病毒载体的自动化产生制造技术

本公开提供了一种在全封闭式细胞工程系统内利用产生工程化病毒载体的细胞系或包装细胞产生病毒载体的自动化方法。可以产生的示例性病毒载体包含慢病毒载体、腺相关病毒载体、杆状病毒载体和逆转录病毒载体。杆状病毒载体和逆转录病毒载体。杆状病毒载体和逆转录病毒载体。

Automatic generation of virus vectors

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】病毒载体的自动化产生


[0001]本公开提供了一种在全封闭式细胞工程系统内利用产生工程化病毒载体的细胞系或包装细胞产生病毒载体的自动化方法。可以产生的示例性病毒载体包含慢病毒载体、腺相关病毒载体、杆状病毒载体和逆转录病毒载体。

技术介绍

[0002]病毒载体作为基础研究工具和用于基因治疗都至关重要。例如，安全性和长期表达能力使腺相关病毒(AAV)成为用于人类基因疗法的优秀病毒载体。类似地，慢病毒载体是基因和细胞疗法领域最常用的递送方法之一。然而，产生大多数病毒载体的传统手段昂贵、耗时且繁琐。此外，依赖于桥接平台(如AAV)或多重瞬时转染(如慢病毒)的方法的载体产率可能太低或大多数治疗应用需要太多的质粒DNA。另外，对于小规模病毒载体生产，可能不需要或不期望大的分批过程。
[0003]病毒载体自动化产生的益处包含与使用自动化相关联的劳动时间节省以及改进的产品一致性、减少的室分类、减少的洁净室占地面积、降低的培训复杂性以及改进的扩大和跟踪物流。此外，可以使用软件通过使用自动生成的电子批记录提供所有处理设备、试剂、操纵子标识、过程中传感器数据等的历史记录来简化记录过程。
[0004]工程化哺乳动物细胞最佳地产生病毒载体的自动化的、自含式系统将革新基因疗法领域。迫切需要将允许控制大规模或小规模批量生产的病毒产生、提供可再现且稳定的结果、同时限制污染并降低成本的技术。

技术实现思路

[0005]在一些实施例中，本文提供了一种用于自动化产生病毒载体的方法，所述方法包括：将工程化病毒生产细胞引入到全封闭式细胞工程系统中；用编码所关注基因的载体转导所述工程化病毒生产细胞以产生经转导的病毒生产细胞；扩增所述经转导的病毒生产细胞并且在所述经转导的病毒生产细胞内产生所述病毒载体；将经扩增的生产细胞转移到下游处理模块；以及分离所述病毒载体；以及纯化所述病毒载体，其中在封闭且自动化过程中执行(a)到(e)。
[0006]本文还提供了一种用于自动化产生病毒载体的方法，所述方法包括：将包装细胞引入到全封闭式细胞工程系统中；用编码病毒辅助基因、病毒包装基因和所关注基因的一个或多个载体转导所述包装细胞以产生经转导的细胞；扩增所述经转导的细胞并在所述经转导的细胞内产生所述病毒载体；将经扩增的细胞转移到下游处理模块；以及分离所述病毒载体；以及纯化所述病毒载体，其中在封闭且自动化过程中执行(a)到(e)。
附图说明
[0007]图1示出了根据本文实施例的自动化产生病毒载体的流程图。
[0008]图2示出了如本文实施例中所描述的封闭且自动化细胞工程系统。
[0009]图3示出了包含如本文实施例中所描述的示例性封闭且自动化细胞工程系统的实验室空间。
[0010]图4示出了病毒载体产生过程的图，所述病毒载体产生过程可以在如本文实施例中所描述的封闭且自动化系统的盒中进行。
[0011]图5示出了如本文所描述的自动化细胞工程系统内的过程的流程图。
[0012]图6示出了根据本文实施例的下游处理的框图。
[0013]图7示出了根据本文实施例的下游处理的流程图。
[0014]图8A
‑
8D示出了根据本文实施例的下游处理模块的组件。
[0015]图9示出了根据本文实施例的用于与下游处理模块一起使用的示例性软件控制设计。
[0016]图10A和10B示出了根据本文实施例的下游处理模块的两个视图。
具体实施方式
[0017]在权利要求书和/或说明书中，当结合术语“包括(comprising)”使用时，词语“一个”或“一种”的使用可以指“一个/一种(one)”，但是还与“一个或多个/一种或多种(one or more)”、“至少一个/至少一种(at least one)”、以及“一个或多于一个/一种或多于一种(one or more than one)”一致。
[0018]贯穿本申请，术语“约”用于指示值包含用于测定值的方法/装置的固有的误差变化。通常，根据情况，所述术语意在涵盖约或小于1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％可变性。
[0019]权利要求中对术语“或”的使用用于意指“和/或”，除非明确指出仅指代替代方案或替代方案相互排斥，尽管本公开支持仅指代替代方案以及指代“和/或”的定义。
[0020]如本说明书和权利要求所使用的，词语“包括(comprising)”(以及包括的任何形式，如“包括(comprise)”和“包括(comprises)”)、“具有(having)”(以及具有的任何形式，如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包含(including)”(以及包含的任何形式，如“包含(includes)”和“包含(include)”)或“含有(containing)”(以及含有的任何形式，如“含有(contains)”和“含有(contain)”)是包容性的或开放性的并且不排除另外的未列举的元素或方法步骤。可设想到，本说明书中讨论的任何实施例可以相对于本专利技术的任何方法、系统、宿主细胞、表达载体和/或组合物来实施。此外，本专利技术的组合物、系统、细胞和/或核酸可以用于实现如本文所描述的方法中的任何方法。
[0021]在实施例中，本文提供的是一种用于自动化产生病毒载体的方法。本文所描述的自动化方法在封闭、自动化过程中适当地进行。
[0022]如通过本文所描述的方法产生的“病毒载体”是指可以用于在体外、体内或离体将核酸分子引入到细胞中的产物病毒，适当地用于治疗目的或工业目的。可以采集或分离通过本文所描述的各种方法产生的病毒载体并且储存直到最终期望的应用为止。
[0023]图1示出了本文描述的自动化产生过程的流程的框图。
[0024]适当地，本文所描述的方法包含将工程化病毒生产细胞引入到全封闭式细胞工程系统中。如本文所提及的，所述方法中利用的“工程化病毒生产细胞”是适当地包含一种或多种编码允许产生病毒载体的辅助基因或表达系统的核酸分子的细胞。
[0025]如本文所提及的，词语“引入”可以意指将工程化病毒生产细胞添加到多个室之一，或者可以指示在开始所述方法之前在盒内存在工程化病毒生产细胞。
[0026]在实施例中，本文所描述的方法被配置成执行若干轮工程化病毒生产细胞的饲喂、洗涤和监测中的一个或多个。可以以任何顺序执行这些各种活动，并且可以单独执行或与其它活动组合执行。在实施例中，细胞的浓缩包括离心、沉降后去除上清液或过滤。适当地，优化过程进一步包含适当地在自调整过程中调整离心或过滤的参数。
[0027]本文所描述的方法适当地进一步包含用编码所关注基因的载体转导工程化病毒生产细胞以产生经转导的病毒生产细胞。
[0028]如本文所提及的，“转导(transduction)”或“转导(transducing)”意指将包含载体的外源核酸分子引入到细胞中。“经转导的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于自动化产生病毒载体的方法，所述方法包括：(a)将工程化病毒生产细胞引入到全封闭式细胞工程系统中；(b)用编码所关注基因的载体转导所述工程化病毒生产细胞以产生经转导的病毒生产细胞；(c)扩增所述经转导的病毒生产细胞并且在所述经转导的病毒生产细胞内产生所述病毒载体；(d)将经扩增的生产细胞转移到下游处理模块；以及(e)分离所述病毒载体；以及(f)纯化所述病毒载体，其中在封闭且自动化过程中执行(a)到(e)。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述工程化病毒生产细胞是哺乳动物细胞。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是哺乳动物细胞培养物。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述哺乳动物细胞培养物是悬浮培养物。5.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述病毒载体是腺相关病毒(AAV)载体。6.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述病毒载体是慢病毒载体。7.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述病毒载体是逆转录病毒载体。8.根据权利要求1到4中任一项所述的方法，其中所述病毒载体是杆状病毒载体。9.根据权利要求2到8中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。10.根据权利要求2到8中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是人细胞。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述人细胞是人胚胎肾(HEK)细胞。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述人细胞是HEK293T细胞。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述工程化生产细胞是昆虫细胞。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述工程化生产细胞是Sf9细胞。15.根据权利要求1所述的方法，其中所产生的病毒载体的量为至少约10
10
个病毒载体。16.根据权利要求1到15中任一项所述的方法，其中所述封闭且自动化过程包括：(a)用温度传感器、pH传感器、葡萄糖传感器、乳糖传感器、氧气传感器、二氧化碳传感器和光密度传感器中的一个或多个进行监测；以及(b)自动调整温度、pH水平、葡萄糖水平、乳糖水平、氧气水平、二氧化碳水平和光密度中的一个或多个。17.根据权利要求1到16中任一项所述的方法，其中所述转导包括病毒感染、电穿孔、脂质体转染或膜破坏。18.根据权利要求1到17中任一项所述的方法，其中所述分离包括使所述经扩增的生产细胞通过洗脱柱。19.根据权利要求1到18中任一项所述的方法，其中所述纯化包括膜精制。20.根据权利要求1到19中任一项所述的方法，其进一步包括调配所述病毒载体。21.一种用于自动化产生病毒载...

【专利技术属性】
技术研发人员：E，
申请(专利权)人：隆萨销售股份有限公司，
类型：发明
国别省市：