一种制备抗原递送粒子的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备抗原递送粒子的方法，所述方法包括先使用含有溶解剂的溶解液裂解细胞和

【技术实现步骤摘要】
一种制备抗原递送粒子的方法


[0001]本公开涉及免疫治疗领域，尤其涉及一种制备抗原递送粒子的方法
。

技术介绍

[0002]癌症疫苗是癌症等疾病免疫治疗的重要方法之一
。
影响癌症疫苗的主要因素包括抗原
、
佐剂和递送剂型
。
以癌症疫苗为例，对癌症疫苗影响最大的主要因素包括肿瘤抗原
、
佐剂和递送剂型
。
其中，抗原可以诱导激活特异性免疫反应，佐剂可以放大特异性的免疫反应，剂型可以影响抗原提呈细胞
(antigen
‑
presenting cells,APCs)
对疫苗的吞噬和后续激活抗原特异性
T
细胞的效率
。
在这三者中，抗原是能够引发特异性免疫反应的主要成分，因而是最关键的因素
。
癌细胞和
/
或肿瘤组织含有全部的癌细胞特异性抗原和癌细胞相关抗原，是最好的肿瘤抗原递送粒子或癌症疫苗的制备原料
。
但是未经纯化的全细胞组分中含有
DNA
和糖类物质等其他物质，因而降低了蛋白质和多肽等肿瘤抗原组分的含量，因而本专利技术使用含有溶解剂的溶解液增溶溶解肿瘤组织
/
癌细胞的全细胞裂解物组分后，再通过稀释的方法降低蛋白质和多肽组分的溶解度从而沉淀析出，再配合其他方法分离纯化出细胞中的抗原组分，可以有效增强负载抗原组分的纳米粒子或微米粒子的体外和体内作用的功效
。
专利
技术实现思路

[0003]专利技术要解决的问题
[0004]为了将细胞裂解物
(
比如癌细胞裂解物
)
中的蛋白质多肽组分分离纯化出来，且为了使分离纯化的方法尽可能简单方便，本专利技术使用了一种先使用含有溶解剂的溶解液裂解细胞和
/
或组织后，溶解细胞和
/
或组织的裂解物组分，然后加入超过溶解液体积的纯水或者水溶液稀释含有溶解剂的溶解液，从而使溶解液增溶溶解的蛋白质多肽等沉淀析出的抗原组分分离纯化的方法
。
该分离纯化方法简便易行，不需要使用含盐物质进行盐析，也没有盐析时因为含盐物质粘度高导致需要使用很高离心速度才能将盐析出的物质全部离心沉淀的潜在困扰
。
[0005]用于解决问题的方案
[0006]一种制备抗原递送粒子的方法，所述方法包括如下步骤：
[0007](1)
使用含有溶解剂的溶解液裂解细胞和
/
或组织；
[0008](2)
使用含有溶解剂的溶解液溶解步骤
(1)
裂解后的裂解物组分；
[0009](3)
加入体积是含有溶解剂的溶解液8倍以上的纯水或者水溶液，稀释含有溶解剂的溶解液，从而使溶解于溶解液中的裂解物组分中的蛋白质多肽等抗原组分因为溶解度下降而形成沉淀；
[0010](4)
离心后收集沉淀部分即为分离纯化的抗原组分；
[0011](5)
直接将收集的沉淀部分使用含有溶解剂的溶解液二次溶解后作为分离纯化的抗原组分使用，或者将收集的沉淀部分使用含有溶解剂的溶解液二次溶解后与步骤
(4)
离
心后上清液中的组分经过其他方法分离纯化得到的其他组分合并后一起作为分离纯化的抗原组分使用；
[0012]其中，所述溶解剂独立地选自含有结构式1结构的化合物
、
脱氧胆酸盐
、
十二烷基硫酸盐
、
甘油
、
蛋白质降解酶
、
多肽
、
氨基酸
、
糖苷和胆碱等中的一种或多种；其中，结构式1如下：
[0013]R1为
C、S、P、N
或
O
，
R2～
R5独立地选自氢
、
烷基
、
巯基
、
氨基
、
羧基
、
取代或未取代的胍基；
[0014]优选地，所述溶解剂选自盐酸二甲双胍
、
硫酸二甲双胍
、
磺酸二甲双胍
、
二甲双胍盐
、
二甲双胍
、
尿素
、
过氧化尿素
、
盐酸胍
、
硫酸胍
、
磺酸胍
、
胍盐
、
脲盐
、
脲
、
脱氧胆酸盐
、
十二烷基硫酸盐
、
甘油
、
蛋白质降解酶
、
多肽
、
氨基酸
、
糖苷和胆碱等中的一种或多种
。
[0015]优选地，所述方法还包括如下步骤：
[0016](6)
将分离纯化后的抗原组分进一步负载到纳米粒子或微米粒子的内部和
/
或表面
。
[0017]优选地，所述负载分离纯化后的抗原组分的纳米粒子或微米粒子具有如下所示的组分：
[0018](i)
粒子材料形成的纳米粒子和
/
或微米粒子骨架结构；
[0019](ii)
使用含有溶解剂的溶解液裂解细胞和
/
或组织的裂解物，和溶解后从其中分离纯化的抗原组分；
[0020]优选地，所述抗原组分负载于所述骨架结构的内部和
/
或表面；
[0021]更优选地，在细胞裂解前或者裂解后还可以使用适当方法增强抗原组分的免疫原性；
[0022]进一步优选地，所述增强抗原组分免疫原性的方法包括但不限于辐照
、
氧化
、
还原
、
使用半抗原物质修饰
、
固定
、
酶处理
、
变性
、
加热
、
矿化等
。
[0023]优选地，在步骤
(ii)
进行前，还可以使用特定的化学物质对所述细胞和
/
或组织做固定处理或者沉淀处理；
[0024]优选地，所述特定的化学物质包括但不限于甲醛
、
多聚甲醛
、
戊二醛
、
其他含有醛基的物质
、
乙醇
、
甲醇
、
丙酮
、
乙酸
、
丙酸
、
丁酸
、
甲酸
、
福尔马林
、
重铬酸盐
、
高锰酸钾
、
铬酸
、
苦味酸
、Zamboni
固定液
、PLP
固定液
、FPA
固定液...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种制备抗原递送粒子的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)
使用含有溶解剂的溶解液裂解细胞和
/
或组织；
(2)
使用含有溶解剂的溶解液溶解步骤
(1)
裂解后的裂解物组分；
(3)
加入体积是含有溶解剂的溶解液8倍以上的纯水或者水溶液，稀释含有溶解剂的溶解液，从而使溶解于溶解液中的裂解物组分中的蛋白质多肽等抗原组分因为溶解度下降而形成沉淀；
(4)
离心后收集沉淀的部分即为分离纯化的抗原组分；
(5)
直接将收集的沉淀部分使用含有溶解剂的溶解液二次溶解后作为分离纯化的抗原组分使用，或者将收集的沉淀部分使用含有溶解剂的溶解液二次溶解后与步骤
(4)
离心后上清液中的组分经过其他方法分离纯化得到的其他组分合并后一起作为分离纯化的抗原组分使用；其中，所述溶解剂独立地选自含有结构式1结构的化合物
、
脱氧胆酸盐
、
十二烷基硫酸盐
、
甘油
、
蛋白质降解酶
、
多肽
、
氨基酸
、
糖苷和胆碱中的一种或多种；其中，结构式1如下：
R1为
C、S、P、N
或
O
，
R2～
R5独立地选自氢
、
烷基
、
巯基
、
氨基
、
羧基
、
取代或未取代的胍基；优选地，所述溶解剂选自盐酸二甲双胍
、
硫酸二甲双胍
、
磺酸二甲双胍
、
二甲双胍盐
、
二甲双胍
、
尿素
、
过氧化尿素
、
盐酸胍
、
硫酸胍
、
磺酸胍
、
胍盐
、
脲盐
、
脲
、
脱氧胆酸盐
、
十二烷基硫酸盐
、
甘油
、
蛋白质降解酶
、
多肽
、
氨基酸
、
糖苷和胆碱中的一种或多种
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：
(6)
将分离纯化后的抗原组分进一步负载到纳米粒子或微米粒子的内部和
/
或表面
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述负载分离纯化后的抗原组分的纳米粒子或微米粒子具有如下所示的组分：
(i)
粒子材料形成的纳米粒子和
/
或微米粒子骨架结构；
(ii)
使用含有溶解剂的溶解液裂解细胞和
/
或组织的裂解物，和溶解后从其中分离纯化的抗原组分；优选地，所述抗原组分负载于所述骨架结构的内部和
/
或表面；更优选地，在细胞裂解前或者裂解后还可以使用适当方法增强抗原组分的免疫原性；进一步优选地，所述增强抗原组分免疫原性的方法包括但不限于辐照
、
氧化
、
还原
、
使用半抗原物质修饰
、
固定
、
酶处理
、
变性
、
加热
、
矿化
。4.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤
(ii)
进行前，还可以使用特定的化学物质对所述细胞和
/
或组织做固定处理或者沉淀处理；优选地，所述特定的化学物质包括但不限于甲醛
、
多聚甲醛
、
戊二醛
、
其他含有醛基的物质
、
乙醇
、
甲醇
、
丙酮
、
乙酸
、
丙酸
、
丁酸
、
甲酸
、
福尔马林
、
重铬酸盐
、
高锰酸钾
、
铬酸
、
苦味酸
、Zamboni
固定液
、PLP
固定液
、FPA
固定液
、TAF
固定液
、Rossman
固定液
、Regaud
固定液
、PLPD
固定液
、PAPG
固定液
、Orth
固定液
、Muller
固定液
、McDoWell
固定液
、
中性甲醛钙固定液
、FAB
固定液
、Carnoy
固定液
、Clarke
固定液
、B
‑5固定液
、Bouin
固定液
、FineFIX
固定液
、
A.G.M(70
％乙醇
80ml+
冰醋酸
10ml+
甲醇
10ml)
固定液
、Helly
固定液
、Zenker
固定液
、Kolmer
固定液
、AAF
固定液
、Hollande
固定液
、Gendre
固定液
、
醛类固定液
、
汞类固定液
、
醇类固定液
、
氧化剂类固定液
、
苦味酸盐类固定液
、
其他细胞或组织的固定剂或固定液
、
氧化二乙烯中的一种或者多种
。5.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氧化是使用氧化剂氧化抗原组分；优选地，所述氧化剂包括但不限于次氯酸
、
过氧化氢
、
过硫酸盐
、
重铬酸盐
、
过氧乙酸
、
铬酸
、
过硫酸铵
、
次氯酸钠
、
过碳酸钠
、
过硼酸钠
、
过硼酸钾
、
高氯酸盐
、
高锰酸盐
、
过氧化钠
、KIO3、KBrO3、ClO3‑
、ClO4‑
、Na2O2、K2O2、MgO2、CaO2、BaO2、NO3‑
、MnO4‑
、F2、Cl2、O2、Br2、I2、S、Si、HNO3、MnO2、FeCl3中的一种或多种
。6.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述辐照包括任何常用的辐照方法；优选地，所述辐照包括但不限于放射性物质辐照
、
电子束辐照
、
微波辐照
、
紫外线辐照
、X
射线辐照
、
α
射线辐照
、
β
射线辐照
、
γ
射线辐照中的一种或者多种
。7.
根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述半抗原物质包括但不限于
2,4
‑
二硝基氟苯
、2,4
‑
二硝基氯苯
、
三硝基苯酚
、
二硝基苯酚
、
白蛋白
、Ovalbumin、N
‑
碘乙酰基
‑
N
’‑
(5
‑
磺酸基1‑
萘基
)
亚乙基二酰胺
、
取代或未取代的苯磺酰胺
、
甲醛
、
多聚甲醛
、
其他含有醛基的半抗原物质
、
鼠李糖

【专利技术属性】
技术研发人员：刘密，
申请(专利权)人：苏州尔生生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：