一种创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法技术

本发明专利技术公开了一种创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法，涉及生物医药技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法
。

技术介绍

[0002]半月板损伤是临床常见的疾病，半月板损伤的程度与关节软骨表面增加的应力呈正比，半月板损伤后可引起软骨表面单位应力增加，进而导致继发性骨关节炎
。
构建半月板损伤致创伤性膝骨关节炎模型能够更好地研究半月板损伤导致膝骨关节炎的致病机制
、
炎症发展进程
、
关节病理性改变，以及提出更好的治疗方案
。
[0003]目前，现有报道的半月板损伤致关节炎模型，主要采用手术切除半月板诱导的，优点是完整切除半月板，关节炎症反应较重，但其有人为手术切开关节软组织，造成过多的额外损伤，而且与运动导致半月板损伤发病机制存在一定的差异，未能较好的复制临床上半月板损伤致关节炎的动物模型
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供简易创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法，更好地构建与临床上发病机制相似的半月板损伤致创伤性膝骨关节炎模型，研究半月板损伤导致膝骨关节炎的致病机制
、
炎症发展进程
、
关节病理性改变，以及提出更好的治疗方案
。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，包括以下步骤：
[0006]S1.
在动物造模时，适应性饲养1周，将造模兔称质量后，按
>3.5ml/kg
剂量腹腔注射
10
％水合氯醛溶液将实验兔麻醉；
[0007]S2.
待完全麻醉后，剪刀于右侧膝关节内侧附近备皮，显露皮肤后，消毒右侧膝关节内侧皮肤；
[0008]S3.
定位内侧膝眼
(
即髌骨下方与髌韧带内侧凹陷中
)
，于内侧膝眼下
0.5cm
处采用小针刀针刃纵向进针破坏半月板前角
(
入针后即有阻力，若无阻力则针尖进入关节腔，需退针重新调整角度
)
；
[0009]S4.
造模完毕后，退出小针刀，棉签按压针眼止血；
[0010]S5.
术后不固定患肢，自由活动，1周后开始进行驱赶运动，共计造模时间为6周
。
[0011]优选地，所选择实验动物为雌性日本长耳大白兔，体质量为
(2.0
±
0.5)kg。
[0012]优选地，所选择小针刀直径规格为
0.35mm
～
1.2mm
，小针刀进针深度为
2mm
～
8mm。
[0013]优选地，所选择小针刀进针角度
(
即针尖与髌韧带的夹角
)
为
40
°
～
50
°
。
[0014]优选地，造模过程中所需驱赶运动频次为每周7次
(
即每日1次
)
，造模过程中所需驱赶运动每天时间为5分钟～
40
分钟
。
[0015]一种创伤性膝骨关节炎模型的构建评价方法，包括以下步骤：
[0016]S1.
在建立模型结束时，取兔血清进行炎性指标检测；
[0017]S2.
切下术侧兔膝关节，去除皮肤，放置中性福尔马林固定2天；
[0018]S3.
制作成切片，通过显微镜观察膝关节病理变化，并进行
Mankin's
和
OOCHAS
病理评分；观察血清
IL
‑1β
、
血清
TNF
‑
ɑ
含量
、
滑膜组织
MMP
‑
13、iNOS
蛋白表达量
、
膝关节软骨
collagenⅡ免疫组化表达的变化
。
[0019]优选地，病理评分人员选择为3名～5名，膝关节
Mankin's
病理评分标准为6分～9分，膝关节
OOCHAS
病理评分标准为
12
分～
18
分
。
[0020]优选地，血清
IL
‑1β
和
TNF
‑
ɑ
含量的测定高于阴性样本平均值，且高于平均值2倍
。
[0021]优选地，膝关节滑膜组织
MMP
‑
13
和
iNOS
蛋白表达量高于阴性样本平均值，且高于平均值2倍
。
[0022]优选地，膝关节软骨组织
collagenⅡ阳性表达低于阴性样本平均值，且低于平均值2倍
。
[0023]与相关技术相比较，本专利技术提供的简易创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法具有如下有益效果：
[0024]本专利技术提供简易创伤性膝骨关节炎模型的构建及评价方法，通过驱动运动进行造模，造模起第2周到第6周进行驱赶运动
(
相当于驱赶运动5周
)
，该方法不仅能够短时间成功建立模型，而且稳定性好，与临床发病高度相似
。
附图说明
[0025]图1为本专利技术的构建方法流程；
[0026]图2为本专利技术兔血清
IL
‑1β
含量测定结果；
[0027]图3为本专利技术兔血清
TNF
‑
ɑ
含量测定结果；
[0028]图4为本专利技术兔滑膜组织
MMP
‑
13
蛋白表达量测定结果；
[0029]图5为本专利技术兔滑膜组织
iNOS
蛋白表达量测定结果；
[0030]图6为本专利技术兔膝关节软骨番红固绿染色观察结果；
[0031]图7为本专利技术兔膝关节软骨甲苯胺蓝染色观察结果；
[0032]图8为本专利技术兔膝关节
Mankin's
病理评分结果
(
番红固绿染色
)
；
[0033]图9为本专利技术兔膝关节
OOCHAS
病理评分结果
(
甲苯胺蓝染色
)
；
[0034]图
10
为本专利技术兔膝关节软骨组织
collagenⅡ免疫组织化学阳性表达结果
。
具体实施方式
[0035]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例；基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.
在动物造模时，适应性饲养1周，将造模兔称质量后，按
3.5ml/kg
剂量腹腔注射
10
％水合氯醛溶液将实验兔麻醉；
S2.
待完全麻醉后，剪刀于右侧膝关节内侧附近备皮，显露皮肤后，消毒右侧膝关节内侧皮肤；
S3.
定位内侧膝眼
(
即髌骨下方与髌韧带内侧凹陷中
)
，于内侧膝眼下
0.5cm
处采用小针刀针刃纵向进针破坏半月板前角
(
入针后即有阻力，若无阻力则针尖进入关节腔，需退针重新调整角度
)
；
S4.
造模完毕后，退出小针刀，棉签按压针眼止血；
S5.
术后不固定患肢，自由活动，1周后开始进行驱赶运动，共计造模时间为6周
。2.
根据权利要求1所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所选择实验动物为雌性日本长耳大白兔，体质量为
(2.0
±
0.5)kg。3.
根据权利要求1所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所选择小针刀直径规格为
0.35mm
～
1.2mm
，小针刀进针深度为
2mm
～
8mm。4.
根据权利要求1所述的一种创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：所选择小针刀进针角度
(
即针尖与髌韧带的夹角
)
为
40
°
～
50
°
。5.
根据权利要求1所述的一种半月板损伤致创伤性膝骨关节炎模型的构建方法，其特征在于：造模过程中所需驱赶运动频次为每周7次
(
即每日1次
)
，造模过程中所需驱赶运动每天时间为5分钟～
40...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁子聪，孙正梅，陈燕萍，江勇，陆瑞娜，曾升友，王恒，周枝，覃建锋，叶劲松，周美春，严国波，沈振华，朱胜章，
申请(专利权)人：黔南民族医学高等专科学校，
类型：发明
国别省市：