大肠杆菌囊泡疫苗、其制备方法及其用途技术

一种大肠杆菌囊泡疫苗、其制备方法及其用途。所述大肠杆菌囊泡疫苗包含来自携带mcr

【技术实现步骤摘要】
大肠杆菌囊泡疫苗、其制备方法及其用途


[0001]本文涉及生物医药技术，尤指一种大肠杆菌囊泡疫苗、其制备方法及其用途。

技术介绍

[0002]致病性大肠杆菌(E.coli)是临床上常见的重要的病原体，常引起胃肠疾病(如腹泻等)，情况严重可以引起败血症，危及生命。中国细菌耐药监测网(CHINET)2021年发布的临床分离菌株主要菌种分布中，大肠杆菌是临床分离率最高的致病菌(18.96％)。大肠杆菌对多种抗生素耐药问题严重，对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为57.1％和53.6％(CHINET 2021)。疫苗的使用不仅可以预防疾病，也可以降低药物的使用从而减缓耐药问题。目前仍没有针对大肠杆菌的有效疫苗问世，因此开发大肠杆菌疫苗具有重要意义。

技术实现思路

[0003]由于大肠杆菌感染率高、耐药问题严重、且无上市疫苗，因此有开发新疫苗的需求。基于此，本申请提供了一种大肠杆菌囊泡在制备抗大肠杆菌感染的疫苗中的用途。
[0004]在一方面，本申请提供了一种大肠杆菌囊泡用作免疫原的用途，其中，所述大肠杆菌囊泡表面的脂多糖(LPS)结构中的脂质A(lipid A)的磷酸基团被磷酸乙醇胺修饰。
[0005]在另一方面，本申请还提供了一种大肠杆菌囊泡疫苗，其中，所述大肠杆菌囊泡表面的脂多糖(LPS)结构中的脂质A(lipid A)的磷酸基团被磷酸乙醇胺修饰。
[0006]在一些实施方案中，所述大肠杆菌囊泡来自携带mcr
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1基因的大肠杆菌。
[0007]在另一方面，本申请还提供了本文描述的大肠杆菌囊泡疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0008]1)将所述大肠杆菌培养至对数生长期；
[0009]2)离心收集细菌上清液；
[0010]3)用滤膜过滤所述上清液；
[0011]4)对过滤液进行超滤以浓缩体积；
[0012]5)对超滤液进行超速离心，弃掉上清，沉淀即为所述大肠杆菌囊泡。
[0013]在另一方面，本申请还提供了本文描述的大肠杆菌囊泡疫苗用作其他疫苗载体的用途；优选地，所述其他疫苗包括肽疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、RNA疫苗。
[0014]在另一方面，本申请还提供了本文描述的大肠杆菌囊泡疫苗用作药物递送载体的用途。
[0015]在另一方面，本申请还提供了本文描述的大肠杆菌囊泡疫苗在制备用于抵抗由大肠杆菌感染引起的疾病的药物中的用途。
[0016]本申请通过采用一株携带mcr
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1基因的大肠杆菌，分离纯化其外膜囊泡来制备疫苗，降低了LPS的细胞毒性。该方法避免了由传统去污剂提取方法带来的表面蛋白丢失的问题，且该外膜囊泡作为大肠杆菌疫苗应用，能诱导小鼠产生保护性抗体，对小鼠菌血症感染有明显的保护作用。
[0017]在本申请的一些实施方案中，本申请的大肠杆菌外膜囊泡降低了LPS对免疫细胞(RAW264.7)引起的免疫刺激，对肺癌细胞(A549)、上皮细胞(Vero)、免疫细胞(RAW264.7)均无细胞毒性。并且本申请的大肠杆菌外膜囊泡疫苗在小鼠体内产生保护性抗体，对大肠杆菌(感染菌株为CCPM(A)
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070885)感染导致的菌血症有显著的保护作用。
[0018]本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本申请而了解。本申请的其他优点可通过在说明书以及附图中所描述的方案来实现和获得。
附图说明
[0019]附图用来提供对本申请技术方案的理解，并且构成说明书的一部分，与本申请的实施例一起用于解释本申请的技术方案，并不构成对本申请技术方案的限制。
[0020]图1示出了本申请的一种实施方案中使用电镜观察到的所制备的大肠杆菌外膜囊泡的形态学结构。
[0021]图2示出了本申请的一种实施方案中细菌外膜囊泡对免疫细胞IL
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6表达的影响。
[0022]图3示出了本申请的一种实施方案中对外膜囊泡的细胞毒性检测的结果。
[0023]图4示出了本申请的一种实施方案中用囊泡疫苗免疫小鼠后所产生的抗体的结果；其中，bleed#0、bleed#1、bleed#2、bleed#3分别代表了第0次(第一次免疫前1天)取血、第1次(第二次免疫前1天)取血、第2次(第三次免疫前1天)取血、第3次(感染前)取血。
[0024]图5示出了本申请的一种实施方案中囊泡疫苗对小鼠大肠杆菌CCPM(A)
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070885导致的菌血症的显著保护作用。
[0025]图6示出了本申请的一种实施方案中细菌外膜囊泡表面的脂多糖(LPS)结构中的脂质A(lipid A)的修饰。
具体实施方式
[0026]除非另有说明，本文使用的技术和科学术语具有与本申请所属领域技术人员通常所理解的相同的含义。当以范围、优选范围、或者优选的数值上限以及优选的数值下限的形式表述某个量、浓度或其他值或参数的时候，应当理解相当于具体揭示了通过将任意一对范围上限或优选数值与任意范围下限或优选数值结合起来的任何范围，而不考虑该范围是否具体揭示。除非另有说明，本文所列出的数值范围旨在包括范围的端点和该范围内的所有整数和分数(小数)。
[0027]术语“约”、“大约”当与数值变量并用时，通常指该变量的数值和该变量的所有数值在实验误差内(例如对于平均值95％的置信区间内)或在指定数值的
±
10％内，或更宽范围内。
[0028]表述“包含”或与其同义的类似表述“包括”、“含有”和“具有”等是开放性的，不排除额外的未列举的元素、步骤或成分。表述“由
…
组成”排除未指明的任何元素、步骤或成分。表述“基本上由
…
组成”指范围限制在指定的元素、步骤或成分，加上任选存在的不会实质上影响所要求保护的主题的基本和新的特征的元素、步骤或成分。应当理解，表述“包含”涵盖表述“基本上由
…
组成”和“由
…
组成”。
[0029]表述“至少一种(个)”或“一种(个)或多种(个)”表示1、2、3、4、5、6、7、8、9种(个)或
更多种(个)。
[0030]细菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMV)是革兰氏阴性细菌分泌到胞外的球形膜结构，目前已报道细菌外膜囊泡可介导多种功能，包括毒力因子的传递、错误折叠蛋白的外排及介导抗生素耐药等等。细菌胞外囊泡可选择性携带或包裹多种蛋白及核酸，特别是细菌表面蛋白，因此可用于疫苗的开发。
[0031]天然的细菌外膜囊泡由于表面携带LPS，具有一定的细胞毒性，因此传统方法多用去污剂提取外膜囊泡，以此去除LPS降低毒性。然而，该方法最大的弊端是去污剂在去除LPS的同时，也会使外膜表面携带的具有免疫原性的蛋白大量丢失。LPS由多糖链、核心多糖、脂质A(lipid A)三部分构成，其中产生毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.大肠杆菌囊泡在制备抗大肠杆菌感染的疫苗中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述大肠杆菌感染选自大肠杆菌尿道感染、膀胱感染、消化道感染、前列腺感染、胆囊感染、伤口感染、褥疮感染、血液感染及糖尿病患者足部感染中的一种或更多种。3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述大肠杆菌囊泡表面的脂多糖(LPS)结构中的脂质A(lipid A)的磷酸基团被磷酸乙醇胺修饰。4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述大肠杆菌囊泡来自携带mcr
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1基因的大肠杆菌。5.大肠杆菌囊泡用作免疫原的用途，其中，所述大肠杆菌囊泡表面的脂多糖(LPS)结构中的脂质A(lipid A)的磷酸基团被磷酸乙醇胺修饰。6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述大肠杆菌囊泡来自携带mcr
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1基因的大肠杆菌。7.一种大肠杆菌囊泡疫苗，其中，所述疫苗包含大肠杆菌囊泡，所述大肠杆菌囊泡表面的脂多糖(LPS)结构中的脂质A(lipid A)的磷酸基团被磷酸乙醇胺修饰。8.根据权利要求7所述的大肠杆菌囊泡疫苗，所述大肠杆菌囊泡来自携带mcr
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1基因的大肠杆菌。9.根据权利要求7所述的大肠杆菌囊泡疫苗，其中，所述大肠杆菌囊泡的粒径为约30
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300nm。10.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：游雪甫，李雪，王鹏贺，王秀坤，胡辛欣，聂彤颖，杨信怡，李聪然，李国庆，卢曦，庞晶，卢芸，张友文，孙琅，孟瑶，许春杰，
申请(专利权)人：中国医学科学院医药生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：