。
[0016]与现有技术相比，本专利技术涉及的一种小鼠主动脉血管瘤模型的优化制备方法，其具有如下优点和进步性：本专利技术可实现较为稳定的构建小鼠主动脉血管瘤模型，构建的主动脉血管瘤模型较为稳定，并且所述的模型为
C57BL/6
小鼠
。
同时将有助于抗肿瘤化合物的研究，为肿瘤的形成
、
发展提供了新的研究思路和解决方案
附图说明
[0017]图1为小鼠心脏及主动脉组织图对比；
[0018]图2为小鼠心脏超声检测结果对比；
[0019]图3为对
AngⅡ进行了预热处理的模型成功率；
[0020]图4为对
AngⅡ进行了非预热处理的模型成功率；
[0021]图5为对
AngⅡ进行了预热处理后的动物的存活率；
[0022]图6为对
AngⅡ进行了非预热处理后的动物的死亡率
。
具体实施方式
[0023]为了能够更清楚理解本专利技术的技术构思和技术手段，并可依照说明书的内容和本领域的常规技术手段予以实施，下面结合具体的实施例和附图对本专利技术做进一步详细说明，但是以下具体试验例是对本专利技术的解释而不是限定
。
[0024]下述实施例中采用的受试动物情况如下：...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种小鼠主动脉血管瘤模型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）计算小鼠所需
AngⅡ的量并注入微量缓释泵，将微量缓释泵进行预热激活；（2）将小鼠利用异弗烷使其完全麻醉，两侧肩胛区域皮肤备皮消毒；（3）皮下植入
28
天量的步骤（1）的微量缓释泵，常规饲养
28
天
。2.
根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，微量缓释泵预热激活的步骤为：将
PBS
稀释的
AngⅡ溶液注入微量缓释泵内，所述微量缓释泵内插入流速调控器，直立放入装有
PBS 的无菌
EP
管中，将该
EP
管置于恒温
37℃
烘箱预热
12h
...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙益军，封骏，黄莺，叶成峰，王志成，
申请(专利权)人：江苏凯基生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：