一种细胞因子人源化的非人动物的制备方法及其应用技术

本申请涉及一种人源化的非人动物的制备方法及其应用

【技术实现步骤摘要】
一种细胞因子人源化的非人动物的制备方法及其应用


[0001]本申请涉及生物医学领域，具体涉及一种细胞因子人源化的非人动物的制备方法及其应用
。

技术介绍

[0002]新药研发需要经历药物靶点选择
、
候选药物筛选
、
临床前体内有效性和安全性评估
、
临床试验等一系列过程
。
但是由于存在种属差异，模式动物还是不能完全模拟人的生理和病理情况
。
比如动物模型的免疫系统与人体免疫系统仍有一定差异，因此在动物试验中观察到的治疗效果不一定能反映在患者中的情况
。
大
、
小鼠与人类的基因组具有高度同源性，是最常用的小型模式动物
。
但是，人和鼠的免疫系统存在较大差异，将人的免疫细胞如
PBMC
或者
HSC
移植给免疫缺陷动物，构建免疫系统人源化的动物模型可以使得免疫相关的致病机理和药效实验更具有可信性
。
目前已有裸鼠
、NOD
‑
scid
小鼠
、NOG、NSG、NCG
等多种免疫缺陷程度不同的小鼠来用于构建免疫系统人源化模型
。
本申请的专利技术人借助自身模型构建与筛选平台，得到重度免疫缺陷小鼠
NCG。
该小鼠的
T、B、NK
均缺陷，是理想的人源免疫系统重建的小鼠模型
。
然而，在重建人类免疫系统时，由于种属间的差异，小鼠的细胞因子往往不能很好地作用于人的造血细胞
。
人源免疫系统重建后，主要占比的是
T
细胞和
B
细胞，而人源的髓系细胞及
NK
细胞发育有限，而且
T
细胞
、B
细胞的成熟度程度不高
。
因此，补充人源细胞因子，是优化免疫系统重建的重要方法
。
[0003]本申请急需一种动物模型，能够实现细胞因子的人源化，以促进髓系细胞的扩增，并提高人源免疫系统重建的效果
。

技术实现思路

[0004]本申请的专利技术人发现，现有的免疫缺陷小鼠存在人源的髓系细胞发育有限
。CSF2、IL
‑3和
SCF
这3个细胞因子都不同程度上参与介导了髓系细胞的发育与分化，且人鼠蛋白的同源性较低
。
本申请的专利技术人发现，通过使所述非人动物表达人
CSF2、IL
‑3和
SCF
这3个细胞因子，获得的
SGM3
人源化小鼠模型可以更好的促进髓系细胞的扩增和
/
或提高人类来源细胞的植入效率
。
另外，本申请的专利技术人还提出了一种本申请的人源化的非人动物用于重建人免疫系统的应用方法
。
[0005]本申请示例性的方法包含，利用基因编辑的手段将编码人类集落刺激因子
2(CSF2)、
白细胞介素
‑
3(IL
‑
3)
以及干细胞因子
(SCF)
的基因
CSF2、IL
‑3和
KITLG
导入到
NCG
小鼠的
Rosa26
位点，获得
NCG
‑
M
人源化小鼠模型
。
该模型可以更好的促进髓系细胞的扩增，并提高人类来源细胞的植入效率，为人源免疫系统重建
、
研究人源免疫细胞发育及相关药物筛选，如肿瘤移植
、
免疫学
、
炎症等领域，提供了有利的动物模型
。
同时，本申请的小鼠可用于抗肿瘤药物评价，特别是与髓系细胞免疫调节响应相关的抗肿瘤药物
。
[0006]本申请提供了一种人源化的非人动物的构建方法，所述方法包含使所述非人动物表达来源于人的细胞因子或其变体
。
[0007]本申请提供了一种多修饰人源化的非人动物的构建方法，所述方法包含使所述非人动物表达来源于人的细胞因子或其变体，以及包含使所述非人动物进行细胞因子或其变体之外的其他基因的修饰
。
[0008]本申请提供了一种人源化的非人动物的细胞
、
组织
、
器官或非人动物，所述细胞
、
组织
、
器官或非人动物表达来源于人的细胞因子或其变体
。
[0009]本申请提供了一种本申请所述的细胞
、
组织
、
器官或非人动物在制备产品中的用途
。
[0010]本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本申请的其它方面和优势
。
下文的详细描述中仅显示和描述了本申请的示例性实施方式
。
如本领域技术人员将认识到的，本申请的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及专利技术的精神和范围
。
相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的
。
附图说明
[0011]本申请所涉及的专利技术的具体特征如所附权利要求书所显示
。
通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及专利技术的特点和优势
。
对附图简要说明书如下：
[0012]图1显示的是
NCG
‑
M
‑
KI
‑
target F0
小鼠5’
端和3’
端鉴定电泳图
。
[0013]图2显示的是
NCG
‑
M
‑
KI
‑
target F1
小鼠5’
端和3’
端鉴定电泳图
。
[0014]图3显示的是
NCG
‑
M
杂合
、
纯合小鼠与
NCG
背景鼠中人源
CSF2、IL
‑3和
SCF
的表达结果
。
[0015]图4显示的是
NCG
‑
M
鼠与
NCG
背景鼠外周血的总体人源化率
。
[0016]图5显示的是
NCG
‑
M
鼠与
NCG
背景鼠外周血的髓系细胞重建比例
。
[0017]图6显示的是
NCG
‑
M
鼠与
NCG
背景鼠外周血的淋巴细胞重建比例
。
[0018]图7显示的是
NCG
‑
M
鼠接种
A549
细胞三个治本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种人源化的非人动物的构建方法，所述方法包含使所述非人动物表达来源于人的细胞因子，所述细胞因子包含粒细胞
‑
巨噬细胞集落刺激因子
(GM
‑
CSF)、
白细胞介素
3(IL
‑
3)
和
/
或干细胞因子
(SCF)。2.
根据权利要求1所述的构建方法，所述方法包含在所述非人动物中引入编码所述的
GM
‑
CSF、IL
‑3和
/
或
SCF
的核苷酸序列
。3.
根据权利要求2所述的构建方法，所述引入包含通过同源重组载体引入所述非人动物
。4.
根据权利要求2所述的构建方法，所述编码
GM
‑
CSF、IL
‑3和
/
或
SCF
的核苷酸序列包含人
GM
‑
CSF、IL
‑3和
/
或
SCF
的蛋白质编码区
(CDS)。5.
根据权利要求2所述的构建方法，所述
GM
‑
CSF、IL
‑3和
/
或
SCF
的核苷酸序列通过自我剪切肽串联连接
。6.
根据权利要求5所述的构建方法，所述自我剪切肽包含
P2A
肽
。7.
根据权利要求1‑6中任一项所述的构建方法，所述方法包含使所述来源于人的细胞因子引入所述非人动物的基因组
。8.
根据权利要求7所述的构建方法，所述方法包含使所述来源于人的细胞因子引入所述非人动物的安全位点，在所述安全位点引入外源性基因基本不影响所述非人动物的其他基因的表达
。9.
根据权利要求8所述的构建方法，所述安全位点包含
Rosa26
位点
。10.
根据权利要求7所述的构建方法，所述方法还包含在所述引入核苷酸序列之前，在所述非人动物引入双链断裂
。11.
根据权利要求
10
所述的构建方法，所述引入双链断裂的方法包含
CRISPR
系统
。12.
根据权利要求
11
所述的构建方法，所述
CRISPR
系统包含
g...

【专利技术属性】
技术研发人员：琚存祥，郭仕英，汪慧怡，范佳露，
申请(专利权)人：江苏集萃药康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：