一种用于检测制造技术

本发明专利技术提供一种用于检测

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测DTNBP1基因的FISH探针及其应用


[0001]本专利技术涉及基因工程领域，具体而言，涉及一种用于检测
DTNBP1
基因的
FISH
探针及其应用
。

技术介绍

[0002]胰腺癌
(Pancreat ic carcinoma)
为消化系统较常见的恶性肿瘤，其特点为病程短
、
进展快
、
病死率高，中位生存期仅为6个月
。
因胰腺位于腹膜后，位置深，早期又无明显症状，均易被忽略而延误诊断，得不到及时有效的治疗
。
胰腺癌的主要临床表现为进行性黄疸
、
食欲减退
、
消瘦体重减轻
、
上腹痛或向背部放射
、
晚期则可扪及腹部包块
、
腹水
、
恶病质及远处转移等
。
随着分子生物学技术的发展，胰腺癌的诊断从传统的表型诊断上升至基因诊断，与多种抑癌基因
、
原癌基因
、DNA
错配修复基因等密切相关
。
[0003]Dysbindin
蛋白由位于人类基因组6号染色体
(6p22.3)
的
DTNBP1
基因所编码，其全称为
dystrobrevin
‑
binding protein(dysbindin
或
DTNBP1)
，它最初是由/>Benson
教授在研究杜氏肌肉营养不良症时通过酵母双杂交实验发现的细胞骨架蛋白
dystrobrevin
的结合蛋白
。DTNBP1
基因的序列高度保守，在脊椎动物内序列相对保守，提示其在进化中的相对稳定
。
新近的研究发现
dysbindin
在口腔鳞癌组织呈高表达状态，
NCBI
的生物信息学预测
(AceView)
也提示
dysbindin
在多种肿瘤组织内为高表达水平，暗示其在恶性肿瘤组织的发生发展过程中可能扮演重要的角色
。
越来越多的证据表明，
DTNBP1
在癌症预后中发挥了功能性的作用，
DTNBP1
在脑肿瘤
、
肝癌癌症中发挥作用
。
我们的前期研究发现
DTNBP1
在胰腺癌组织和血清中表达显著高于癌旁组织和正常血清，其对于胰腺癌的阳性诊断率高于目前常用的
CA
‑
199
；相关分子机制研究表明
DTNBP1
可通过调节多个分子信号通路促进细胞周期和肿瘤转移
。
因此，
DTNBP1
有望成为一个潜在的分子标志物用于胰腺癌的监测和检测
。
[0004]目前检测
DTNBP1
基因的方法包括
:
免疫组织化学
(IHC)
法
、
荧光原位杂交
(FISH)
法
、
酶联免疫吸附试验
(ELISA)。
临床检测中最实用的方法是
IHC
和
FISH。IHC
成本低
、
操作简单，但易受到组织处理方法
、
固定时间等影响，且检测敏感性和特异性存在较大的变异
。FISH
基于基因水平的表达检测具有高度的敏感性和特异性，其结果判定更具客观性，重复性和可靠性强
。
因此，基于
DTNBP1
基因水平的检测试剂盒研发可提高胰腺癌等临床检测效率
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于检测
DTNBP1
基因的
FISH
探针及其应用，解决背景所提出的至少一个技术问题
。
[0006]第一方面，本专利技术提供一种用于检测
DTNBP1
基因的
FISH
探针，所述探针的核酸序列分别如
SEQ ID NO
：
1、SEQ ID NO
：
2、SEQ ID NO
：
3、SEQ ID NO
：
4、SEQ ID NO
：
5、SEQ ID NO
：
6、SEQ ID NO
：
7、SEQ ID NO
：8所示
。
[0007]第二方面，提供一种检测
DTNBP1
的试剂在制备胰腺癌诊断和
/
或预后的试剂和
/
或
试剂盒中的应用
。
[0008]第三方面，所述的用于检测
DTNBP1
基因的
FISH
探针在制备胰腺癌诊断和
/
预后的试剂和
/
试剂盒中的应用
。
[0009]第四方面，提供一种胰腺癌诊断和
/
或预后的试剂盒，包括针对
DTNBP1
基因的预扩增探针：捕获探针连接标志基因
mRNA
与预扩增探针，每条捕获探针的碱基序列从5’
端到3’
端依次为：可以与
DTNBP1
基因杂交探针的3’
端结合的
18bp
碱基，可以与扩增探针结合的4个重复碱基序列；
[0010]所述预扩增探针的核酸序列如
SEQ ID NO
：9所示
。
[0011]优选的，包括针对
DTNBP1
基因的扩增探针：每条扩增探针的碱基序列从5’
端到3’
端依次为：能与预扩增探针重复序列互补配对的序列
、
显色探针结合的4个重复碱基序列；
[0012]所述扩增探针的核酸序列如
SEQ ID NO
：
10
所示
。
[0013]优选的，包括针对
DTNBP1
基因的显色探针：所述显色探针5’
端修饰有荧光基团，并具有与扩增探针重复序列互补配对的结合序列；
[0014]所述显色探针的核酸序列如
SEQ ID NO
：
11
所示
。
[0015]技术效果：相对于现有技术，本专利技术具有安全
、
快速
、
检测信号强等特点，本专利技术探针分子量小，更容易进入细胞，可检测胰腺癌患者组织和细胞中低水平表达的
DTNBP1
，特异性高
、
敏感性强，有助于胰腺癌的早期筛查和诊断
。
附图说明
[0016]为了更清楚地说本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于检测
DTNBP1
基因的
FISH
探针，其特征在于，所述探针的核酸序列分别如
SEQ ID NO
：
1、SEQ ID NO
：
2、SEQ ID NO
：
3、SEQ ID NO
：
4、SEQ ID NO
：
5、SEQ ID NO
：
6、SEQ ID NO
：
7、SEQ ID NO
：8所示
。2.
检测
DTNBP1
的试剂在制备胰腺癌诊断和
/
预后的试剂和
/
试剂盒中的应用
。3.
权利要求1所述的用于检测
DTNBP1
基因的
FISH
探针在制备胰腺癌诊断和
/
或预后的试剂和
/
或试剂盒中的应用
。4.
一种胰腺癌诊断和
/
或预后的试剂盒，其特征在于，包括针对
DTNBP1
基因的预扩增探针：捕获探针连接标志基因
mRN...

【专利技术属性】
技术研发人员：方诚，沈锋，李雯慧，尉文新，陈勇，尚林富，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：