一种基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法技术

本发明专利技术公开了一种基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，包括：将鼠脑组织依次进行脱水、漂白和富水、细胞膜通透处理和封闭处理；使用稀释的一抗GFAP和二抗Alexa对封闭处理后的鼠脑组织进行孵育；将经两次抗体孵育好的鼠脑组织，进行洗涤；将洗涤后的鼠脑组织置于四氢呋喃溶液中进行脱水，然后使用二氯甲烷脱脂；将脱水脱脂后的鼠脑组织采用二卞醚匹配，而后使用树脂将鼠脑组织包埋；将树脂包埋样本置于缓冲液水槽中，采用TDI～fMOST相机进行图像采集。本发明专利技术使用iDISCO透明化抗体染色的方式实现生物组织大样本的整体染色。织大样本的整体染色。织大样本的整体染色。

【技术实现步骤摘要】
一种基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法


[0001]本专利技术涉及生物组织样本整体染色、三维成像
，具体涉及一种基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法。

技术介绍

[0002]免疫标记是生物研究和医学诊断的许多领域的核心技术，使之有可能揭示出生物样品的形态和分子组成。然而，由于难以标记和观察完整标本中的深层结构，其应用大多局限于薄层制剂或小样本。三维成像在分析二维平面内不包含的复杂结构时显示出极大地优势，如轴突束或血管。此外，与组织切片相比，体积数据集的分析更加灵活，可用于定量研究细胞数或相对距离的测量。
[0003]一个世纪以来，人们已经认识到，生物标本可以通过减少组织内部的折射率差异来降低散射，从而实现深层结构的可视化。一种简单、快速、廉价的方法—iDISCO，允许对从围产期小鼠胚胎到成人器官(如大脑或肾脏)的大量清样进行全装免疫标记和体积成像，与内源性抗原和转基因报告物(如GFP)的28种抗体的兼容性证明了这一点。当应用于退行性神经元时，尽管所有神经节的总数量被严格控制，iDISCO揭示了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于，包括：将鼠脑组织置于不同体积分数的脱水溶液中，进行脱水；将脱水后的鼠脑组织浸入H2O2/DMSO/甲醇溶液中混悬，进行漂白；将漂白后的鼠脑组织置于不同体积分数的甲醇溶液中，进行富水；将富水后的鼠脑组织，进行细胞膜通透处理；将细胞膜通透处理后的鼠脑组织，进行封闭处理；使用稀释的一抗GFAP和二抗Alexa488，对封闭处理后的鼠脑组织进行孵育；将经两次抗体孵育好的鼠脑组织，进行洗涤；将洗涤后的鼠脑组织置于脱水溶液中进行脱水，然后使用脱脂溶液脱脂；将脱水脱脂后的鼠脑组织采用二卞醚匹配，而后使用树脂将鼠脑组织包埋；将树脂包埋样本置于缓冲液水槽中，采用TDI～fMOST相机进行图像采集。2.如权利要求1所述的基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于，在对鼠脑组织进行脱水之前，还包括：将鼠脑组织置于多聚甲醛溶液中固定；其中，多聚甲醛溶液的质量分数为3～5％，固定时间为2～48h。3.如权利要求1所述的基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于，将鼠脑组织依次置于30～60％，60～90％，90～100％的脱水溶液中脱水，脱水时间为1～3h；其中，脱水溶液包括但不限于甲醇、乙醇、四氢呋喃、丙酮、正丁醇、叔丁醇和环己酮中的一种或多种。4.如权利要求1所述的基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于，H2O2的浓度为30％，H2O2/DMSO/甲醇溶液的体积分数为1:(1～2):(1～4)，处理温度为1～10℃，处理时间为2～24h。5.如权利要求1所述的基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于，将鼠脑组织依次置于90～100％，60～90％，30～60％的甲醇溶液中富水，富水时间为1～3h。6.如权利要求1所述的基于iDISCO透明化抗体染色生物组织样本三维成像方法，其特征在于，使用PBS/TritonX
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100/DMSO/甘氨酸溶液对鼠脑组织进行细胞膜通透处理；其中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑廷，陈谦，李游，程祥，
申请(专利权)人：武汉沃亿生物有限公司，
类型：发明
国别省市：