一种转移性卵巢癌制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一种建立不同类型的转移性卵巢癌

【技术实现步骤摘要】
一种转移性卵巢癌PDX模型的建立方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种转移性卵巢癌
PDX
模型的建立方法
。

技术介绍

[0002]卵巢癌作为高致死率的妇科恶性肿瘤之一，具有早期阶段无明显症状
、
病情易扩散等特点
。
卵巢癌有三种类型，包括上皮性卵巢癌
、
非上皮性卵巢癌及转移性卵巢癌
。
其中转移性卵巢癌是指一切从其他器官转移至卵巢的肿瘤，可来自胃肠道
、
乳腺
、
肺
、
肾等癌肿，以胃肠道最为常见
。
由于其原发病以及卵巢癌自身的特点，转移性卵巢癌不易确诊，预后极差，严重影响患者的身心健康
。
[0003]传统的妇科恶性肿瘤临床前研究在很大程度上依赖于克隆的癌源细胞系和从这些细胞系中获得的肿瘤异种移植瘤，但是使用细胞系进行转化研究存在明显的缺点，主要表现为：癌细胞株不可逆地丧失了原始肿瘤重要的生物学特性，细胞株及其异种移植模型不能准确地反应卵巢癌的原始表型及基因组特征
。
故导致了在肿瘤研究中，许多临床前研究结果与实际临床治疗效果相比存在较大差异，对临床治疗的指导价值有限
。
[0004]人源性异种移植
(patient
‑
derived xenograft
，
PDX)
模型的构建：手术切除的新鲜肿瘤组织，将坏死和液化部分剔除后，剩余部分切成组织小块，通过皮下包埋或原位种植到免疫缺陷小鼠的体内进行培养
。
卵巢癌
PDX
模型来源于未经培养的人类肿瘤，在保留细胞遗传学
、
细胞复杂性
、
血管和间质肿瘤结构的情况下，更好地表现了妇科恶性肿瘤和人类肿瘤微环境的异质性
。
[0005]PDX
模型能够准确反映与人类卵巢癌发生和发展相关的细胞和分子变化，是一种较为理想的人肿瘤动物模型
。
其价值可体现在包括靶向治疗在内的临床前药物筛选和生物标志物鉴定中，从而实现个体化治疗
。
[0006]因此，本领域迫切需要转移性卵巢癌
PDX
模型的建立方法以解决卵巢癌临床前研究中的不足
。

技术实现思路

[0007]为解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种转移性卵巢癌
PDX
模型的建立方法
。
通过稳定构建转移性卵巢癌
PDX
模型为筛选疗效更优的抗卵巢癌药物，指定个体化的治疗方案奠定基础
。
[0008]本专利技术提供了一种转移性卵巢癌
PDX
模型建立方法，包括以下三种模型的建立：
[0009](1)
建立卵巢癌
PDX
皮下移植瘤模型，包括以下步骤：
[0010]S1
：卵巢癌原代组织的获取
、
保存及运输：在卵巢癌患者手术过程中切取部分将肿瘤组织，置于盐溶液中冷藏运送，标本离心管标记为
P0
代，标本离体后尽快完成小鼠接种；
[0011]S2
：原代组织的移植：将原代组织放入
V
型槽中洗涤剪小备用
。5
％异氟烷持续吸入麻醉小鼠，俯卧位，背部常规
75
％酒精消毒，在右后腿臀部上方皮肤剪一个小口，将肿瘤组织块装入套管针植入皮下，左右后腿双侧皮下接种，用5‑0可吸收性外科缝合线缝好伤口，
酒精再次消毒伤口，烤灯照射恢复小鼠体温，自然苏醒，命名为
P1
代鼠，密切观察术后小鼠生长情况；
[0012]S3
：
PDX
成瘤传代
、
冻存及鉴定：
P1
代肿瘤在小鼠皮下生长后则进行动物体内传代
。
颈椎脱臼法处死小鼠，
75
％酒精消毒背部皮肤，无菌器械剪开皮肤，剥离皮下肿瘤，
V
型槽中洗涤肿瘤组织
。
将组织分为三份，其中一份用于
P2
传代移植，一份加
RNAlater
液氮保存，另一份加4％中性甲醛溶液固定用于病理鉴定
。
传代移植瘤快按
S2
所述方法，建立
P2
代卵巢癌小鼠模型
。
待小鼠皮下肿瘤体积生长至
500
～
1000mm3左右时取出肿瘤组织，重复上述肿瘤传代方法，建立
P3、P4、P5
代卵巢癌小鼠模型
。
[0013]优选的，
S1
中肿瘤组织切取后送至病理科确诊确定为转移性卵巢癌肿瘤组织后使用
。
[0014]优选的，
S1
中盐溶液为含有1％双抗
Hank
’
s
平衡盐溶液
。
[0015]优选的，
S1
中冷藏运输至小鼠接种在3～4小时内完成
。
[0016]优选的，
S2
中洗涤原代组织使用
10mL Hank
’
s
液，提出组织周围坏死液化组织和脂肪组织
。
[0017]优选的，
S2
中洗涤后组织剪小成
2*2mm
的小瘤块备用
。
[0018](2)
卵巢癌
PDX
原位移植瘤模型，包括以下步骤：
[0019]S1
：将卵巢癌患者
P0
肿瘤样本消化为组织液，然后用巴氏吸管反复吹打组织液，
200
目细胞筛过滤至试剂槽
。
收集过滤后细胞悬液，
1500rpm
离心
15min
，用1‑
2mL DMEM/F12
培养基重悬沉淀，混匀，台盼蓝染色进行活细胞计数，调整细胞浓度约
1.0
×
108个
/mL
，冰浴下待用；
[0020]S2
：5％异氟烷持续吸入麻醉小鼠，俯卧位，消毒背部皮肤
。
在裸鼠背部正中纵行剪开长约
1cm
，向左侧牵拉皮肤，暴露右侧腹膜，显微无损伤镊轻轻提起腹膜后剪开进入腹腔，于右肾下极脂肪垫处找到卵巢子宫，显微无损伤镊小心牵拉出卵巢于腹膜外，无损伤镊固定卵巢位置，显微注射器于卵巢处多点注射上述细胞悬液共5μ
L
，
5*105个
/
只
。
将卵巢囊还纳于腹腔，可吸收外科缝合线缝合腹膜及皮肤，
75
％酒精消毒皮肤，烤灯照射恢复小鼠体温，自然苏醒，密切观察术后裸鼠的生长情况
。
[0021]进一步的，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种转移性卵巢癌
PDX
模型的建立方法，其特征在于，建立了如下三种模型：
a.
卵巢癌
PDX
皮下移植瘤模型；
b.
卵巢癌
PDX
原位移植瘤模型；
c.
卵巢癌
PDX
腹腔转移瘤模型
。2.
根据权利要求1所述的移性卵巢癌
PDX
模型建立方法，其特征在于：三种模型的建立方法如下：建立卵巢癌
PDX
皮下移植瘤模型，包括以下步骤：
S1
：卵巢癌原代组织的获取
、
保存及运输：在卵巢癌患者手术过程中切取部分将肿瘤组织，置于盐溶液中冷藏运送，标本离心管标记为
P0
代，标本离体后尽快完成小鼠接种；
S2
：原代组织的移植：将原代组织放入
V
型槽中洗涤剪小备用；5％异氟烷持续吸入麻醉小鼠，俯卧位，背部常规
75
％酒精消毒，在右后腿臀部上方皮肤剪一个小口，将肿瘤组织块装入套管针植入皮下，左右后腿双侧皮下接种，用5‑0可吸收性外科缝合线缝好伤口，酒精再次消毒伤口，烤灯照射恢复小鼠体温，自然苏醒，命名为
P1
代鼠，密切观察术后小鼠生长情况；
S3
：
PDX
成瘤传代
、
冻存及鉴定：
P1
代肿瘤在小鼠皮下生长后则进行动物体内传代；颈椎脱臼法处死小鼠，
75
％酒精消毒背部皮肤，无菌器械剪开皮肤，剥离皮下肿瘤，
V
型槽中洗涤肿瘤组织；将组织分为三份，其中一份用于
P2
传代移植，一份加
RNAlater
液氮保存，另一份加4％中性甲醛溶液固定用于病理鉴定；传代移植瘤快按
S2
所述方法，建立
P2
代卵巢癌小鼠模型；待小鼠皮下肿瘤体积生长至
500
～
1000mm3左右时取出肿瘤组织，重复上述肿瘤传代方法，建立
P3、P4、P5
代卵巢癌小鼠模型；卵巢癌
PDX
原位移植瘤模型，包括以下步骤：
S1
：将卵巢癌患者
P0
肿瘤样本消化为组织液，然后用巴氏吸管反复吹打组织液，
200
目细胞筛过滤至试剂槽；收集过滤后细胞悬液，
1500rpm
离心
15min
，用1‑
2mL DMEM/F12
培养基重悬沉淀，混匀，台盼蓝染色进行活细胞计数，调整细胞浓度约
1.0
×
108个
/mL
，冰浴下待用；
S2
：5％异氟烷持续吸入麻醉小鼠，俯卧位，消毒背部皮肤；在裸鼠背部正中纵行剪开长约
1cm
，向左侧牵拉皮肤，暴露右侧腹膜，显微无损伤镊轻轻提起腹膜后剪开进入腹腔，于右肾下极脂肪垫处找到卵巢子宫，显微无损伤镊小心牵拉出卵巢于腹膜外，无损伤镊固定卵巢位置，显微注射器于卵巢处多点注射上述细胞悬液共5μ
L
，
5*105个
/
只；将卵巢囊还纳于腹腔，可吸收外科缝合线缝合腹膜及皮肤，
75
％酒精消毒皮肤，烤灯照射恢复小鼠体温，自然苏醒，密切观察术后裸鼠的生长情况；
S3
：
PDX
成瘤传代
、
冻存及鉴定：
P1<...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮冠宇，宋一一，孙蓬明，叶丽香，林红雨，
申请(专利权)人：福建省妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：