一种猪圆环病毒2型和制造技术

本发明专利技术提供了一种猪圆环病毒2型和

【技术实现步骤摘要】
一种猪圆环病毒2型和/或3型亚单位疫苗及其建立方法和应用


[0001]本专利技术属于亚单位疫苗
，具体涉及一种猪圆环病毒2型和
/
或3型亚单位疫苗及其建立方法和应用
。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒
(Porcine circovirus infection
，
PCV)
感染是由猪圆环病毒引起的一种猪的传染病
。
猪圆环病毒2型
(PCV2)
与猪圆环病毒3型
(PCV3)
是圆环病毒属成员
。
其中
PCV2
在
1974
年由
Tischer
首次于
PK
‑
15(ATCC
[0003]‑
CCL)
细胞中发现，无包膜，二十面体对称结构，直径
12
～
23nm
[1]，
2000
年在中国被报道，它是猪圆环病毒相关疾病
(PCVADs)
的关键病原体
[2]，感染猪的临床症状包括断奶后仔猪多系统耗损综合征
(PMWS)、
猪皮炎和肾病综合征
(PDNS)、
猪呼吸综合征
(PRDC)、
增生性和坏死性肺炎
(PNP)、
繁殖失败和呼吸系统疾病
[3
，
4]。PCV2
基因组包含大约
1767
个核苷酸，
PCV3
基因组大小为
2000bp。
其中，
ORF1
和
ORF2
是显著的开放阅读框架
。ORF1
编码两个与复制相关的蛋白
(Rep
和
Rep
′
)
，
ORF2
编码唯一的结构蛋白，即
Cap
蛋白，该蛋白含有与病毒中和相关的免疫重要表位
[5
，
6]。
因此，
ORF2
靶向基因测序通常被用作
PCV
系统发育
、
流行病学和基因分型的金标准
[7
，
8]。
根据全基因组系统发育树分类和
ORF2
序列，已鉴定出
PCV2
的8个主要基因型：
PCV2a、PCV2b、PCV2c、PCV2d、PCV2e、PCV2f、PCV2g
和
PCV2h
[9]，一种新的基因型
PCV2i
也在美国被定义
[10]。
目前
PCV3
可以分为
PCV3a、PCV3b
和
PCV3c 3
个基因亚型，这与基于编码病毒结构蛋白
Cap
的氨基酸序列特定位置点突变分型结果一致
[9
‑
11]。PCV2
与
PCV3
的基因型多变也给疫苗的制备与选用带来很大的挑战性
。
与此同时，构建稳定的表达系统，根据主要流行的基因型进行亚单位疫苗的制备可以有效地避免常规疫苗
(
弱毒疫苗
、
灭活疫苗
)
生产过程中时间长
、
分毒难的短板
。
而且，利用哺乳动物细胞
CHO
真核表达系统或大肠杆菌原核表达系统可以产生免疫原性较强的病毒样蛋白颗粒，诱导动物机体产生较强免疫应答
。
[0004]Fenaux
等将利用细胞连续传代的方法，为弱毒疫苗的研制提供依据，但是弱毒疫苗仍可能存在毒力返强的风险
。
现阶段
PCV2
的疫苗免疫主要以灭活疫苗为主，但又存在灭活不彻底等安全性风险
。PCV3
存在分毒难，亚单位疫苗表达系统难建立的问题，目前未有商品化疫苗
。
然而猪圆环病毒2型与3型流行存在较高的混感率，给养猪业带来巨大的经济损失，急需开发一种防治猪圆环病毒2型与3型的疫苗
。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种表达猪圆环病毒2型或3型免疫抗原的重组表达系统的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将猪圆环病毒2型或3型的
Cap
编码基因克隆至载体中，得到重组载体；将所述重组载体在慢病毒介导下进入哺乳动物细胞中，或者将所述重组载体转化入原核表达载体中
。2.
根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，表达猪圆环病毒2型免疫抗原的重组表达系统的构建方法，将猪圆环病毒2型的
Cap
编码基因克隆至真核转移载体中，得到的重组载体与辅助质粒共同作用下进行慢病毒包装，得到的重组慢病毒转入
CHO
‑
GS
‑
KO
中，得到重组细胞系
CHO
‑
GS
‑
KO
‑
PCV2 Cap。3.
根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述猪圆环病毒2型的
Cap
编码基因的核苷酸序列如
SEQ ID NO:1
所示；所述猪圆环病毒2型的
Cap
编码基因的
5'
端还连接有上游酶切识别序列和信号肽
SA
序列，
3'
端连接有下游酶切识别序列和6×
His
标签序列
。4.
根据权利要求2或3所述构建方法，其特征在于，所述真核转移载体为
pTRIP
‑
MCS
‑3×
Flag
‑
IRES
‑
GS
；在所述真核转移载体中，猪圆环病毒2型的
Cap
编码基因的多克隆位点为
BamHI
和
Mlu I。5.
根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，表达猪圆环病毒3型免疫抗原的重组表达系统的构建方法，将猪圆环病毒3型的

【专利技术属性】
技术研发人员：李祥敏，焦秋林，钱平，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：