适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒包含如下组分：消化液A、消化液B、去蛋白液、洗涤液、洗脱液、蛋白酶K、磁珠悬浮液，本发明专利技术的试剂盒可从干燥保存或者在保存液保存的口腔拭子中提取基因组DNA，搭配自动化核酸提取设备可实现高通量的核酸提取。通量的核酸提取。通量的核酸提取。

【技术实现步骤摘要】
适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，尤其涉及一种适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]基因检测是从染色体结构、DNA序列、DNA变异位点或基因表现程度上，评估受检者是否为一些与基因遗传有关的疾病、体质或者个人特质的一种检测方法，也是精准医学分析的一种方法。基因检测可以诊断疾病，也可以用于疾病风险的预测。现今基因检测的主要应用方向包含：身份鉴识/亲子关系鉴定/追溯祖源、单基因/染色体遗传疾病诊断与带因筛检、临床预防医学、临床个体化医疗、先天体质/特质潜能分析等。而这些研究的基础都离不开基因组DNA的提取。
[0003]基因检测中通常获取DNA所使用的样本为血液、其他体液或组织细胞等。其中，通过口腔拭子采集口腔上皮粘膜细胞是一种最方便的方式。口腔拭子集起来便捷，方法简单易懂，样本存储也方便，对疾病控制及预防提供了一种无痛、无创伤、适用于所有年龄段的人群的DNA采集方式。
[0004]不同基因检测项目对口腔拭子样本保存方式的要求不同，通常包括干燥保存口腔拭子及保存液保存口腔拭子样本两种。目前，商品化的口腔拭子核酸提取试剂盒多采用离心柱法提取提取干燥保存的口腔拭子样本核酸，并不能提取在保存液中保存的拭子样本核酸。而且，对于大量基因检测样本的检测，采用离心柱法提取是非常费时、费力的，花费过长的时间会导致口腔拭子采集的核酸损失，影响结果的准确性。因此，急需一种既能提取干燥保存口腔拭子样本核酸，又能提取保存液保存口腔拭子样本核酸的提取方法，且该方法可搭配自动化核酸提取设备实现高通量的提取，快速获得浓度高、质量好的核酸。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒及提取方法，可从干燥保存或者在保存液保存的口腔拭子中提取基因组DNA，搭配自动化核酸提取设备可实现高通量的核酸提取。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒，所述试剂盒包含如下组分：消化液A、消化液B、去蛋白液、洗涤液、洗脱液、蛋白酶K、磁珠悬浮液，其中：
[0007]所述消化液A由如下浓度的组分组成：质量体积比为1
‑
5％的十二烷基肌氨酸钠、质量体积比为0.5
‑
2.0％的聚乙二醇辛基苯基醚、50
‑
300mM氯化钠、20
‑
100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。消化液A的作用为消化裂解干燥保存拭子样本上的细胞，并释放出细胞内的核酸。
[0008]所述消化液B由如下浓度的组分组成：1
‑
5M硫氰酸胍、质量体积比为0.5
‑
2.0％的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为1
‑
3％的聚山梨醇酯
‑
20、质量体积比为的0.02
‑
0.5％
的乙酰半胱氨酸、50
‑
300mM氯化钠、20
‑
100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。消化液B的作用为补充消化裂解效果，以及促进DNA与磁珠结合。
[0009]所述去蛋白液由如下浓度的组分组成：1
‑
5M盐酸胍、质量体积比为0.5
‑
2.0％的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为0.5
‑
1.5％的聚山梨醇酯
‑
20、质量体积比为30
‑
70％的无水乙醇、50
‑
300mM氯化钠、20
‑
100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。去蛋白液的作用为清洗掉黏附在磁珠上的蛋白。
[0010]其中，所述洗涤液包含以下浓度的组分：体积分数为70
‑
80％的乙醇、20
‑
50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。洗涤液的作用为清洗掉残留在磁珠上的盐离子。
[0011]所述的磁珠悬浮液由磁珠和防腐剂混合而成，所述的磁珠用于吸附DNA，所述磁珠溶液的浓度为50
‑
100mg/mL。
[0012]所述的洗脱液为去离子水。
[0013]优选地，所述的消化液A由如下浓度的组分组成：质量体积比为2
‑
3％的十二烷基肌氨酸钠、质量体积比为0.5
‑
1.0％的聚乙二醇辛基苯基醚、100
‑
200mM氯化钠、20
‑
50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。
[0014]所述的消化液B包含如下浓度的组分：2
‑
4M硫氰酸胍、质量体积比为1.5
‑
2.0％的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为2
‑
2.5％的聚山梨醇酯
‑
20、质量体积比为0.1
‑
0.3％的乙酰半胱氨酸、100
‑
200mM氯化钠、20
‑
50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。
[0015]所述去蛋白液包含如下浓度的组分：1
‑
3M盐酸胍、质量体积比为0.5
‑
1.0％的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为0.8
‑
1.0％的聚山梨醇酯
‑
20、体积分数为45
‑
60％的乙醇、50
‑
150mM氯化钠、20
‑
50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.5
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。
[0016]本专利技术进一步提出了上述试剂盒在提取干燥保存或在保存液保存的口腔拭子中提取基因组DNA的应用。
[0017]具体地，本专利技术提出了一种利用上述试剂盒从干燥保存或在保存液保存的口腔拭子样本的磁珠法核酸提取方法，其特征在于，包括如下步骤：
[0018](1)对于干燥保存的拭子样本，将拭子样本转移到离心管中，加入300μL消化液A、20μL蛋白酶K，56℃孵育30min后，加入300μL消化液B，56℃孵育10min，将消化产物转移到干净的2mL离心管中；对于保存液保存的拭子样本，将拭子样本转移到2mL离心管中，加入300μL保存拭子样本的保存液、200uL消化液B、20μL蛋白酶K，56℃孵育30min，将消化产物转移到干净的2mL离心管中；
[0019](2)对于干燥保存的拭子样本，向上一步消化产物中加入200μL异丙醇、10μL磁珠悬浮本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于口腔拭子样本的磁珠法核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如下组分：消化液A、消化液B、去蛋白液、洗涤液、洗脱液、蛋白酶K、磁珠悬浮液，其中：所述消化液A由如下浓度的组分组成：质量体积比为1
‑
5%的十二烷基肌氨酸钠、质量体积比为0.5
‑
2.0%的聚乙二醇辛基苯基醚、50
‑
300mM氯化钠、20
‑
100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水；所述消化液B由如下浓度的组分组成：1
‑
5M硫氰酸胍、质量体积比为0.5
‑
2.0%的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为1
‑
3%的聚山梨醇酯
‑
20、质量体积比为的0.02
‑
0.5%的乙酰半胱氨酸、50
‑
300mM氯化钠、20
‑
100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水；所述去蛋白液由如下浓度的组分组成：1
‑
5M盐酸胍、质量体积比为0.5
‑
2.0%的聚乙二醇辛基苯基醚、质量体积比为0.5
‑
1.5%的聚山梨醇酯
‑
20、质量体积比为30
‑
70%的无水乙醇、50
‑
300mM氯化钠、20
‑
100mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包含以下浓度的组分：体积分数为70
‑
80%的乙醇、20
‑
50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的磁珠悬浮液由磁珠和防腐剂混合而成，所述的磁珠用于吸附DNA，所述磁珠溶液的浓度为50
‑
100mg/mL。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的洗脱液为去离子水。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的消化液A由如下浓度的组分组成：质量体积比为2
‑
3%的十二烷基肌氨酸钠、质量体积比为0.5
‑
1.0%的聚乙二醇辛基苯基醚、100
‑
200mM氯化钠、20
‑
50mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、0.1
‑
1mM乙二胺四乙酸二钠，溶剂为纯水。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的消化液B包含如下浓度的组分：2
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：孙益军，李明，张峰，黄莺，
申请(专利权)人：江苏凯基生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：