一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA、组合物及应用制造技术

为克服现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，提供一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同源性的siRNA。同时，本发明专利技术还公开了上述抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA的组合物及应用。本发明专利技术提供的抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，可同时沉默人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中LOC157273基因，解决现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，使治疗药物的药效和药代动力学作用得到验证，从而促进T2DM治疗新药开发。发。发。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA、组合物及应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA、组合物及其应用。

技术介绍

[0002]II型糖尿病(Type 2Diabetes Mellitus，T2DM)是多基因遗传性复杂病，由遗传因素及环境因素共同作用而形成；目前由于对其病因和发病机制仍然认识不足，现有干预手段依然以控制血糖水平为主，一般多采用口服降糖药物以及胰岛素治疗，尤其是胰岛素，是作为T2DM后期治疗的常见选择，糖原的合成是胰岛素降低血糖水平的一个重要方式。在进食引起血糖水平高时，胰岛素可以通过激活AKT，进而磷酸化并失活糖原合成酶激酶(GSK3)，使糖原合成酶(GS)的磷酸化水平下降、活性上升，促进糖原的生成，进而抑制葡萄糖的合成；胰岛素初始阶段能起到很好控糖效果，但到后期机体逐渐对胰岛素产生耐药性药效降低，且并不能达到很好的治疗效果；
[0003]越来越多的证据证明lncRNA在慢性非感染性疾病中发挥重要的作用，相关研究报道证明LOC157273(8p23.1)参与调节血糖以及血脂胆固醇，在II型糖尿病患者当中，蛋白PPP1R3B作为蛋白磷酸酶靶向亚基，距离它最近的变体rs4841132距离仅仅只有175kb，当LOC157273被沉默后，可以负调控蛋白PPP1R3B，进而调节(抑制)葡萄糖的合成，以此为靶点进行合成siRNA进行RNA干扰治疗T2DM以及开发T2DM新的治疗药物；
[0004]现有技术中有关于应用于人体肝脏LOC157273的siRNA，但不适用T2DM新药临床应用前的大型动物实验，大型动物实验是药物临床前评价的主要实验对象，灵长类作为大型动物实验的重要研究对象，与人类遗传物质存在部分同源而非完全同源，因此应用于人体肝脏LOC157273的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物实验，导致其药效和药代动力学作用难以得到验证，从而影响治疗II型糖尿病的新药开发。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，提供一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA。
[0006]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
[0007]本专利技术提供一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同源性的siRNA。
[0008]可选的，所述siRNA的正义链的3'末端和/或所述siRNA的反义链的3'末端加上两个呈单链悬挂结构的脱氧核糖核苷酸dT。
[0009]一方面，本专利技术提供一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的组合物，包括所述的siRNA，或可表达所述siRNA的表达体系。
[0010]可选的，所述组合物还包括用于递送所述siRNA的载体。
[0011]可选的，所述载体包括脂质体。
[0012]可选的，所述组合物还包括具有糖尿病预防或治疗作用的药物活性成分。
[0013]可选的，所述药物活性成分包裹于所述脂质体载体中。
[0014]可选的，所述组合物还包括药学上可接受的辅料。
[0015]可选的，所述辅料包括缓冲剂、乳化剂、悬浮剂、稳定剂、防腐剂、生理食盐、赋形剂、填充剂、凝结剂与调和剂、界面活性剂、扩散剂和消泡剂中的一种或多种。
[0016]另一方面，本专利技术提供一种组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。
[0017]可选的，所述糖尿病包括II型糖尿病。
[0018]本申请提供的抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，所述正义链及反义链包括靶向人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中LOC157273基因的核苷酸序列，针对人与动物LOC157273基因非完全同源部分设计siRNA，使该siRNA可同时沉默人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中LOC157273基因，解决现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，在T2DM新药实验中更加方便的针对不同物种的相同基因；另外，本申请提供的siRNA沉默LOC157273基因的位置处于蛋白PP1R3B的上游不表达的长链非编码基因，相比直接过表达目的基因，副产物少即副作用小；本申请提供的siRNA为T2DM治疗及新药临床应用提供依据。
附图说明
[0019]图1是本专利技术提供的siRNA在HepG2细胞中转染24h效果检测图；
[0020]图2是本专利技术提供的siRNA在HepG2细胞中转染48h效果检测图；
[0021]图3是本专利技术提供的siRNA在原代猴肝细胞中转染96h对PPP1R3B蛋白表达的检测图；
[0022]图4是本专利技术提供的siRNA在原代猴肝细胞中转染96h对LOC157273基因沉默效果检测图；
[0023]图5是本专利技术提供的siRNA在HepG2细胞中转染对LOC157273基因沉默效果的qPCR检测图；(M Marker、B Blank、co人猴共用siRNA)
[0024]图6是本专利技术提供的siRNA在原代猴肝细胞中转染对PPP1R3B蛋白表达的qPCR检测图；(M Marker、B Blank、co人猴共用siRNA)
具体实施方式
[0025]为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0026]本专利技术提供一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同
源性的siRNA。
[0027]具体的，本申请提供的抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，所述正义链及反义链包括靶向人肝脏细胞和灵长类动物肝脏细胞中LOC157273基因的核苷酸序列，与前期已公开的只针对人肝脏细胞LOC157273基因表达的siRNA相比，本申请提供的siRNA针对人与灵长类动物(食蟹猴)LOC157273基因非同源部分设计siRNA，使该siRNA可同时沉默人肝脏细胞和食蟹猴原代肝细胞中LOC157273基因，解决现有技术中应用于人体肝脏LOC157273基因的siRNA在临床试验中无法直接应用于灵长类动物T2DM实验的问题，使其治疗药物的药效和药代动力学作用得到验证，即本申请提供的siRNA为T2DM治疗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，其特征在于，包括正义链和与所述正义链对应的反义链，所述正义链选自“序列1”，所述反义链选自“序列2”，或与所述正义链和所述反义链序列具有80％以上同源性的siRNA。2.根据权利要求1所述的一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正义链的3'末端和/或所述siRNA的反义链的3'末端加上两个呈单链悬挂结构的脱氧核糖核苷酸dT。3.一种抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的组合物，其特征在于，包括如权利要求1～2任意一项所述的siRNA；或可表达权利要求1～2任意一项所述的siRNA的表达体系。4.根据权利要求3所述的抑制肝脏细胞中LOC157273基因表达的组合物，其特征在于，所述组合物还包括用于递送所述siRNA的载体。5.根据权利要求4所述的抑制肝脏细胞中LOC157273基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：王卫中，蔡林涛，张鹏飞，莱昂纳多，
申请(专利权)人：深圳市华元生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：