一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法技术

本发明专利技术公开了一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法，包括如下步骤：（1）采用无菌植绒拭子刮拭牙齿，然后用无菌生理盐水涑口；（2）收集涑口后的生理盐水并将刮拭牙齿后的植绒拭子投入进行振荡；（3）将步骤（2）处理后的液体用

【技术实现步骤摘要】
一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法


[0001]本专利技术涉及医学检验领域，特别是涉及用于检测幽门螺杆菌核酸检测的口腔样本的前处理方法
。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌（
Helicobacter pylori
，
HP
）作为一种消化道感染病原菌，被广为认识
。HP
在全世界的平均感染率超过
50%
，我国感染率达
56%。
随着经济水平的发展和全面健康意识的提升，近年来
HP
感染的筛查和治疗也在逐步的增加
。
在众多
HP
感染的检测方法中，口腔样本核酸检测，作为一种新型的检测方法，受到感染者和检测者的青睐（
1.
朱艳平
,
何勇
,
邢瑞林
,
等
.
口腔中幽门螺杆菌
PCR
检测方法的建立
[J].
基因组学与应用生物学
,2019,38(01):220
‑
225.2. 彭毓
,
姚小武
,
陈仕生
,
等
.
实时荧光定量
PCR
法检测口腔鳞状细胞癌组织和癌旁组织中幽门螺杆菌核酸
[J].
中华口腔医学研究杂志
(
电子版
),2018,12(02):96
‑
100.
），这种方法将口腔样本采集的便捷性和核酸扩增的高灵敏度
、
高特异性结合起来，能够快速的给出
HP
感染和耐药的信息
。
[0003]口腔作为幽门螺杆菌感染的必经途径，存在
HP 的寄生，研究显示口腔中的
HP
与胃部中的
HP
具有较强的一致性（赵宇阳
,
李慧
,
张艳
.
胃及口腔幽门螺杆菌感染与慢性胃炎的相关性分析
[J].
中国实验诊断学
,2018,22(03):507
‑
508.
），因此口腔标本作为
HP
检测对象，具备较强的可行性
。
然而，在实际工作中，其检测的阳性率与
13
C/
14
C
尿素呼气试验一致性不够高，这其中主要的原因是未能有效富集口腔中的幽门螺杆菌样本
。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题为：提供一种用于口腔幽门螺杆菌核酸检测的样本富集方法
。
该方法能够有效收集口腔中的
HP
菌体，提高核酸提取的效率，进一步提高
HP
核酸检测扩增的灵敏度
。
[0005]本专利技术的技术方案为：一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法，包括如下步骤：（1）采用无菌植绒拭子刮拭牙齿，然后用无菌生理盐水涑口；（2）收集涑口后的生理盐水并将刮拭牙齿后的植绒拭子投入进行振荡；（3）将步骤（2）处理后的液体用
0.22~0.45
μ
m
无菌滤膜过滤；（4）将步骤（3）过滤后的滤膜用无菌生理盐水振荡洗涤，离心，弃滤膜；（5）将步骤（4）处理后的液体在
12000rpm
以上进一步离心，弃上清，沉淀用于下游核酸提取
。
[0006]进一步地，步骤（1）中，所述无菌生理盐水涑口的用量为
50ml。
[0007]进一步地，步骤（2）中，振荡时间为
1min。
[0008]进一步地，步骤（3）中，滤膜孔径为
0.22
μ
m。
[0009]进一步地，步骤（4）中，无菌生理盐水的用量为
1ml
，振荡时间
1min。
[0010]进一步地，步骤（5）中，所述离心为
13200rpm
离心
5min。
[0011]进一步地，步骤（1）中，所述刮拭牙齿的无菌植绒拭子用量为两支
。
[0012]本专利技术中，采用无菌植绒拭子刮拭牙齿，以达到从牙菌斑中富集
HP
的目的
。
由于幽门螺杆菌在口腔中多数附着于牙菌斑上，因此普通的棉拭子擦拭很难将牙菌斑上的
HP
取下来
。
植绒拭子兼具柔韧性和释放性，在样本采集和释放中具备优良的性能
。
[0013]在无菌植绒拭子擦拭的基础上，采用无菌生理盐水漱口的方式收集口腔中幽门螺杆菌，生理盐水可以将牙齿以外部分
HP
进行很好的富集
。
[0014]最后采用无菌滤膜过滤的形式浓缩富集采集到的样本，提高下游核酸提取的浓度，从而提高核酸检测的灵敏度
。
在实际使用过程中，需要配备真空抽滤装置，对收集到的液体进行过滤
。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术的富集方法能够有效收集口腔中的
HP
菌体，提高核酸提取的效率，进一步提高
HP
核酸检测扩增的灵敏度
。
附图说明
[0016]图1是实施实例1本专利技术方法处理后的口腔样本中幽门螺杆菌的扩增效果对比
。
具体实施方式
[0017]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法
。
下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为从商业渠道购买得到的
。
[0018]实施例
1 本专利技术方法与传统采集方法对比选择9例
C
13
/C
14
尿素呼气试验阳性的患者，分别采用传统拭子直接采样方式（以咽拭子擦拭牙齿表面后直接进行核酸提取），和本专利技术方法的方式进行口腔标本采集，然后采用
QIAamp DNA Mini Kit
（
51306
）试剂盒进行核酸提取，进行核酸浓度和纯度测试对比
。
同时对所提取到的核酸进行幽门螺杆菌基因扩增检测，对比检测结果
。
[0019]本专利技术方法的方式进行口腔标本采集具体步骤为：
1、
在
50ml
螺口管中准备
50ml
无菌生理盐水，准备两支无菌植绒拭子（长度
15cm
，断点折痕处为
2.5~3.0cm
），无菌过滤膜（
0.22
μ
m
）及过滤装置
。
[0020]2、
将无菌植绒拭子在生理盐水中润湿，然后在上下牙齿上刮拭，施加一定的力度
。
[0021]3、
用准备好的
50ml
无菌生理盐水反复漱口
1min
，并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种口腔样本中幽门螺杆菌的富集方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）采用无菌植绒拭子刮拭牙齿，然后用无菌生理盐水涑口；（2）收集涑口后的生理盐水并将刮拭牙齿后的植绒拭子投入进行振荡；（3）将步骤（2）处理后的液体用
0.22~0.45
μ
m
无菌滤膜过滤；（4）将步骤（3）过滤后的滤膜用无菌生理盐水振荡洗涤，离心，弃滤膜；（5）将步骤（4）处理后的液体在
12000rpm
以上进一步离心，弃上清，沉淀用于下游核酸提取
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述无菌生理盐水涑口的用量为
50ml。3.
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘国栋，王琦，王南苗，
申请(专利权)人：苏州长柏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：