一种羟氯喹啉靶向纳米递药系统的制备方法及应用技术方案

本发明专利技术公开了一种羟氯喹啉靶向纳米递药系统的制备方法及应用，涉及负载自噬抑制剂羟氯喹啉及视黄醇靶向修饰的纳米递药系统的构建及制备，可用于肝纤维化的主动靶向治疗

【技术实现步骤摘要】
一种羟氯喹啉靶向纳米递药系统的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及负载自噬抑制剂羟氯喹啉及视黄醇靶向修饰的纳米递药系统的制备方法，该类纳米递药系统可用于肝纤维化的治疗
。

技术介绍

[0002]羟氯喹啉是
FDA
批准的治疗疟疾
、
类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮的药物
。
羟氯喹啉以自噬调节作用治疗晚期
/
复发非小细胞肺癌和乳腺癌等疾病已经进入临床
II
期研究，作为自噬抑制剂治疗房颤，也已进入
IV
期临床试验
。
近年来的研究发现，在人类和其他哺乳动物中，羟氯喹啉能提高溶酶体的
pH
值，使溶酶体中的酸性水解酶活性丧失，从而导致自噬体不能被溶酶体顺利降解，从而在自噬晚期阻断自噬过程的发生
。
目前羟氯喹啉作为常用的自噬抑制剂被用于生物学和医学研究
。
[0003]肝纤维化以肝星状细胞
(HSCs)
的活化为主要的驱动因素，伴随细胞外基质
(ECM)
的沉积为主要特征
。
在
HSCs
活化的过程中，自噬通过两方面诱导
HSCs
的活化
。
一方面自噬发生后代谢
HSCs
中贮存的视黄醇，转变为游离的脂肪酸，为
HSCs
活化和分化提供所需的能量，另一方面，自噬过程中
P62
的丢失影响了维生素r/>D
与类视黄醇
X
受体的相互作用，促使
HSCs
由静息态
(qHSCs)
转变为活化态
。
抑制活化肝星状细胞的自噬可以阻止
HSCs
活化，有望发挥重要的抗肝纤维化作用
。
因此，应用羟氯喹啉可以抑制
HSCs
自噬的发生，抑制
HSCs
的活化及纤维化相关标志蛋白
α
‑
平滑肌肌动蛋白
(
α
‑
SMA)
和
I
型胶原蛋白
(collagen I)
的表达，从而改善肝纤维化的发展，减缓肝纤维化的进程
。
[0004]但已有研究显示，羟氯喹啉是弱碱，溶解度差，游离药物体内使用时由于其带正电荷，细胞膜跨膜转运能力差，而且影响
HSCs
细胞膜的稳定性，改变信号通路和转录活性，从而导致刺激因子的产生，引起如视网膜病变
、
胃肠道不适
、
过敏反应
、
血管性水肿
、
支气管痉挛和神经系统异常等不良反应，也制约了它在临床中的广泛应用
。
因此，对羟氯喹啉进行制剂学的改造，通过递药系统负载羟氯喹啉，降低毒副作用，有效发挥其抑制
HSCs
的自噬
、
改善肝纤维化的治疗作用具有重要的临床意义和实用价值
。
[0005]但我们在文献调研中也发现，肝脏部位不同类型肝脏细胞
(
肝星状细胞
、
肝细胞
、
巨噬细胞和肝窦内皮细胞等
)
的自噬抑制对肝纤维化的作用是截然不同的
[Li
‑
Shuang Hou(
侯丽爽
),et al.Pharmacol Ther,2022
；
234:108117]。
与肝星状细胞
(HSCs)
的自噬促进其激活
、
导致肝纤维化的发生具有截然相反的作用，肝细胞的自噬减少其坏死
、
巨噬细胞自噬减少炎症因子的分泌
、
肝窦内皮细胞的自噬维持其稳定性，因此，肝细胞
、
巨噬细胞和肝窦内皮细胞的自噬会阻止肝纤维化的发生，抑制其自噬反而不利于肝纤维化的治疗，可能加重肝纤维化进程
。
因此考虑到自噬调节在肝纤维化中的细胞类型特异性，在利用羟氯喹啉抑制肝星状细胞
(HSCs)
自噬减少
HSCs
的活化，防止肝纤维化发生，实现肝纤维化逆转时，能特异性的将药物递送到肝星状细胞
(HSCs)
发挥自噬对肝纤维化的有利调控作用，构建具有
HSCs
靶向性递送的羟氯喹啉纳米递药系统具有重要意义
。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是利用视黄醇修饰纳米递药系统并负载羟氯喹啉靶向
HSCs
抑制其自噬，从而减少纤维化相关标志蛋白
(
α
‑
SMA)
和细胞外基质主要成分
I
型胶原
(Collagen I)
的沉积，阻断
ECM
产生的机械力促进
HSCs
的活化，制备出治疗肝纤维化的靶向纳米递药系统
。
该类递药系统利用视黄醇对
HSCs
具有特异靶向识别性可实现自噬抑制剂药物羟氯喹啉的
HSCs
靶向递送，减少小分子药物羟氯喹啉在机体其他部位的蓄积和肝脏其他细胞的摄取，从而更好的实现
HSCs
自噬抑制的特异性与靶向性，为抗肝纤维化药物的研究提供新的策略与思路
。
[0007]一种羟氯喹啉靶向纳米递药系统的制备方法，具体包括以下步骤：
[0008](1)
将一定投料比的氢化卵磷脂
、
胆固醇和视黄醇
‑
PEG
2K
‑
胆固醇溶解在装有二氯甲烷的圆底烧瓶中，在
37℃
下用旋转蒸发仪在一定转速下减压除去有机溶剂
。
在形成薄膜后，放入真空干燥箱内，室温下真空干燥一定时间以彻底除去二氯甲烷
。
[0009](2)
加入
0.3M
的柠檬酸缓冲液
(pH 3.5)1mL
后，放入特定温度水浴中振荡一定时间
。
用超声细胞粉碎仪在特定温度下再超声一定时间，随后加入适量的硫酸羟氯喹啉并使其溶解在上述溶液中
。
用
0.2M
的
Na2HPO4溶液调节使其
pH
为
7.4。
在特定温度水浴中避光孵育一定时间后，所得溶液采用
0.22
μ
m
孔径的尼龙膜过滤器过滤，得到羟氯喹啉靶向纳米递药系统
。
[0010]在具体制备时，在步骤
(1)
中，氢化卵磷脂
、
胆固醇和视黄醇
‑
PEG
2k
‑
胆固醇的投料质量比为
1:3:1
～
30:3:1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种羟氯喹啉靶向纳米递药系统的制备方法，其特征在于，选用对肝星状细胞
(HSCs)
具有特异靶向性的视黄醇作为修饰基团得到靶向纳米递送系统并包裹自噬抑制剂羟氯喹啉，得到具有对
HSCs
主动靶向作用的纳米递药系统，其中羟氯喹啉的负载量为
23.66
％；制备方法具体包括以下步骤：
(1)
将一定投料比的氢化卵磷脂
、
胆固醇和视黄醇
‑
PEG
2K
‑
胆固醇溶解在装有二氯甲烷的圆底烧瓶中，在
37℃
下用旋转蒸发仪在一定转速下减压除去有机溶剂，在形成薄膜后，放入真空干燥箱内，室温下真空干燥一定时间以彻底除去二氯甲烷；
(2)
加入
0.3M
的
pH 3.5
柠檬酸缓冲液后，放入特定温度水浴中振荡一定时间，用超声细胞粉碎仪在特定温度下再超声一定时间，随后加入适量的硫酸羟氯喹啉并使其溶解在上述溶液中，用
0.2M
的
Na2HPO4溶液调节使其
pH
为
7.4
，在特定温度水浴中避光孵育一定时间后，所得溶液采用
0.22
μ
m
孔径的尼龙膜过滤器过滤，得到羟氯喹啉靶向纳米递药系统
。2.
根据权利要求1所述的一种羟氯喹啉靶向纳米递药系统的制备方法，其特征在于，在步骤
(1)
中...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯丽爽，张邦乐，张耀文，何炜，周四元，邢婕华，张堂睿，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：