NGS制造技术

本发明专利技术公开了一种

【技术实现步骤摘要】
NGS单链文库、其构建方法及构建试剂盒


[0001]本专利技术涉及测序文库构建
，具体而言，涉及一种
NGS
单链文库
、
其构建方法及构建试剂盒
。

技术介绍

[0002]在
DNA
检测过程中，
DNA
片段的利用效率都是第一重要的问题
。
在双链建库时需要末端补平和加
A
，由于加
A
和磷酸化效率的限制，所以很难达到理想的文库转化效率
。
在实际操作过程中，通常只有大概
10
‑
50
％的文库能够被转化成有效文库
。
其中，超声打断的
FFPE
样本转化效率最低，转化效率一般在
10
‑
20
％；
cfDNA
和
PCR
片段的文库转化效率比较理想，在
20
‑
50
％
。
所以在比较重要的
DNA
检测过程中需要更有效的建库方案解决文库转化效率低的问题
。
[0003]目前，在肿瘤的早期诊断和早期筛查中
DNA
的甲基化是重要的生物标志物信号
。
由于这种标志物信号要用亚硫酸氢盐转化，而亚硫酸氢盐在处理时会产生
DNA
损伤，所以目前用的比较多的是
Swift
公司的专利
(CN_104395480_B)
的单链建库产品
。
虽然这个专利解决了部分问题，单加尾可以解决建库效率提升的问题，但是还不是效率最高的方法，因为只有一端是单加尾连接，另一端还是双链连接
。
在解决连接效率方面燃石用了一种单加尾后的反复二链扩增后的第二链单加尾连接
(CN_110892097_A)。
[0004]虽然
Swift
和燃石解决了建库过程中的文库转化效率问题，但是没有关注加接头可能会影响甲基化信号检测准确性的问题，由于甲基化检测的评估是用
C
转化成
T
来评估的，所以在加接头被测链有这个两个碱基都会影响分析
。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在提供一种
NGS
单链文库
、
其构建方法及构建试剂盒，以提高甲基化检测的准确性或测序质量
。
[0006]为了实现上述目的，根据本专利技术的一个方面，提供了一种
NGS
单链文库的构建方法
。
该构建方法包括：
S1
，当
NGS
单链文库为甲基化测序文库时，待测目的片段被测链端加
G
尾和
/
或
A
尾；或当
NGS
单链文库为非甲基化测序文库时，待测目的片段被测链端加
C
尾和
/
或
T
尾；
S2
，将测序文库接头与
S1
中获得到的被测链端加尾的待测目的片段连接完成
NGS
单链文库的构建
。
[0007]进一步地，
NGS
单链文库的构建采用双加尾的方式
。
[0008]进一步地，当测序平台为
Illumina
测序平台时，
NGS
单链文库为甲基化测序文库，待测目的片段被测链端
P5
至
P7
方向5’
至3’
加
G
尾和
A
尾，
A
尾和
G
尾，
G
尾和
G
尾，或
A
尾和
A
尾；优选为
G
尾和
A
尾，或
G
尾和
G
尾；
NGS
单链文库为非甲基化测序文库，待测目的片段被测链端
P5
至
P7
方向5’
至3’
加
C
尾和
T
尾，或
T
尾和
C
尾
。
[0009]进一步地，当测序平台为
MGI
测序平台时，
NGS
单链文库为甲基化测序文库，待测目的片段被测链端标签2到标签1的方向5’
至3’
加
G
尾和
A
尾，
A
尾和
G
尾，
G
尾和
G
尾，或
A
尾和
A
尾；优选为
G
尾和
A
尾，或
G
尾和
G
尾；其中，
AGTTNNNNNNNNNNCAAC
的
AGTT
‑‑‑
CAAC8
个碱基中间的
10
个碱基是标签2；
ACAANNNNNNNNNNCTGA
的
ACAA
‑‑‑
CTGA8
个碱基中间的
10
个碱基是标签1，具体的，标签2可以是
CN111910258
中的标签2编号序列，标签1可以是
CN111910258
中的标签1编号序列；
NGS
单链文库为非甲基化测序文库，待测目的片段被测链端标签2到标签1的方向5’
至3’
加
C
尾和
T
尾，或
T
尾和
C
尾
。
[0010]进一步地，
G
尾
、A
尾
、C
尾或
T
尾的长度为5～
25
个碱基
。
[0011]进一步地，
S1
包括，通过末端加尾辅助子在待测目的片段被测链端加尾
。
[0012]根据本专利技术的另一个方面，提供一种
NGS
单链文库
。
该
NGS
单链文库由上述任一种
NGS
单链文库的构建方法构建而成
。
[0013]根据本专利技术的再一个方面，提供一种
NGS
单链文库构建试剂盒
。
该
NGS
单链文库构建试剂盒包括：末端加尾辅助子
。
[0014]进一步地，当测序平台为
Illumina
测序平台时，
NGS
单链文库为甲基化测序文库，末端加尾辅助子包括在
P7
端加
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
NGS
单链文库的构建方法，其特征在于，包括：
S1
，当所述
NGS
单链文库为甲基化测序文库时，待测目的片段被测链端加
G
尾和
/
或
A
尾；或当所述
NGS
单链文库为非甲基化测序文库时，待测目的片段被测链端加
C
尾和
/
或
T
尾；
S2
，将测序文库接头与
S1
中获得到的被测链端加尾的所述待测目的片段连接完成所述
NGS
单链文库的构建
。2.
根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述
NGS
单链文库的构建采用双加尾的方式
。3.
根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，当测序平台为
Illumina
测序平台时，所述
NGS
单链文库为甲基化测序文库，所述待测目的片段被测链端
P5
至
P7
方向5’
至3’
加
G
尾和
A
尾，
A
尾和
G
尾，
G
尾和
G
尾，或
A
尾和
A
尾；优选为
G
尾和
A
尾，或
G
尾和
G
尾；所述
NGS
单链文库为非甲基化测序文库，所述待测目的片段被测链端
P5
至
P7
方向5’
至3’
加
C
尾和
T
尾，或
T
尾和
C
尾
。4.
根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，当测序平台为
MGI
测序平台时，所述
NGS
单链文库为甲基化测序文库，所述待测目的片段被测链端标签2到标签1的方向5’
至3’
加
G
尾和
A
尾，
A
尾和
G
尾，
G
尾和
G
尾，或
A
尾和
A
尾；优选为
G
尾和
A
尾，或
G
尾和
G
尾；其中，
AGTTNNNNNNNNNNCAAC
的
AGTT
‑‑‑
CAAC8
个碱基中间的
10
个碱基是标签2；
ACAANNNNNNNNCTGA
的
ACAA
‑‑‑
CTGA8
个碱基中间的
10
个碱基是标签1；所述
NGS
单链文库为非甲基化测序文库，所述待测目的片段被测链端标签2到标签1的方向5’
至3’
加
C
尾和
T
尾，或
T
尾和
C
尾
。5.
根据权利要求1至4中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述
G
尾
、A
尾
、C
尾或
T
尾的长度为5～
25
个碱基
。6.
根据权利要求1至4中任一项所述的构建方法，其特征在于，所述
S1
包括，通过末端加尾辅助子在所述待测目的片段被测链端加尾
。7.
一种
NGS
单链文库，其特征在于，由权利要求1至6中任一项所述的
NGS
单链文库的构建方法构建而成
。8.
一种
NGS
单链文库构建试剂盒，其特征在于，包括：末端加尾辅助子
。9.
根据权利要求8所述的
NGS
单链文库构建试剂盒，其特征在于，当测序平台为
Illumina
测序平台时，
NGS
单链文库为甲基化测序文库，所述末端加尾辅助子包括在
P7
端加
G
尾的末端加尾辅助子

【专利技术属性】
技术研发人员：胡玉刚，章明晔，肖力，
申请(专利权)人：纳昂达南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：