醛固酮化学发光免疫检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，包括，包括试剂1和试剂2；试剂1包括以下浓度的各组分：0.05M～0.5M的第一缓冲液、0.05mg/mL～0.3mg/mL的磁珠和1μg/mL～6μg/mL的第一抗体，磁珠和第一抗体形成偶联化合物；第一抗体为能与醛固酮特异性结合的抗体或片段；试剂1的pH值为9～10.5；试剂2包括以下浓度的各组分：0.1M～0.5M的第二缓冲液、0.2ug/mL

【技术实现步骤摘要】
醛固酮化学发光免疫检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生化检测
，更具体地，涉及一种醛固酮化学发光免疫检测试剂盒。

技术介绍

[0002]醛固酮是分子量为360.4道尔顿的甾类激素，是肾上腺皮质分泌的主要盐皮质素。醛固酮在代谢中的主要作用是控制钠离子和钾离子，从而调节血容量。醛固酮作用于肾脏、汗腺和唾液腺，减少钠离子的排泄并增加钾离子的排泄。醛固酮也可以促进结肠钠离子储存。在这些组织中，醛固酮与主要存在于肾皮质集合管的盐皮质激素受体结合产生作用。通过一系列复杂的激素反馈回路，使得钠离子和钾离子保持平衡。肾素
‑
血管紧张素系统(RAS)对血容量起着重要的负反馈调节作用。RAS通过一个长反馈回路(包括改变血容量)和一个短反馈回路(通过血管紧张素II直接抑制肾素分泌)起作用。同时起作用的其他反馈回路是对血清钾的控制。这些相互影响的反馈回路共同作用维持醛固酮浓度，在应对外来刺激时可以使血容量、血压和钾离子处于动态平衡。醛固酮作用于肾皮质集合管，增加钠离子的吸收，减少钾离子的吸收。导致了血容量和血压的增加，抑制了肾小球旁器细胞分泌肾素，从而减少了肾素的生成。肾素的减少，血管紧张素I的合成也减少，因此血管紧张素II的水平也就下降了。醛固酮分泌的急性下降，导致醛固酮的合成和分泌减少。醛固酮调节钾离子体内平衡同样也主要通过负反馈调节。钾离子浓度升高，刺激醛固酮的生成(醛固酮降低钾离子的重吸收，使钾离子浓度恢复)。随后血浆钾离子浓度降低，导致肾上腺小球细胞对钾离子的刺激降低，醛固酮的合成和分泌也减少。
>[0003]目前最常用的检测方法是化学发光法，但因醛固酮属于小分子化合物，体积小，缺乏可作双抗夹心法的两个以上的抗体结合位点，因此，物理限制使其在原理上不支持传统的双抗夹心法。
[0004]现有化学发光法常采用竞争法，标记半抗原和抗体的量都是有限的，待测物与标记的半抗原竞争结合少量的固相抗体，充分反应后去除未结合的抗原，最终读取的信号强度与样品中待测物的含量成反比。竞争法低、高浓度信号区分度较差，导致低值区域准确度偏差较大，需重做复管验证。另，竞争法反应过程需要多次孵育，导致时间过长。上述因素致使竞争法在灵敏度、精密度、动力学和检测线性范围等方面均不及双抗夹心，导致临床诊断结果容易偏差，对病情的判断、用药造成困扰。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种基于改进的双抗夹心法的醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，实现了更高的检测灵敏度，并且显著提升了结果的准确度和重复性，极大提升了使用便捷性。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0007]一种醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，包括试剂1和试剂2；
[0008]所述试剂1包括以下浓度的各组分：
[0009]0.05M～0.5M的第一缓冲液、0.05mg/mL～0.3mg/mL的磁珠和1μg/mL～6μg/mL的第一抗体，所述磁珠和所述第一抗体形成偶联化合物；所述第一抗体为能与醛固酮特异性结合的抗体或片段；
[0010]所述试剂1的pH值为9～10.5；
[0011]所述试剂2包括以下浓度的各组分：
[0012]0.1M～0.5M的第二缓冲液、0.2ug/mL
‑
0.8ug/mL的第二抗体、2ng/mL
‑
8ng/mL的化学发光剂，所述第二抗体和所述化学发光剂形成偶联化合物；
[0013]所述第二抗体为抗复合物的抗体，所述复合物为所述醛固酮与所述第一抗体形成的免疫复合物，且所述第二抗体不单独结合所述醛固酮，所述第二抗体也不单独结合所述第一抗体；
[0014]所述试剂2的pH值为6.0～9.5。
[0015]实施本专利技术实施例，将具有如下有益效果：
[0016]本专利技术实施例采用改进的双抗夹心法检测小分子化合物，通过采用抗醛固酮与第一抗体复合物的第二抗体，使得小分子的单结合位的醛固酮能通过复合物与第二抗体相结合，能克服现有双抗夹心法无法应用于检测小分子化合物的技术问题；通过使第二抗体不单独结合醛固酮，也不单独结合第一抗体，提高第二抗体与化学发光剂的偶联化合物与醛固酮与第一抗体的复合物结合的单一性，提高检测结果的准确性。
[0017]本专利技术采用改进的双抗夹心法检测醛固酮，可以通过一步反应完成，检测快速；且信号强度与醛固酮呈线性正相关，低、高浓度信号区分度更佳，低值区域准确度较佳，无需做复管验证，相比现有技术的竞争法，能显著提高醛固酮检测的灵敏度、精密度、动力学和检测线性范围。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]其中：
[0020]图1是采用实施例1的化学发光免疫检测试剂盒进行样本检测得到的拟合曲线。
[0021]图2是采用对比例1的化学发光免疫检测试剂盒进行样本检测得到的拟合曲线。
[0022]图3是采用实施例1的化学发光免疫检测试剂盒进行相关性实验的相关性结果图。
[0023]图4是是采用对比例1的化学发光免疫检测试剂盒进行相关性实验的相关性结果图。
具体实施方式
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他
实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]本专利技术公开了一种醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，包括试剂1和试剂2。
[0026]试剂1包括以下浓度的各组分：
[0027]0.05M～0.5M的第一缓冲液、0.05mg/mL～0.3mg/mL的磁珠和1μg/mL～6μg/mL的第一抗体，磁珠和第一抗体形成偶联化合物；第一抗体为能与醛固酮特异性结合的抗体或片段；试剂1的pH值为9～10.5。
[0028]试剂2包括以下浓度的各组分：
[0029]0.1M～0.5M的第二缓冲液、0.2ug/mL
‑
0.8ug/mL的第二抗体、2ng/mL
‑
8ng/mL的化学发光剂，第二抗体和化学发光剂形成偶联化合物；第二抗体为抗复合物的抗体，复合物为醛固酮与第一抗体形成的免疫复合物，且第二抗体不单独结合醛固酮，第二抗体也不单独结合第一抗体；试剂2的pH值为6.0～9.5。
[0030]检测时，将被测样本与试剂1、试剂2混合，试剂1中的第一抗体结合被测样本中的醛固酮，形成醛固酮与第一抗体形成的免疫复合物，然后，试剂2中的第二抗体与化学发光剂的偶联化合物中的第二抗体与醛固酮与第一抗体形成的免疫复合物特异性结合，形本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括，包括试剂1和试剂2；所述试剂1包括以下浓度的各组分：0.05M～0.5M的第一缓冲液、0.05mg/mL～0.3mg/mL的磁珠和1μg/mL～6μg/mL的第一抗体，所述磁珠和所述第一抗体形成偶联化合物；所述第一抗体为能与醛固酮特异性结合的抗体或片段；所述试剂1的pH值为9～10.5；所述试剂2包括以下浓度的各组分：0.1M～0.5M的第二缓冲液、0.2ug/mL
‑
0.8ug/mL的第二抗体、2ng/mL
‑
8ng/mL的化学发光剂，所述第二抗体和所述化学发光剂形成偶联化合物；所述第二抗体为抗复合物的抗体，所述复合物为所述醛固酮与所述第一抗体形成的免疫复合物，且所述第二抗体不单独结合所述醛固酮，所述第二抗体也不单独结合所述第一抗体；所述试剂2的pH值为6.0～9.5。2.根据权利要求1所述的醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠的粒径为50nm～500nm；所述磁珠与所述第一抗体的质量比为1000:10
‑
30；所述化学发光剂与所述第二抗体的质量比为5
‑
10：1000。3.根据权利要求1所述的醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述第二抗体为单克隆抗体；所述第一抗体为单克隆抗体；所述片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、Fv、dsFv和单域抗体中的一种或两种以上。4.根据权利要求1所述的醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光剂为吖啶酯。5.根据权利要求1～4中任意一项所述的醛固酮化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述试剂1还包括以下浓度的各组分：0.5wt％～3wt％的第一稳定剂、0.05wt％～0.5wt％的第一表面活性剂和0.01wt％～0.02wt％的第一防腐剂；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭子燊，王兴红，颜栋，
申请(专利权)人：深圳市科曼医疗设备有限公司，
类型：发明
国别省市：