一种幼兔急性结肠炎模型的构建方法技术

本发明专利技术旨在开发一种能够重点针对急性结肠炎的核心症状，能够很好的进行急性结肠炎的药效评价的动物模型

【技术实现步骤摘要】
一种幼兔急性结肠炎模型的构建方法


[0001]本专利技术属于儿童疾病动物模型构建领域，具体涉及一种幼兔急性结肠炎模型的构建方法
。

技术介绍

[0002]儿童药品短缺已经严重影响儿童的健康
。
研发满足临床急需和儿童群体的药物成了迫切诉求，但幼龄个体与成年个体在药物代谢和药效方面不完全一致，采用成年动物模型获得的数据不足以支持幼龄个体用药评价，使得儿科药物的基础病理
、
药理研究受到很大限制，故而相关幼龄动物模型的建立尤其重要
。
为了研究某种疾病的发病机理或免疫反应原理，一般多在实验动物模型上进行，可以说免疫学的发展与实验动物科学的兴起有着密切的联系
。
目前，肠炎性疾病仍是世界性重大难题
。
肠炎根据病因不同，大体上可以分为细菌性肠炎
、
病毒性肠炎
、
抗生素相关性肠炎
、
炎症性肠病等
。
[0003]肠道是机体最大的免疫器官，能对进入肠道的病原体进行有效的免疫应答，是机体抵抗外来入侵物的第一道防线，而且还是机体进行全身性免疫功能调节的场所
。
肠道是与外界相通的器官，每天都会有不同的病原体
、
微生物入侵肠道，当机体发生应激
、
创伤或者机体抵抗力下降时，这些外来分子进入肠道，破坏肠粘膜屏障，使肠绒毛变短或者消失，肠上皮细胞坏，导致炎性细胞大量聚集，释放出大量的促炎因子如
IL
‑
6、IL
‑
I
β
和
TNF
‑
α
等，这些炎性因子能使巨噬细胞发生趋化作用，进一步合成环氧化酶，导致动物肠道炎症的发生，进而导致腹痛
、
腹泻
、
便血的发生
。
[0004]新生儿坏死性小肠结肠炎
(necrotizing enterocolitis
，
NEC)
是新生儿童监护病房常见的胃肠道急症
。
常用的结肠炎疾病研究
/
药效评价实验动物模型为对健康的实验动物采用化学刺激法
、
免疫法
、
病原菌诱导法
、
放射线诱导法
、
外科手术法等诱导产生肠道溃疡灶和炎症反应
。
目前结肠炎动物模型中普遍采用的实验动物为大鼠，家兔
、
豚鼠和小鼠也偶有用之
。
三硝基苯磺酸
(TNBS)
诱导的结肠炎症是诱导结肠炎动物模型的经典方法
。Winston
等采用出生后
10
天的大鼠通过插入远端结肠
2cm
处给予
0.2mL 130mg/kg TNBS
建立新生儿结肠炎模型
。
该方法无需麻醉，但在给予
TNBS
期间使动物保持头朝下的位置约
2min
，并保持肛门闭合
1min
以防止
TNBS
溶液泄漏
。Ginzel
等采用出生后
3d
的幼龄小鼠进行
LPS+
缺氧
+
冷刺激和右旋糖酐硫酸酯钠
+
缺氧
+
冷刺激两种方式造模，研究结果显示后者造模后的动物体重下降
、
炎症因子和
NEC
样肠道损伤增加更明显
。Nguyen
等采用出生后
4d
幼龄小鼠腹腔注射
109CFU/kg
表皮葡萄球菌建立
NEC
模型
。Liu
等采用新生小鼠作为研究对象，通过每天4次以配方奶喂养新生小鼠，并暴露在缺氧和冷刺激的环境下，连续
4d
后成功建立
NEC
模型
。
该模型的优点简单经济，可操作性强，但成模率低
。Jensen
等采用孕猪
106d
早产幼龄猪后人工喂养8‑
9d
建立
NEC
模型
。
除此之外，还有恶唑酮
(Oxazolone)
诱导结肠炎造模方法，以及葡聚糖硫酸钠
(DSS)
诱导结肠炎造模方法
。Shim
等在最近的一项豚鼠模型研究中，用高剂量
(109CFU/ml)
的
S.flexneri 2a
或
5a
，通过口服途径使豚鼠出现了典型的细菌性痢疾的症状
。
王璞等利用牛源
A
型产气荚膜梭菌
C987
株
(8.0x 106CFU/ml)
，采用皮下注射接种的方
式，建立了
A
型产气荚膜梭菌小鼠感染模型
。
但以上造模方法均仍存在造模不稳定
、
成功率不高等缺点
。
因此，亟需一种操作简便且过程易控
、
成本较低
、
可靠稳定的急性结肠炎动物模型构建方法
。

技术实现思路

[0005]本专利技术在于克服上述现有技术存在的缺陷，提供一种物化诱导急性结肠炎的幼兔模型的建立方法，通过该方法建立幼兔模型，可使动物的死亡率降低为零，但幼兔模型的病理与人类急性结肠炎表现相同
。
本专利技术旨在开发一种能够重点针对急性结肠炎的核心症状，能够很好的进行急性结肠炎的药效评价的动物模型
。
本专利技术通过物理化学性诱导构建的急性结肠炎幼兔模型在诱发急性结肠炎经典症状，以及结肠组织隐窝发生萎缩
、
杯状细胞数量减少
、
中性粒细胞浸润
、
黏膜下层水肿等急性结肠炎伴随症状上均表现出较高的成功率和稳定性
。
本专利技术为药效评价提供了可靠
、
可控的动物模型，可用于急性结肠炎治疗药物的药效评价
。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]一种幼兔急性结肠炎模型的构建方法，其特征在于，包括以下歩骤：
[0008]1、
直肠注射：选择
35
日龄的体重为
700g
左右的新西兰白兔，适应性饲养两周；建模共持续
30
天
。
从建模第1天开始，对兔子直肠注射橄榄油
、
脂多糖
、
硝酸甘油，每6天注射一次，共注射5次，每次的注射剂量为：橄榄油
12mg/kg、
脂多糖
8mg/kg、
硝酸甘油
1mg/kg
；
[0009]2、
冷热刺激：在建模周期内每天上午将兔子置于
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种幼兔急性结肠炎模型的构建方法，其特征在于，包括以下歩骤：
(1)、
直肠注射：选择
35
日龄的体重为
700g
左右的新西兰白兔，适应性饲养两周；建模共持续
30
天
。
从建模第1天开始，对兔子直肠注射橄榄油
、
脂多糖
、
硝酸甘油，每6天注射一次，共注射5次，每次的注射剂量为：橄榄油
12mg/kg、
脂多糖
8mg/kg、
硝酸甘油
1mg/kg
；
(2)、
冷热刺激：在建模周期内每天上午将兔子置于
35℃
恒温箱内1小时，然后取出兔子并立刻向兔子喷洒
4℃
凉水
10
分钟；
(3)、
游泳刺激：在建模周期内每天下午强迫兔子游泳1小时；
(4...

【专利技术属性】
技术研发人员：李远哲，段勇涛，杨德彬，
申请(专利权)人：河南省儿童医院郑州儿童医院，
类型：发明
国别省市：