一种制造技术

本发明专利技术提供了一种

【技术实现步骤摘要】
一种B3型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗领域，更具体地，涉及一种
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗及其制备方法
。

技术介绍

[0002]病毒性心肌炎是指病毒感染引起的心肌局限性或弥漫性的急性或慢性炎症病变，属于感染性心肌疾病
。
病毒性心肌炎主要由
B3
型柯萨奇病毒
(CVB3)
感染所致，青壮年发病较高，是一种常见
、
多发的心血管系统疾病，目前尚无有效的预防或治疗疫苗
。
目前已开展多项针对预防
CVB3
诱导的病毒性心肌炎的疫苗研究，都没有取得理想效果，例如：灭活疫苗可诱生中和抗体但不能诱生足够的
T
细胞应答；减毒活疫苗具有毒力恢复的危险；基因工程病毒颗粒疫苗能够模拟自然感染过程并激活机体的固有免疫和适应性免疫应答，但由于病毒或细菌载体本身即具有很强的免疫原性，往往导致机体产生针对载体蛋白而非靶抗原的免疫应答，同时其潜在的安全隐患也制约了该类疫苗的应用
。
[0003]VP1
是
CVB3
的主要结构蛋白，含有多个
T、B
细胞表位，是主要的中和抗原，可诱导机体产生保护性免疫应答
。
多肽疫苗具有良好的生物安全性，但由于其在体内易降解和不可复制性，诱导的免疫应答强度较弱，往往需要加入佐剂或采用合适的递送系统
。
基于纳米颗粒的递送系统可以集抗原递送与免疫佐剂功能于一体，形成一个多功能的抗原复合物，成为疫苗递送系统研究的新热点
。
[0004]公开号为
CN1772306A
的专利技术专利，公开了一种柯萨奇病毒
B
组3型基因疫苗，该疫苗直接用抗原的
VP1
基因和作为真核表达载体的质粒
pCEP4
组成的
pCEP4
－
CVB1VP1
质粒，该疫苗的特异性体液免疫应答低，且质粒抗原易免受酶降解，抗原利用率低，导致抗原免疫原性差
。
因此，需要开发一种针对
CVB3
的新型疫苗，来提高特异性体液免疫应答以及提高抗原利用率，提高抗原的免疫原性
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决上述技术问题，提供一种
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，该疫苗可以提高特异性体液免疫应答；且可以提高抗原利用率，进而提高抗原的免疫原性
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]一种
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，以蛛丝蛋白纳米颗粒为递送系统，所述
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗中多肽序列来自于
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白的
B
细胞表位和
T
细胞表位
。
[0008]本专利技术
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗为以蛛丝蛋白纳米颗粒为递送系统，多肽序列来自于
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白的
B
细胞表位和
T
细胞表位，该疫苗可显著增强机体针对
B3
型柯萨奇病毒的特异性体液免疫应答
。
[0009]本专利技术提供了一种
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，为以融合蛛丝蛋白诱导形
成的含有抗原表位的纳米颗粒，所述融合蛛丝蛋白通过
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白中的
B
细胞表位和
T
细胞表位分别与蛛丝蛋白融合表达得到
。
[0010]进一步地，所述融合蛛丝蛋白的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO.6
和
SEQ ID NO.7
所示
。
[0011]进一步地，所述蛛丝蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0012]进一步地，所述
B
细胞表位的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示，所述
T
细胞表位的氨基酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。
[0013]本专利技术提供了上述
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗的制备方法，所述方法为将
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白中的
B
细胞表位序列和
T
细胞表位序列分别与蛛丝蛋白融合表达得到融合蛛丝蛋白；以融合蛛丝蛋白分别制备含有抗原表位的纳米颗粒，即为
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗
。
[0014]进一步地，上述方法包括如下步骤：
[0015]S1.
通过基因合成含有
B
细胞表位的蛛丝蛋白融合基因片段
nps
‑
b
，所述基因片段
nps
‑
b
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.4
所示；将基因片段
nps
‑
b
通过酶切插入载体，构建得到表达融合蛋白的重组载体；
[0016]S2.
通过基因合成含有
T
细胞表位的蛛丝蛋白基因片段
nps
‑
t
，所述基因片段
nps
‑
t
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.5
所示；将基因片段
nps
‑
t
通过酶切插入载体，构建得到表达融合蛋白的重组载体；
[0017]S3.
将步骤
S1
和
S2
中所述重组载体转化至受体细胞，诱导含有重组载体的受体细胞的基因片段
nps
‑
b
和
nps
‑
t
的表达，得到分别含有
B
细胞表位和
T
细胞表位的融合蛛丝蛋白；
[0018]S4.
将步骤
S3
中所述融合蛋白分别加到磷酸钾溶液中诱导形成融合蛋白纳米颗粒
NPs
‑
B
和融合蛋白纳米颗粒
NPs
‑
T
，即为
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗
。
[0019]进一步地，步骤
S4
所述诱导形成纳米颗粒，为将融合蛋白制成2‑
3mg/mL
的蛋白溶液，以
1:10
的体积比加入至浓度为...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，其特征在于，以蛛丝蛋白纳米颗粒为递送系统，所述
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗中多肽序列来自于
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白的
B
细胞表位和
T
细胞表位
。2.
一种
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，其特征在于，为以融合蛛丝蛋白诱导形成的含有抗原表位的纳米颗粒，所述融合蛛丝蛋白通过
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白中的
B
细胞表位和
T
细胞表位分别与蛛丝蛋白融合表达得到
。3.
根据权利要求2所述的
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，其特征在于，所述融合蛛丝蛋白的氨基酸序列分别如
SEQ ID NO.6
和
SEQ ID NO.7
所示
。4.
根据权利要求1‑2任一项所述的
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，其特征在于，所述蛛丝蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。5.
根据权利要求1‑2任一项所述的
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗，其特征在于，所述
B
细胞表位的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示，所述
T
细胞表位的氨基酸序列如
SEQ ID NO.3
所示
。6.
权利要求1‑5任一项所述
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗的制备方法，其特征在于，将
B3
型柯萨奇病毒
VP1
蛋白中的
B
细胞表位序列和
T
细胞表位序列分别与蛛丝蛋白融合表达得到融合蛛丝蛋白；以融合蛛丝蛋白分别制备含有抗原表位的纳米颗粒，即为
B3
型柯萨奇病毒纳米颗粒多肽疫苗
。7.
根据权利要求6所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.
通过基因合成含有一个
B
细胞表位的蛛丝蛋白融合基因片段
nps
‑
b
，所述基因片段
nps

【专利技术属性】
技术研发人员：齐兴梅，熊思东，魏国强，胡静平，李林超，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：