HBVDNA背景下选择性定量同源HBVRNA的引物探针组合、试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种HBV DNA背景下选择性定量同源HBV RNA的引物探针组合、试剂盒及方法。所述引物探针组合包含两条特异性引物、一条标签引物和一条特异性探针。本发明专利技术通过引入外源双链封闭子和选择合适的退火/延伸温度及引物探针设计，可实现DNA背景下同源RNA的定量检测，建立了HBV背景下HBV RNA定量的引物探针组合及其选择性RT

【技术实现步骤摘要】
HBV DNA背景下选择性定量同源HBV RNA的引物探针组合、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及病毒检测领域，更具体涉及一种HBV DNA背景下选择性定量同源HBV RNA的引物探针组合、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染严重威胁人身体健康。现有的抗HBV药物核苷(酸)类似物(NAs)和聚乙二醇干扰素(PEG
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IFN
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α)尚不能在短期内治愈慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B，CHB)。存在于肝组织内的共价闭合环状DNA(Covalently closed circularDNA，cccDNA)是HBV复制的源头，与慢性持续性感染和CHB难以治愈密切相关。但cccDNA的检测需要有创的肝穿活检，且检测方法不统一，临床难以开展。探索能够反映肝组织内cccDNA存在及转录活性的血清替代指标，以客观评价抗病毒疗效及判定合适的停药时机乃当下之亟需。
[0003]HBV RNA是肝细胞内cccDNA的直接转录体，其本质上是核衣壳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于HBV DNA背景下选择性定量同源HBV RNA的引物探针组合，其特征在于：包含两条特异性引物、一条标签引物和一条特异性探针；所述引物和探针序列如下：特异性上游引物Tag
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pgRNA
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OF：5'
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CCACACCAGCAAGCCCTCACGTAGCGAAGGTGTCTTTCGGAGTGTGGATTCGCACTCCT
‑
3'，特异性下游引物Tag
‑
pgRNA
‑
R：5'
‑
CCACACCAGCAAGCCCTCACGTAGCGAACCACCCACCCTAGATTGAGATCTTCTGCGAC
‑
3'，标签引物Tag：5'
‑
CCACACCAGCAAGCCCTCACGTAGCGAA
‑
3'，特异性探针pgRNA
‑
OP：5'
‑
FAM
‑
CTCGCC/iBHQ1dT/CGCAGACGAAGGTCTCAATCGCCGC
‑
BHQ1
‑
3'。2.如权利要求1所述的引物探针组合在制备用于HBV DNA背景下选择性定量同源HBV RNA的试剂盒中的应用。3.一种用于HBV DNA背景下选择性定量同源HBV RNA的试剂盒，其特征在于：包含权利要求1所述的引物探针组合。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含封闭子双链DNA，所述封闭子双链DNA的制备方法为：将浓度相同的寡核苷酸链DNA1与其互补链DNA2等体积混合，95℃变性2min，随后缓慢冷却至25℃，得到封闭子dsDNA；所述寡核苷酸链DNA1与其互补链DNA2序列如下：DNA1：5'
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CCACACCAGCAAGCCCTCGGTGGTGTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小龙，许海坡，蔡志雄，曾永毅，赵必星，汤优，
申请(专利权)人：福建医科大学孟超肝胆医院，
类型：发明
国别省市：