负载细胞外囊泡的方法技术

本公开涉及将有效负载负载到

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】负载细胞外囊泡的方法
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2021
年2月
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[0003]本公开涉及使用有效负载
(
例如反义寡核苷酸
)
来负载细胞外囊泡
(EV)
的方法
。
在一些方面，该方法包括在负载过程中调节以下中的一个或多个：盐浓度
、
温度
、
负载时间和进料浓度
。
本公开还涉及包含有效负载的
EV(
例如外泌体
)
，其中使用本文描述的方法负载有效负载
。

技术介绍

[0004]许多生物活性化合物具有强效的生物活性，其具有治疗意义
。
然而，这些化合物通常在非靶器官中表现出毒性
。
限制非靶组织的暴露的一种方法是将小分子化学地缀合到基于亲和力的试剂
(
例如抗体
)
，这可以将治疗性化合物引导到特定的细胞类型
(Dosio,F.et al.,Toxins(Basuel)3(7):848
‑
883(2011))
，但这种方法受到可以连接到抗体
(
通常每个抗体2至6个分子
)
的感兴趣的化合物的分子数量的限制，并且受到特异性结合到靶向的
、
相关的病变
/
效应细胞而不与非靶细胞结合的抗体的可用性
/
存在性的限制
。
这两个问题分别通过降低效力和增加全身毒性来限制抗体药物偶联物
(ADC)
的使用
。
因此，需要具有比
ADC
更高的有效负载的递送系统，该系统可以选择性地靶向特定的组织或器官，同时限制对治疗性化合物的整体全身性暴露
。
[0005]EV
是细胞间通讯的重要介质
。
作为药物递送载体，与传统的药物递送方法
(
例如肽免疫
、DNA
疫苗
)
相比，
EV
作为许多治疗领域的新治疗方式，提供许多优势
。
然而，尽管其具有优势，但是许多
EV
具有有限的临床疗效
。
例如，在患有无法手术的非小细胞肺癌
(NSCLC)
的患者进行一线化疗后，在
II
期临床试验中对作为维持性免疫疗法的树突状细胞衍生的外泌体
(DEX)
进行研究
。
然而，由于未达到主要终点指标
(
在化疗停止后至少
50
％的患者具有4个月无进展生存期
(PFS))
而终止试验
。Besse,B.,et al.,Oncoimmunology 5(4):e1071008(2015)。
[0006]因此，需要新型的和更有效的工程化
EV(
例如，包含更高的有效负载浓度
)
，以更好地实现基于
EV
的技术的治疗用途和其他应用
。

技术实现思路

[0007]本文提供将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，该方法包括在负载缓冲液中将有
效负载与细胞外囊泡混合，该负载缓冲液包含浓度低于约
200mM、
约
190mM、
约
180mM、
约
170mM、
约
160mM、
约
150mM、
约
140mM、
约
130mM、
约
120mM
或约
110mM
的盐
。
[0008]在一些方面，盐浓度为约
1mM
至约
150mM、
约
5mM
至约
150mM、
约
10mM
至约
150mM、
约
20mM
至约
150mM、
约
30mM
至约
150mM、
约
40mM
至约
150mM、
约
50mM
至约
150mM、
约
60mM
至约
150mM、
约
70mM
至约
150mM、
约
80mM
至约
150mM、
约
10mM
至约
130mM、
约
20mM
至约
130mM、
约
30mM
至约
130mM、
约
40mM
至约
130mM、
约
50mM
至约
130mM、
约
10mM
至约
120mM、
约
20mM
至约
120mM、
约
30mM
至约
120mM、
约
40mM
至约
120mM、
约
50mM
至约
120mM、
约
60mM
至约
120mM、
约
70mM
至约
120mM、
约
80mM
至约
120mM、
约
50mM
至约
100mM、
约
100mM
至约
150mM、
或约
90mM
至约
110mM。
在某些方面，盐浓度为约
10mM、
约
20mM、
约
30mM、
约
40mM、
约
50mM、
约
60mM、
约
70mM、
约
80mM、
约
90mM、
约
100mM、
约...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括在负载缓冲液中将有效负载与细胞外囊泡混合，所述负载缓冲液包含浓度低于约
200mM、
约
190mM、
约
180mM、
约
170mM、
约
160mM、
约
150mM、
约
140mM、
约
130mM、
约
120mM
或约
110mM
的盐
。2.
根据权利要求1所述的方法，其中盐浓度为约
1mM
至约
150mM、
约
5mM
至约
150mM、
约
10mM
至约
150mM、
约
20mM
至约
150mM、
约
30mM
至约
150mM、
约
40mM
至约
150mM、
约
50mM
至约
150mM、
约
60mM
至约
150mM、
约
70mM
至约
150mM、
约
80mM
至约
150mM、
约
10mM
至约
130mM、
约
20mM
至约
130mM、
约
30mM
至约
130mM、
约
40mM
至约
130mM、
约
50mM
至约
130mM、
约
10mM
至约
120mM、
约
20mM
至约
120mM、
约
30mM
至约
120mM、
约
40mM
至约
120mM、
约
50mM
至约
120mM、
约
60mM
至约
120mM、
约
70mM
至约
120mM、
约
80mM
至约
120mM、
约
50mM
至约
100mM、
约
100mM
至约
150mM、
或约
90mM
至约
110mM。3.
根据权利要求1所述的方法，其中盐浓度为约
10mM、
约
20mM、
约
30mM、
约
40mM、
约
50mM、
约
60mM、
约
70mM、
约
80mM、
约
90mM、
约
100mM、
约
110mM、
约
120mM、
约
130mM、
约
140mM、
约
150mM、
约
160mM、
约
170mM、
约
180mM
或约
190mM。4.
根据权利要求1所述的方法，其中盐浓度为约
50mM、
约
60mM、
约
70mM、
约
80mM、
约
90mM、
约
100mM、
约
110mM、
约
120mM、
约
130mM、
约
140mM
或约
150mM。5.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括在负载缓冲液中将有效负载与细胞外囊泡混合，所述负载缓冲液包含浓度为约
200mM
至约
450mM
的盐
。6.
根据权利要求5所述的方法，其中盐浓度为约
200mM、
约
250mM、
约
300mM、
约
350mM、
约
400mM
或约
450mM。7.
根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中盐包括
NaCl(
氯化钠
)、KCl(
氯化钾
)、PO4(
磷酸盐
)、CaCl2(
氯化钙
)、MgCl2(
氯化镁
)、Mg2SO4(
硫酸镁
)、ZnCl2(
氯化锌
)、MnCl2(
氯化锰
)、MnSO4(
硫酸锰
)、NaSCN(
硫氰酸钠
)、KSCN(
硫氰酸钾
)、LiCl(
氯化锂
)、K2HPO4(
磷酸二钾
)、Na2SO4(
硫酸钠
)、NaPO4(
磷酸钠
)、K2SO4(
磷酸钾
)、
乙酸钠
、
溴化钠
、
碘化钠
、
溴化钾
、
溴化锂
、
氟化钠
、
氟化钾
、
氟化锂
、
碘化锂
、
乙酸钾
、
乙酸锂
、
碘化钾
、
硫酸钙
、
硫酸钠
、
三氯化铬
、
硫酸铬
、
柠檬酸钠
、
氯化铁
(III)、
氯化钇
(III)、
硫酸钾
、
氯化亚铁
、
柠檬酸钙
、
磷酸镁
、
氯化铁
、
精氨酸
‑
HCl
或其任何组合
。8.
根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中与不含盐或具有较低浓度的盐的相应负载缓冲液相比，包含盐的负载缓冲液将有效负载到
EV
的负载增加至少约2倍
、
至少约3倍
、
至少约4倍
、
至少约5倍
、
至少约6倍
、
至少约7倍
、
至少约8倍
、
至少约9倍
、
至少约
10
倍
、
至少约
15
倍
、
至少约
20
倍
、
至少约
25
倍
、
至少约
30
倍
、
至少约
35
倍
、
至少约
40
倍
、
至少约
45
倍
、
或至少约
50
倍或更多
。9.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括在高于
4℃
的负载温度下将有效负载与细胞外囊泡混合
。10.
根据权利要求9所述的方法，其中负载温度为约
5℃
至约
40℃、
约
10℃
至约
40℃、
约
15℃
至约
40℃、
约
20℃
至约
40℃、
约
25℃
至约
40℃、
约
30℃
至约
40℃、
约
35℃
至约
40℃、
约
5℃
至约
38℃、
约
10℃
至约
38℃、
约
15℃
至约
38℃、
约
20℃
至约
38℃、
约
25℃
至约
38℃、
约
30℃
至约
38℃、
约
35℃
至约
38℃、
约
5℃
至约
37℃、
约
10℃
至约
37℃、
约
15℃
至约
37℃、
约
20℃
至约
37℃、
约
25℃
至约
37℃、
约
30℃
至约
37℃、
约
35℃
至约
37℃。11.
根据权利要求9或
10
所述的方法，其中负载温度为约
5℃、
约
10℃、
约
15℃、
约
20℃、
约
25℃、
约
30℃、
约
35℃、
约
37℃、
约
40℃、
约
50℃、
约
55℃、
约
60℃、
约
65℃
或约
70℃。12.
根据权利要求9至
11
中任一项所述的方法，其中与在低于负载温度的参考温度下的负载相比，负载温度将有效负载到
EV
的负载增加至少约2倍
、
至少约3倍
、
至少约4倍
、
至少约5倍
、
至少约6倍
、
至少约7倍
、
至少约8倍
、
至少约9倍
、
至少约
10
倍
、
至少约
15
倍
、
至少约
20
倍
、
至少约
25
倍
、
至少约
30
倍
、
至少约
35
倍
、
至少约
40
倍
、
至少约
45
倍
、
或至少约
50
倍或更多
。13.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括将有效负载与细胞外囊泡混合持续超过约1小时的负载持续时间
。14.
根据权利要求
13
所述的方法，其中负载持续时间为约1小时至约
48
小时
、
约1小时至约
42
小时
、
约1小时至约
36
小时
、
约1小时至约
30
小时
、
约1小时至约
24
小时
、
约6小时至约
48
小时
、
约6小时至约
42
小时
、
约6小时至约
36
小时
、
约6小时至约
30
小时
、
约6小时至约
24
小时
、
约
12
小时至约
48
小时
、
约
12
小时至约
42
小时
、
约
12
小时至约
36
小时
、
约
12
小时至约
30
小时
、
或约
12
小时至约
24
小时
。15.
根据权利要求
13
或
14
所述的方法，其中负载持续时间为约6小时
、
约
12
小时
、
约
24
小时
、
约
30
小时
、
约
36
小时
、
约
42
小时
、
约
48
小时
、
约3天
、
约4天
、
约5天
、
约6天或约7天
。16.
根据权利要求
13
至
15
中任一项所述的方法，其中与少于负载持续时间的参考持续时间的负载相比，负载持续时间将有效负载到
EV
的负载增加至少约2倍
、
至少约3倍
、
至少约4倍
、
至少约5倍
、
至少约6倍
、
至少约7倍
、
至少约8倍
、
至少约9倍
、
至少约
10
倍
、
至少约
15
倍
、
至少约
20
倍
、
至少约
25
倍
、
至少约
30
倍
、
至少约
35
倍
、
至少约
40
倍
、
至少约
45
倍
、
或至少约
50
倍或更多
。17.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括在
5℃
至约
50℃
的负载温度下在包含浓度低于
200mM
的盐的负载缓冲液中将有效负载与细胞外囊泡混合持续约1小时至
48
小时的负载持续时间
。18.
根据权利要求
17
所述的方法，其中盐浓度为约
1mM
至约
150mM、
约
5mM
至约
150mM、
约
10mM
至约
150mM、
约
20mM
至约
150mM、
约
30mM
至约
150mM、
约
40mM
至约
150mM、
约
50mM
至约
150mM、
约
60mM
至约
150mM、
约
70mM
至约
150mM、
约
80mM
至约
150mM、
约
10mM
至约
130mM、
约
20mM
至约
130mM、
约
30mM
至约
130mM、
约
40mM
至约
130mM、
约
50mM
至约
130mM、
约
10mM
至约
120mM、
约
20mM
至约
120mM、
约
30mM
至约
120mM、
约
40mM
至约
120mM、
约
50mM
至约
120mM、
约
60mM
至约
120mM、
约
70mM
至约
120mM、
约
80mM
至约
120mM、
约
50mM
至约
100mM、
约
100mM
至约
150mM、
或约
90mM
至约
110mM。19.
根据权利要求
17
或
18
所述的方法，其中盐浓度为约
10mM、
约
20mM、
约
30mM、
约
40mM、
约
50mM、
约
60mM、
约
70mM、
约
80mM、
约
90mM、
约
100mM、
约
110mM、
约
120mM、
约
130mM、
约
140mM、
约
150mM、
约
160mM、
约
170mM、
约
180mM
或约
190mM。20.
根据权利要求
19
所述的方法，其中盐浓度为约
50mM、
约
60mM、
约
70mM、
约
80mM、
约
90mM、
约
100mM、
约
110mM、
约
120mM、
约
130mM、
约
140mM
或约
150mM。21.
根据权利要求
17
至
20
中任一项所述的方法，其中盐包括
NaCl(
氯化钠
)、KCl(
氯化钾
)、PO4(
磷酸盐
)、CaCl2(
氯化钙
)、MgCl2(
氯化镁
)、Mg2SO4(
硫酸镁
)、ZnCl2(
氯化锌
)、MnCl2(
氯化锰
)、MnSO4(
硫酸锰
)、NaSCN(
硫氰酸钠
)、KSCN(
硫氰酸钾
)、LiCl(
氯化锂
)、K2HPO4(
磷酸二钾
)、Na2SO4(
硫酸钠
)、NaPO4(
磷酸钠
)、K2SO4(
磷酸钾
)、
乙酸钠
、
溴化钠
、
碘化钠
、
溴化钾
、
溴化锂
、
氟化钠
、
氟化钾
、
氟化锂
、
碘化锂
、
乙酸钾
、
乙酸锂
、
碘化钾
、
硫酸钙
、
硫酸钠
、
三氯化铬
、
硫酸铬
、
柠檬酸钠
、
氯化铁
(III)、
氯化钇
(III)、
硫酸钾
、
氯化亚铁
、
柠檬酸钙
、
磷酸镁
、
氯化铁
、
精氨酸
‑
HCl
或其任何组合
。22.
根据权利要求
17
至
21
中任一项所述的方法，其中负载温度为约
5℃
至约
40℃、
约
10℃
至约
40℃、
约
15℃
至约
40℃、
约
20℃
至约
40℃、
约
25℃
至约
40℃、
约
30℃
至约
40℃、
约
35℃
至约
40℃、
约
5℃
至约
38℃、
约
10℃
至约
38℃、
约
15℃
至约
38℃、
约
20℃
至约
38℃、
约
25℃
至约
38℃、
约
30℃
至约
38℃、
约
35℃
至约
38℃、
约
5℃
至约
37℃、
约
10℃
至约
37℃、
约
15℃
至约
37℃、
约
20℃
至约
37℃、
约
25℃
至约
37℃、
约
30℃
至约
37℃、
约
35℃
至约
37℃。23.
根据权利要求
17
至
22
中任一项所述的方法，其中负载温度为约
5℃、
约
10℃、
约
15℃、
约
20℃、
约
25℃、
约
30℃、
约
35℃、
约
37℃、
约
40℃
或约
50℃。24.
根据权利要求
17
至
23
中任一项所述的方法，其中负载持续时间为约1小时至约
48
小时
、
约1小时至约
42
小时
、
约1小时至约
36
小时
、
约1小时至约
30
小时
、
约1小时至约
24
小时
、
约6小时至约
48
小时
、
约6小时至约
42
小时
、
约6小时至约
36
小时
、
约6小时至约
30
小时
、
约6小时至约
24
小时
、
约
12
小时至约
48
小时
、
约
12
小时至约
42
小时
、
约
12
小时至约
36
小时
、
约
12
小时至约
30
小时
、
或约
12
小时至约
24
小时
。25.
根据权利要求
17
至
24
中任一项所述的方法，其中负载持续时间为约6小时
、
约
12
小时
、
约
24
小时
、
约
30
小时
、
约
36
小时
、
约
42
小时或约
48
小时
。26.
根据权利要求
17
所述的方法，其中盐浓度为约
50mM
至
150mM
，负载温度为
30℃
至
40℃
，负载持续时间为约
20
小时至约
30
小时
。27.
根据权利要求
17
所述的方法，其中盐浓度为约
50mM
至
150mM
，负载温度为
30℃
至
40℃
，负载持续时间为约
12
小时至约
30
小时
。28.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括在约
37℃
的负载温度下在包含浓度为约
100mM
的盐的负载缓冲液中将有效负载与细胞外囊泡混合持续约
24
小时的负载持续时间
。29.
将有效负载负载到细胞外囊泡的方法，所述方法包括在约
37℃
至约
70℃
的负载温度下在包含浓度为
150mM
至
450mM
的盐的负载缓冲液中将有效负载与细胞外囊泡混合持续约
24
小时至约7天的负载持续时间
。30.
根据权利要求
29
所述的方法，其中盐浓度为约
150mM、
约
200mM、
约
250mM、
约
300mM、
约
350mM、
约
400mM
或约
450mM。31.
根据权利要求
29
或
30
所述的方法，其中盐包括
NaCl(
氯化钠
)、KCl(
氯化钾
)、PO4(
磷酸盐
)、CaCl2(
氯化钙
)、MgCl2(
氯化镁
)、Mg2SO4(
硫酸镁
)、ZnCl2(
氯化锌
)、MnCl2(
氯化锰
)、MnSO4(
硫酸锰
)、NaSCN(
硫氰酸钠
)、KSCN(
硫氰酸钾
)、LiCl(
氯化锂
)、K2HPO4(
磷酸二钾
)、Na2SO4(
硫酸钠
)、NaPO4(
磷酸钠
)、K2SO4(
磷酸钾
)、
乙酸钠
、
溴化钠
、
碘化钠
、
溴化钾
、
溴化锂
、
氟化钠
、
氟化钾
、
氟化锂
、
碘化锂
、
乙酸钾
、
乙酸锂
、
碘化钾
、
硫酸钙
、
硫酸钠
、
三氯化铬
、
硫酸铬
、
柠檬酸钠
、
氯化铁
(III)、
氯化钇
(III)、
硫酸钾
、
氯化亚铁
、
柠檬酸钙
、
磷酸镁
、
氯化铁
、
精氨酸
‑
HCl
或其任何组合
。32.
根据权利要求
29
至
32
中任一项所述的方法，其中负载温度为约
37℃、
约
40℃、
约
45℃、
约
50℃、
约
55℃、
约
60℃、
约
65℃
或约
70℃。33.
根据权利要求
29
至
33
中任一项所述的方法，其中负载持续时间为约
24
小时
、
约2天
、
约3天
、
约4天
、
约5天
、
约6天或约7天
。
34.
根据权利要求
17
至
33
中任一项所述的方法，其中与不含盐
、
在
4℃
的温度下和
/
或持续负载时间为1小时的负载相比，在所述盐浓度和所述负载温度下持续所述负载持续时间的负载将有效负载到细胞外囊泡的负载增加至少约1倍
、
至少约2倍
、
至少约3倍
、
至少约4倍
、
至少约5倍
、
至少约6倍
、
至少约7倍
、
至少约8倍
、
至少约9倍
、
至少约
10
倍
、
至少约
12
倍
、
至少约
14
倍
、
至少约
16
倍
、
至少约
18
倍
、
至少约
20
倍
、
至少约
25
倍
、
至少约
30
倍
、
至少约
35
倍
、
至少约
40
倍
、
或至少约
45
倍
、
或至少约
50
倍或更多
。35.
根据权利要求1至
34
中任一项所述的方法，所述方法还包括在混合后测量负载到
EV
的有效负载的量并测定
EV
的负载密度
。36.
根据权利要求
35
所述的方法，其中调整一个或多个负载参数以进一步增加
EV
的负载密度，其中一个或多个负载参数选自：负载缓冲液的盐浓度
、
负载温度
、
负载持续时间
、
有效负载进料浓度
、EV
进料浓度
、
或其组合
。37.
根据权利要求
35
或
36
所述的方法，其中使用粒子计数器
、NTA、
紫外线吸附
、
可见吸附
、
荧光
、
近红外
、
红外
、
静态光散射
、
动态光散射
、
屏蔽
、
拉曼光谱
、
浊度或其组合来测量负载到
EV
的有效负载的量
。38.
根据权利要求1至
37
中任一项所述的方法，其中混合以间歇模式
、
半间歇模式
、
半连续模式或连续模式发生
。39.
在
EV
负载后减少细胞外囊泡
(EV)
与有效负载的解离的方法，所述方法包括根据权利要求1至
38
中任一项所述的方法将有效负载负载到
EV。40.
根据权利要求
39
所述的方法，其中与未根据权利要求1至
38
中任一项所述的方法将有效负载负载到
EV
时观察到的相应解离相比，有效负载与
EV
的解离减少至少约
10
％
、
至少约
20
％
、
至少约
30
％
、
至少约
40
％
、
至少约
50
％
、
至少约
60
％
、
至少约
70
％
、
至少约
80
％
、
至少约
90
％或约
100
％
。41.
提高将有效负载负载到细胞外囊泡
(EV)
的稳定性的方法，所述方法包括根据权利要求1至
38
中任一项所述的方法将有效负载负载到
EV。42.
根据权利要求
41
所述的方法，其中与未根据权利要求1至
38
中任一项所述的方法将有效负载负载到
EV
时观察到的相应稳定性相比，负载有效负载的
EV
的稳定性提高至少约2倍
、
至少约1倍
、
至少约2倍
、
至少约3倍
、
至少约4倍
、
至少约5倍
、
至少约6倍
、
至少约7倍
、
至少约8倍
、
至少约9倍
、
至少约
10
倍
、
至少约
12
倍
、
至少约
14
倍
、
至少约
16
倍
、
至少约
18
倍
、
至少约
20
倍
、
至少约
25
倍
、
至少约
30
倍
、
至少约
35
倍
、
至少约
40
倍
、
至少约
45
倍
、
或至少约
50
倍或更多
。43.
在负载有效负载后改进细胞外囊泡的一种或多种性质的方法，所述方法包括根据权利要求1至
38
中任一项所述的方法将有效负载负载到
EV。44.
根据权利要求
43
所述的方法，其中一种或多种性质包括：颗粒间相互作用
、
颗粒刚性
、
颗粒尺寸或其组合
。45.
根据权利要求
43
或
44
所述的方法，其中一种或多种性质性质的改进允许提高
EV
的可过滤性
。46.
根据权利要求1至
45
中任一项所述的方法，其中负载缓冲液还包含一种或多种组分
。47.
根据权利要求
46
所述的方法，其中一种或多种组分包括三羟甲基氨基甲烷
、
蔗糖
、
葡萄糖
、
海藻糖
、
甘露糖
、
山梨糖醇
、
甘露糖醇
、
甘油
、
组氨酸
、
精氨酸
、
甲硫氨酸
、
色氨酸
、
酪氨酸
、
磷酸钠
、
磷酸钾
、
聚合物
、
表面活性剂
(
例如聚山梨醇酯
80
和
20)、
螯合剂
(
例如
EDTA、
柠檬酸盐
)、
无机酸或其任何组合
。48.
根据权利要求
47
所述的方法，其中一种或多种组分为蔗糖
。49.
根据权利要求
48
所述的方法，其中蔗糖的浓度低于约
10
％
w/v、
低于约9％
w/v、
低于约8％
w/v、
低于约7％
w/v、
低于约6％
w/v、
低于约5％
w/v、
低于约4％
w/v、
低于约3％
w/v、
或低于约
2.5
％
w/v。50.
根据权利要求
48
所述的方法，其中蔗糖的浓度为约1％
w/v
至约
10
％
w/v、
约2％
w/v
至约
10
％
w/v、
约3％
w/v
至约
10
％
w/v、
约4％
w/v
至约
10
％
w/v、
约5％
w/v
至约
10
％
w/v、
约1％
w/v
至约8％
w/v、
约2％
w/v
至约8％
w/v、
约3％
w/v
至约8％
w/v、
约4％
w/v
至约8％
w/v、
约5％
w/v
至约8％
w/v、
约1％
w/v
至约5％
w/v、
约2％
w/v
至约5％
w/v、
约3％
w/v
至约5％
w/v、
约4％
w/v
至约5％
w/v、
或约5％
w/v
至约6％
w/v。51.
根据权利要求1至
50
中任一项所述的方法，其中负载缓冲液的容量渗透压摩尔浓度为约
100
至约
600mOsm/kg。52.
根据权利要求
51
所述的方法，其中负载缓冲液的容量渗透压摩尔浓度为约
275
至约
450mOsm/kg、
约
280
至约
450mOsm/kg、
约
300
至约
450mOsm/kg、
约
275
至约
400mOsm/kg、
约
280
至约
400mOsm/kg、
约
300
至约
400mOsm/kg、
约
275
至约
380mOsm/kg、
约
280
至约
380mOsm/kg、
约
300
至约
380mOsm/kg、
约
275
至约
350mOsm/kg、
约
280
至约
350mOsm/kg、
约
300
至约
350mOsm/kg、
约
275
至约
310mOsm/kg、
约
280
至约
310mOsm/kg、
或约
300
至约
310mOsm/kg。53.
根据权利要求
51
或
52
所述的方法，其中负载缓冲液的容量渗透压摩尔浓度为约
360、
约
370、
约
380、
约
390、
约
395
或约
400mOsm/kg。54.
根据权利要求1至
53
中任一项所述的方法，其中负载缓冲液的
pH
为约6至约
8。55.
根据权利要求
54
所述的方法，其中
pH
为约6至约
7、
或约7至约
8。56.
根据权利要求
54
所述的方法，其中
pH
为约
6、
约7或约
8。57.
根据权利要求1至
53
中任一项所述的方法，其中负载缓冲液的
pH
为约
9。58.
根据权利要求1至
57
中任一项所述的方法，其中有效负载包含肽
、
小分子
、
寡核苷酸
、
反义寡核苷酸
(ASO)、PMO、mRNA、miRNA、lcRNA、antagomir、tRNA、siRNA、
肽核酸
、
细胞穿透肽
、
佐剂
、
蛋白质
、
碳水化合物
、
糖
、
氨基酸或其任何组合
。59.
根据权利要求1至
58
中任一项所述的方法，其中有效负载包含核酸
。60.
根据权利要求
59
所述的方法，其中核酸包括长度小于约
40、
小于约
35、
小于约
30、
小于约
25、
小于约
20、
小于约
19、
小于约
18、
小于约
17、
小于约
16
或小于约
15
个核苷酸的连续序列
。61.
根据权利要求
59
或
60
所述的方法，其中核酸包括长度为约
10
至约
30、
约
14
至约
30、
约
15
至约
30、
约
16
至约
30、
约
17
至约
30、
约
18
至约
30、
约
19
至约
30、
约
20
至约
30、
约
10
至约
25、
约
14
至约
25、
约
15
至约
25、
约
16
至约
25、
约
17
至约
25、
约
18
至约
25、
约
19
至约
25、
约
20
至约
25、
约
10
至约
22、
约
14
至约
22、
约
15
至约
22、
约
16
至约
22、
约
17
至约
22、
约
18
至约
22、
约
19
至约
22、
或约
20
至约
22
的连续序列
。62.
根据权利要求
59
至
61
中任一项所述的方法，其中核酸包含反义寡核苷酸
。63.
根据权利要求
62
所述的方法，其中反义寡核苷酸特异性地结合到一个或多个基因，
并且减少由一个或多个基因编码的蛋白质的表达
。64.
根据权利要求
63
所述的方法，其中一个或多个基因包括
STAT6、Kras、Nras、PMP22、C/EBP
β
、STAT3、NLRP3
或其任何组合
。65.
根据权利要求1至
64
中任一项所述的方法，其中在负载缓冲液中的有效负载的浓度为约
100
至约
1000
μ

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：隆萨销售股份有限公司，
类型：发明
国别省市：