离体生物组织样本的血管染色方法技术

本发明专利技术提供一种离体生物组织样本的血管染色方法

【技术实现步骤摘要】
离体生物组织样本的血管染色方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及离体生物组织样本染色方法
。

技术介绍

[0002]目前已有的静脉注射或者心脏灌流等血管标记方法只能针对非人类活体组织，而对于人类病理组织和离体非人类生物组织，通常是将离体组织进行切片，然后切片进行逐个染色，此类方法操作复杂，耗时较长，难以快速获取数据，并且切片层与层之间难以配准，不可避免地造成数据缺失，无法得到厚组织完整血管染色结果
。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供离体生物组织样本的血管染色方法
。
[0004]为了实现本专利技术目的，本专利技术提供一种离体生物组织样本染色方法，包括以下步骤：
[0005](1)
在超声波水浴设备中，采用水溶性有机试剂对整块离体生物组织样本
(
样本大小
≤8
㎝
3)
进行梯度脱水；
[0006](2)
在水浴设备中，采用脂溶性有机试剂对脱水后的样本进行去脂；
[0007](3)
在超声波水浴设备中，采用水溶性有机试剂对去脂后的样本进行梯度富水；
[0008](4)
在超声波水浴设备中，采用染料试剂对富水后的样本进行染色，然后用1×
PBS
溶液漂洗，完成染色
。
[0009]进一步地，步骤
(1)
和
(3)
所述水溶性有机试剂可选自甲醇
、r/>乙醇
、
乙二醇
、
丙酮
、
异丙醇
、
叔丁醇
、
四氢呋喃等中的一种或多种，优选乙醇
。
[0010]进一步地，步骤
(2)
所述脂溶性有机试剂可选自丙三醇
、
二甲苯
、
二氯甲烷
、
三氯甲烷
、
正己烷
、
乙醚等中的一种或多种，优选二氯甲烷
。
[0011]进一步地，步骤
(4)
所述染料试剂可选自
FITC、
凝集素或
CD31
抗体等，优选质量百分比为
0.00001
％
‑
0.5
％的
FITC。
[0012]若未特别指明，本专利技术中使用的试剂均为分析纯
。
[0013]进一步地，步骤
(1)
梯度脱水的条件为：超声波的频率为
20kHz
‑
100kHz
，超声功率
10
‑
1000W
，温度为
30℃
‑
75℃。
[0014]脱水使用的乙醇梯度，乙醇是从低浓度到高浓度，最后到无水乙醇
。
[0015]进一步地，步骤
(2)
去脂的条件为：水浴温度为
30℃
‑
45℃。
[0016]去脂使用的二氯甲烷为分析纯
。
[0017]进一步地，步骤
(3)
梯度富水的条件为：超声波的频率为
20kHz
‑
100kHz
，超声功率
10
‑
1000W
，温度为
30℃
‑
75℃。
[0018]富水使用的乙醇梯度，乙醇是从高浓度到低浓度，最后到蒸馏水
。
[0019]进一步地，步骤
(4)
染色的条件为：超声波的频率为
20kHz
‑
100kHz
，超声功率
10
‑
1000W
，温度为
0℃
‑
75℃。
[0020]FITC
血管染色在温度
30℃
‑
75℃
下进行，凝集素
、CD31
抗体染色在温度
4℃
下进行
。
以小鼠鼠脑为例，总共超声
12
‑
24h。
[0021]本专利技术中，染色后的样本经包埋处理后，于显微镜成像或
TDI
‑
fMOST
成像
。
[0022]优选地，所述离体生物组织样本来自人类
。
[0023]所述离体生物组织样本包括固定后的病理标本
、
冷冻后的组织等
。
[0024]在本专利技术的一个具体实施方式中，离体生物组织样本染色方法包括以下步骤：
[0025]1)
在超声波水浴设备中，采用乙醇对离体生物组织样本
(
样本大小
≤8
㎝
3)
进行梯度脱水；具体处理条件为：超声波的频率为
20kHz
‑
100kHz
，超声功率
10
‑
1000W
，温度为
30℃
‑
75℃。
[0026]2)
在水浴设备
(
水浴温度
30℃
‑
45℃)
中，采用二氯甲烷
(
分析纯
)
对脱水后的样本进行去脂
。
[0027]3)
在超声波水浴设备中，采用乙醇对去脂后的样本进行梯度富水；具体处理条件为：超声波的频率为
20kHz
‑
100kHz
，超声功率
10
‑
1000W
，温度为
30℃
‑
75℃。
[0028]4)
在超声波水浴设备中，采用质量百分比为
0.00001
％
‑
0.5
％的
FITC
对富水后的样本进行染色；具体处理条件为：超声波的频率为
20kHz
‑
100kHz
，超声功率
10
‑
1000W
，温度为
0℃
‑
75℃。
最后用1×
PBS
溶液漂洗，完成染色
。
[0029]5)
包埋后成像
。
[0030]借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：
[0031](
一
)
本专利技术基于超声波水浴设备，利用特定波长的超声波和水浴技术，加快溶液中各种试剂分子渗透速度，同时利用化学试剂增加组织通透性；然后使用血管染料进行离体组织染色，能够完成各种离体组织血管标记
。
[0032](
二
)
本方法对于各类离体组织均有稳定标准的制备方案，可保证染色组织的染本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
离体生物组织样本的血管染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)
在超声波水浴设备中，采用水溶性有机试剂对整块离体生物组织样本进行梯度脱水；
(2)
在水浴设备中，采用脂溶性有机试剂对脱水后的样本进行去脂；
(3)
在超声波水浴设备中，采用水溶性有机试剂对去脂后的样本进行梯度富水；
(4)
在超声波水浴设备中，采用染料试剂对富水后的样本进行染色，然后用1×
PBS
溶液漂洗，完成染色
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤
(1)
和
(3)
所述水溶性有机试剂选自甲醇
、
乙醇
、
乙二醇
、
丙酮
、
异丙醇
、
叔丁醇
、
四氢呋喃中的一种或多种，优选乙醇
。3.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤
(2)
所述脂溶性有机试剂选自丙三醇
、
二甲苯
、
二氯甲烷
、
三氯甲烷
、
正己烷
、
乙醚中的一种或多种，优选二氯甲烷
。4.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤
(4)
所述染料试剂选自
FITC、
凝集素或
CD31
抗体，优选质量百分比为
0.00001
％
‑
0....

【专利技术属性】
技术研发人员：郑廷，毛珂，陈谦，
申请(专利权)人：武汉沃亿生物有限公司，
类型：发明
国别省市：