一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重制造技术

本申请提供了一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重qPCR引物探针组及其应用


[0001]本申请属于生物
，具体涉及一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组及其应用
。

技术介绍

[0002]产气荚膜梭菌
(Clostridiumperfringens)
是一种革兰氏阳性厌氧菌，广泛存在于自然界以及人和动物的胃肠道中，属于条件致病菌，可引起多种人和动物的全身性和胃肠道疾病
。
其能产生
20
余种毒素和水解酶，根据产生毒素的不同，产气荚膜梭菌主要分为7种毒素类型，不同的毒素基因型的产气荚膜梭菌对动物的致病机理不同，因此所引起的病程和发病症状也不相同
。
毒素被肠黏膜吸收并随血液循环扩散到多种组织器官，如心
、
肝
、
脾
、
肺
、
肾
、
膀胱
、
肠组织
、
淋巴和大脑等中，形成毒血症或败血症，使患病动物全身器官衰竭而死亡
。
该病病程短
、
发病急，死亡快为特点，四季均可发病，呈零星式散发或区域性流行
。
该菌引起的疾病已广泛分布于全国各地，对我国畜牧行业的发展形成了很大的困扰和严重的阻碍
。
[0003]多杀性巴氏杆菌
(Pasteurellamultocida,P.multocida)
是一种革兰阴性条件致病菌，能够感染多种宿主，包括人类
、
伴侣动物
、
牲畜和野生动物，是禽霍乱
、
牛和水牛及家兔出血性败血病的病原菌，该病的发病率和死亡率很高，往往会导致畜牧业巨大的经济损失
。
[0004]目前，对于产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的检测还是采用传统的细菌分离纯化及染色镜检，以及
16S rRNA
基因扩增和测序，这些传统方法在灵敏度
、
检测效率
、
重复性及成本等方面还有一定的欠缺，而实时荧光定量
PCR
技术已经成功应用于病原在诊断于检测，具有高速
、
自动化程度高
、
特异性强等优点
。
[0005]当产气荚膜梭菌
、
多杀性巴氏杆菌混合感染时，难以做出快速准确判断，因此提供一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
PCR
引物探针组，建立产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌多重
qPCR
检测方法，为实现快速诊断产气荚膜梭菌毒素基因分型和多杀性巴氏杆菌病及检测病原的荚膜血清学分型提供技术手段具有重要意义
。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术所要解决的第一技术问题是提供一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组；本专利技术所要解决的第二技术问题是提供一种产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
检测方法；本专利技术所要解决的第三技术问题是提供该产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组的应用
。
[0007]为解决上述问题，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]第一方面，一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组，序列分别如
SEQ ID NO.1
至
SEQ ID NO.30
所示
。
[0009]作为本专利技术的一种优选，一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组，包括：
[0010]用于检测产气荚膜梭菌的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.1
至
SEQ ID NO.15
所示；
[0011]用于检测多杀性巴氏杆菌的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.16
至
SEQ ID NO.30
所示
。
[0012]作为本专利技术的一种优选，一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组，包括：
[0013]用于检测产气荚膜梭菌的
Cpa
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.1
至
SEQ ID NO.3
所示；
[0014]用于检测产气荚膜梭菌的
Cpb
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.4
至
SEQ ID NO.6
所示；
[0015]用于检测产气荚膜梭菌的
Etx
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.7
至
SEQ ID NO.9
所示；
[0016]用于检测产气荚膜梭菌的
Itx
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.10
至
SEQ ID NO.12
所示；
[0017]用于检测产气荚膜梭菌的
Cpe
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.13
至
SEQ ID NO.15
所示；
[0018]用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
A
型的
hyaC
‑
hyaD
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.16
至
SEQ ID NO.18
所示；
[0019]用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
B
型的
bcbD
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.19
至
SEQ ID NO.21
所示；
[0020]用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
D
型的
dcbF
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.22
至
SEQ ID NO.24
所示；
[0021]用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
E
型的
ecbJ
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组，其特征在于，所述多重
qPCR
引物探针组的序列分别如
SEQ ID NO.1
至
SEQ ID NO.30
所示
。2.
根据权利要求1所述的同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组，其特征在于，包括：用于检测产气荚膜梭菌的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.1
至
SEQ ID NO.15
所示；用于检测多杀性巴氏杆菌的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.16
至
SEQ ID NO.30
所示
。3.
根据权利要求2所述的同时检测产气荚膜梭菌和多杀性巴氏杆菌的多重
qPCR
引物探针组，其特征在于，包括：用于检测产气荚膜梭菌的
Cpa
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.1
至
SEQ ID NO.3
所示；用于检测产气荚膜梭菌的
Cpb
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.4
至
SEQ ID NO.6
所示；用于检测产气荚膜梭菌的
Etx
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.7
至
SEQ ID NO.9
所示；用于检测产气荚膜梭菌的
Itx
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.10
至
SEQ ID NO.12
所示；用于检测产气荚膜梭菌的
Cpe
毒素基因型的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.13
至
SEQ ID NO.15
所示；用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
A
型的
hyaC
‑
hyaD
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.16
至
SEQ ID NO.18
所示；用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
B
型的
bcbD
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.19
至
SEQ ID NO.21
所示；用于检测多杀性巴氏杆菌荚膜血清
D
型的
dcbF
基因的上游引物
、
下游引物和探针，序列分别如
SEQ ID NO.22
至
SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建东，郭亚男，李知新，王晓亮，马青，高海慧，张久盘，于有利，宣晓龙，康晓冬，梁小军，
申请(专利权)人：宁夏农林科学院动物科学研究所宁夏草畜工程技术研究中心，
类型：发明
国别省市：